一种分泌硝呋索尔残留标志物单克隆抗体的杂交瘤细胞株制造技术

本发明专利技术公开了一种分泌硝呋索尔残留标志物单克隆抗体的杂交瘤细胞株，属于食品安全免疫检测领域。所述杂交瘤细胞株的保藏编号为：CGMCC No.14698，是将BALB/c小鼠用完全弗氏佐剂进行首次免疫，不完全弗氏佐剂进行4次加强免疫，不含佐剂的硝呋索尔残留标志物完全抗原进行1次冲击免疫，使得BALB/c小鼠获得免疫；将高效价低IC50的获得免疫的小鼠脾细胞通过PEG方法与小鼠骨髓瘤细胞融合，经过间接竞争ELISA筛选和三次亚克隆，得到的细胞株。此细胞株分泌的单克隆抗体，对硝呋索尔残留标志物具有较好的特异性和检测灵敏度(IC50值为2μg/L)可以用于食品中硝呋索尔残留标志物的残留检测。

【技术实现步骤摘要】
一种分泌硝呋索尔残留标志物单克隆抗体的杂交瘤细胞株
本专利技术涉及一种分泌硝呋索尔残留标志物单克隆抗体的杂交瘤细胞株，属于食品安全免疫检测领域。
技术介绍
硝呋索尔(Nifursol)，又称硝呋柳肼，属于硝基呋喃类抗菌药，国外常将它作为饲料添加剂用于预防和治疗家畜原虫感染。在使用过程中，硝呋索尔原药在动物体内会很快代谢成代谢产物3，5-二硝基水杨酸肼(3，5-Dinitrosalicylicacidhydrazide，DNSH)和5-硝基-2-糠酸，两者均可作为硝呋索尔的残留标志物，此类代谢物在动物体内能与蛋白紧密结合成稳定的结合态残留物，在体内存在相当长时间，且具有一定的毒性。因此，建立快速有效的检测美洛昔康硝呋索尔残留标志物的方法具有重要意义及市场价值。硝呋索尔是以代谢物形式在动物体内残留，残留水平低，基质复杂。目前，对于此类低残留水平的兽药残留测定多使用高灵敏度和高选择性的技术，主要有气相色谱法(GC)、液相色谱法(HPLC)、液质联用法(LC-MS)、液相二级质谱(LC-MS/MS)等仪器方法，但是，这些方法均存在操作繁琐，耗时，费用比较贵等缺点，不能实现大量样品的快速检测。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分泌硝呋索尔残留标志物单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株已于2017年09月05日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.14698。

【技术特征摘要】
1.一种分泌硝呋索尔残留标志物单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株已于2017年09月05日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNo.14698。2.如权利要求1所述的一种分泌硝呋索尔残留标志物单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法，其特征在于，包含如下步骤：步骤1：制备硝呋索尔残留标志物(DNSH)半抗原，通过DNSH半抗原合成DNSH完全抗原，将DNSH完全抗原与等量油剂混合，再加入乳化剂，乳化后得到不完全弗氏佐剂，在不完全弗氏佐剂中加入分枝杆菌得到完全弗氏佐剂；所述油剂为石蜡油或植物油；所述乳化剂为羊毛脂或叶吐温80；所述分枝杆菌包含死卡苗；步骤2：将得到的弗氏佐剂通过背部皮下注射，注射进入BALB/c小鼠体内进行多次免疫，首次免疫采用完全弗氏佐剂，加强免疫采用不完全弗氏佐剂；步骤3：将经过上述免疫过程的小鼠进行采血，通过间接ELISA检测小鼠血清免疫效价和免疫抑制能力，删选出血清中DNSH抗体含量高的获得免疫的小鼠；步骤4：将删选出的小鼠用不完全弗氏佐剂再进行最后一次加强免疫，然后通过腹腔注射进行冲击免疫，冲击免疫采用不含弗氏佐剂的DNSH完全抗原进行；步骤5：将进行冲击免疫后的BALB/c小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞融合，将融合的细胞通过培养基培养，利用ic-ELISA检测阳性细胞孔，并进一步利用ic-ELISA测定阳性细胞孔的抑制效果，通过有限稀释法对有最好抑制的阳性细胞孔进行亚克隆，最终筛选出获得能分泌硝呋索尔残留标志物单克隆抗体的杂交瘤细胞株；所述步骤1中硝呋索尔残留标志物半抗原的分子式如下：所述步骤1中硝呋索尔残留标志物完全抗原的分子式如下：3.如权利要求1所述的一种分泌硝呋索尔残留标志物单克隆抗体的杂交瘤细胞株或权利要求2所述的一种分泌硝呋索尔残留标志物单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法在制备硝呋索尔残留标志物单克隆抗体方面的应用。4.一种硝呋索尔残留标志物半抗原，其特征在于，所述硝呋索尔残留标志物半抗原的分子式如下：5.如权利要求4所...

【专利技术属性】
技术研发人员：匡华，吴爱红，胥传来，徐丽广，马伟，刘丽强，吴晓玲，宋珊珊，胡拥明，
申请(专利权)人：江南大学，无锡迪腾敏生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32