【技术实现步骤摘要】
一种饮用水中总大肠菌群的快速检测方法
本专利技术涉及一种饮用水总大肠菌群的快速检测方法，属于水质检测分析领域。
技术介绍
总大肠菌群系指一群需氧及兼性厌氧的，在37℃生长时能使乳糖发酵，在24h内产酸产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌。由于该类菌群是人和温血动物体内常见肠道菌，若水体检出该类菌，说明水体受到了人或动物的粪便直接或间接地污染。对人体健康具有潜在危害性，具有引起包括各种消化道传染病的可能性。大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小，是饮用水和水源水的一个重要的卫生学指标。《生活饮用水卫生标准生活饮用水标准检验方法》(GB/T5750-2006)中总大肠菌群的检测方法包括多管发酵法、滤膜法、酶底物法。其中多管发酵法需72h检测阳性结果，滤膜法需48h检测阳性结果，酶底物法也需24h。三种方法均存在以下问题：(1)检测时间长，而且操作步骤繁琐；(2)都只能检测活体总大肠菌群，对受损状态的菌体无法分辨检测，而受损状态的细菌在条件适宜时，会自我修复后恢复致病性，重新造成饮用水的微生物污染。因此，传统总大肠菌群检测方法，具有局限性和不完全性...
【技术保护点】
1.一种饮用水中总大肠菌群的快速检测方法，其特征在于，使用大肠埃希氏标准菌株制备阳性对照样品，染色后通过流式细胞术分析，设置阈值、圈定总大肠菌群区域门；待测样品前处理后进行流式细胞术分析，根据阳性对照来确定参数计算样品中总大肠菌的细胞活性和数量；具体方法步骤如下：(一)阳性对照样品菌悬液区域门参数设置(1)制备阳性对照样品菌悬液：以大肠埃希氏菌为标准菌株，接入已灭菌的LB肉汤培养液中，37℃培养16‑20h，8000rpm/min离心5min，收集菌体加入1mLPBS缓冲液混匀，制成大肠埃希氏菌悬液并进行计数；根据计数结果以PBS缓冲液为稀释液，通过1:10、1:100梯度...
【技术特征摘要】
1.一种饮用水中总大肠菌群的快速检测方法，其特征在于，使用大肠埃希氏标准菌株制备阳性对照样品，染色后通过流式细胞术分析，设置阈值、圈定总大肠菌群区域门；待测样品前处理后进行流式细胞术分析，根据阳性对照来确定参数计算样品中总大肠菌的细胞活性和数量；具体方法步骤如下：(一)阳性对照样品菌悬液区域门参数设置(1)制备阳性对照样品菌悬液：以大肠埃希氏菌为标准菌株，接入已灭菌的LB肉汤培养液中，37℃培养16-20h，8000rpm/min离心5min，收集菌体加入1mLPBS缓冲液混匀，制成大肠埃希氏菌悬液并进行计数；根据计数结果以PBS缓冲液为稀释液，通过1:10、1:100梯度稀释法，制成终浓度为105-107cells/mL的阳性对照样品菌悬液；(2)活体细胞区域门的圈定：取步骤(1)制备的阳性对照样品菌悬液中，加入荧光染料和绝对计数微球进行染色，然后进行流式细胞术分析，按照以下步骤圈门：第一步，建立FSC-SSC散射光点图和等高线图，利用等高线图中的等高线分布，在FSC-SSC散射光点图中，设置FSC域值为350-500、SSC域值为300-330，圈出总大肠菌群区域门和Beads区域门；第二步，建立FITC-PE-TexasRed荧光散点图，在Threshold参数设置中，设置FITC阈值大于200，排除大颗粒、非生物碎屑的干扰；第三步，设置FITC阈值为450-500、PE-TexasRed阈值为580-620；第四步，将FITC-PE-TexasRed荧光散点图中，FITC单阳区域细菌，圈定为活体细胞区域门；(3)死亡细胞区域门的圈定：取步骤(1)制备的阳性对照样品菌悬液灭活，加入荧光染料和绝对计数微球进行染色，然后进行流式细胞术分析，在步骤(2)第四步基础上，将FITC-PE-TexasRed荧光散点图中，PE-TexasRed单阳区域细菌，圈定为死亡细胞区域门；(4)受损细胞区域门的圈定：在完成步骤(2)、(3)的FITC-PE-TexasRed荧光散点图中，将FITC和PE-TexasRed双阳区域的剩余细菌，圈定为受损细胞区域门；(二)待测样品的处理采集待测样品，经灭菌的滤膜过滤后，取PBS缓冲液，冲洗滤膜至无菌管，经300目筛网过滤得到待测样品浓缩液；...
【专利技术属性】
技术研发人员：贾瑞宝，孙韶华，石近淼，逯南南，许燕，王明泉，
申请(专利权)人：山东省城市供排水水质监测中心，
类型：发明
国别省市：山东,37
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