塞内卡病毒和口蹄疫病毒双重实时荧光定量PCR检测试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种鉴别塞内卡病毒(SVA)和口蹄疫病毒(FMDV)的双重实时荧光定量PCR检测试剂盒及其专用引物、TaqMan探针。本发明专利技术的试剂盒中含有两对引物和两条探针，引物和探针分别针对塞内卡病毒(SVA)和口蹄疫病毒(FMDV)保守基因区设计。本发明专利技术的试剂盒和检测方法操作简便、特异性强、敏感性高、重复性好，可以实现对塞内卡病毒和口蹄疫病毒准确定量，将在塞内卡病毒和口蹄疫病毒的检测及疫苗生产、例如疫苗生产过程中的质量监控和合理化配苗中发挥重要作用，应用前景广阔。

【技术实现步骤摘要】
塞内卡病毒和口蹄疫病毒双重实时荧光定量PCR检测试剂盒
本专利技术属于生物检测
中的兽医动物病原检测，特别涉及一种用于对塞内卡病毒和口蹄疫病毒进行定性、定量检测的双重实时荧光定量PCR检测试剂盒及其专用引物和TaqMan探针。
技术介绍
塞内卡病毒(SenecaVirusA，SVA)和口蹄疫病毒(Foot-and-MouthDiseaseVirus，FMDV)同属于小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)，都是一种无囊膜的单股正链RNA病毒，塞内卡病毒属于SenecaVirus病毒属的典型代表，与心病毒属(CardioVirus)最接近，而口蹄疫病毒属于口蹄疫病毒属病毒。塞内卡病毒是主要发生于猪的一种传染病，其临诊特征为感染猪只鼻部和口腔形成溃疡、厌食、跛行，导致新生仔猪急性死亡。早期塞内卡病例主要发生于育肥猪，鼻部、口部和蹄部的冠状带部可见水疱症状，但最近发现的一些塞内卡阳性病例发生于新生仔猪，症状为腹泻，无水疱病变，这些病例主要是通过对血清、粪便和不同组织进行PCR检测发现的。2002年在美国马里兰州的一家公司首次发现，2007年，一批从加拿大运往美国明尼苏达州的猪本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于对塞内卡病毒和口蹄疫病毒进行双重实时荧光定量PCR检测的引物和Taqman探针，其特征在于，包括：用于检测塞内卡病毒的上游引物(SVA‑F)和下游引物(SVA‑R)，上游引物(SVA‑F)的核苷酸序列如序列表中SED ID NO：1所示，下游引物(SVA‑R)的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：2所示；用于对塞内卡病毒进行实时荧光定量PCR检测的TaqMan探针(SVA‑P)，TaqMan探针(SVA‑P)的核苷酸序列如序列表中SED ID NO：3所示；用于检测口蹄疫病毒的上游引物(FMDV‑F)和下游引物(FMDV‑R)，上游引物(FMDV‑F)的核苷酸序列如序列表中SED ...

【技术特征摘要】
1.用于对塞内卡病毒和口蹄疫病毒进行双重实时荧光定量PCR检测的引物和Taqman探针，其特征在于，包括：用于检测塞内卡病毒的上游引物(SVA-F)和下游引物(SVA-R)，上游引物(SVA-F)的核苷酸序列如序列表中SEDIDNO：1所示，下游引物(SVA-R)的核苷酸序列如序列表中SEQIDNO：2所示；用于对塞内卡病毒进行实时荧光定量PCR检测的TaqMan探针(SVA-P)，TaqMan探针(SVA-P)的核苷酸序列如序列表中SEDIDNO：3所示；用于检测口蹄疫病毒的上游引物(FMDV-F)和下游引物(FMDV-R)，上游引物(FMDV-F)的核苷酸序列如序列表中SEDIDNO：5所示，下游引物(FMDV-R)的核苷酸序列如序列表中SEQIDNO：6所示；和用于对口蹄疫病毒进行实时荧光定量PCR检测的TaqMan探针(FMDV-P)，TaqMan探针(FMDV-P)的核苷酸序列如序列表中SEDIDNO：7所示；所述探针为经过荧光标记的，其5′端标记有报告荧光基团，3′端标记有淬灭荧光基团；且对两种病毒检测探针所标记的报告荧光基团不相同。2.根据权利要求1所述的引物和TaqMan探针，其特征在于：所述用于对塞内卡病毒进行实时荧光定量PCR检测的TaqMan探针(SVA-P)的5′端报告荧光基团为FAM，3′端荧光淬灭基团为TAMRA；用于对口蹄疫病毒进行实时荧光定量PCR检测的TaqMan探针(FMDV-P)的5′端报告荧光基团为ROX，3′端荧光淬灭基团为BHQ2；所述探针的3′端经磷酸化处理。3.用于对塞内卡病毒和口蹄疫病毒进行双重实时荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于：包括权利要求1或2所述的引物和TaqMan探针。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：使用所述试剂盒时的双重实时荧光定量PCR检测体系为：实时荧光定量一步法PCR反应液2×OneStepRT-PCRBufferIII12.5μL，TaKaRaExTaqHS0.5μL，PrimeScriptRTEnzymeMixII0.5μL，SVA-F(10μM)1.0μL，SVA-R(10μM)1.0μL，SVA-P(10μM)1μL，FMDV-F(10μM)1.0μL，FMDV-R(10μM)1.0μL，FMDV-P(10μM)1.5μL，RNA-freeH2O3.0μL，模板RNA2.0μL。5.权利要求1或2所述的引物和TaqMan探针在制备塞内卡病毒和口蹄疫病毒的检测试剂中的应用。6.权利要求3或4所述的试剂盒在对塞内卡病毒和口蹄疫病毒进行非疾病诊断目的的检测中的应用。7.根据权利要求5或6所述的应用，其特征在于：用于对塞内卡病毒和口蹄疫病毒进行定性、定量检测，包括以下步骤：1)建立标准曲线：将分别携带塞内卡病毒和口蹄疫病毒的检测基因的重组质粒p...

【专利技术属性】
技术研发人员：王秀明，陈君彦，武瑾贤，魏学峰，刘国英，关平原，范秀丽，张贵刚，王艳杰，刘建奇，
申请(专利权)人：金宇保灵生物药品有限公司，
类型：发明
国别省市：内蒙古,15