一株银杏内生真菌的代谢产物产品及其在抗菌中的应用制造技术

本公开涉及一株银杏内生真菌的代谢产物产品及其在抗菌中的应用，所用的真菌为银杏内生真菌层生镰刀菌(Fusarium proliferatum)DZHQ1，保藏编号为CGMCC No.14983，已于2017年11月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，经发酵培养和提取分离获得银杏内生真菌的代谢产物。本公开的银杏内生真菌的代谢产物在抗大肠杆菌和/或金黄色葡萄球菌活性检测中显示了较明显的抑制作用，具有制备新的抗菌产品的潜在用途。

【技术实现步骤摘要】
一株银杏内生真菌的代谢产物产品及其在抗菌中的应用
本公开属于微生物药物领域，具体涉及一株银杏内生真菌的代谢产物产品及其在抗菌中的应用。
技术介绍
这里的陈述仅提供与本公开有关的背景信息，而不必然构成现有技术。大肠杆菌是典型的革兰氏阴性杆菌，其引起的大肠杆菌病是一种常见的疾病，兽医临床上大肠杆菌造成的危害十分严重，一年四季均可致病，一直是困扰养殖业发展的常见病、多发病，给养禽业造成了严重的经济损失。在治疗过程中容易产生耐药性，且耐药谱广，耐药机制复杂，给养禽业预防和治疗该病带来了很大困难。因此寻找一种对抗大肠杆菌有效的成分成为近年来的研究热点。金黄色葡萄球菌是医院内、外感染最常见的病原菌之一，中国细菌耐药监测网多年来在全国数十所医院获得的临床分离细菌菌株表明，金黄色葡萄球菌占临床致病菌前5位。该菌可以引起严重肺炎、脑膜炎以及骨关节感染、心内膜炎和菌血症。尤其是烧伤创面感染、急性肝功能衰竭和血源性肾炎等疾病患者易感染该菌。近年来，对一些药物敏感性降低的金黄色葡萄球菌的出现，将使人类面临某些感染无药可治的局面。因此，寻找一种对抗金黄色葡萄球菌有效的成分具有重要意义。CN108102928A《一株银杏内生真菌及其应用》公开了一株从银杏树皮中分离到了具有抗宫颈癌活性的银杏内生真菌层生镰刀菌(Fusariumproliferatum)DZHQ1，保藏编号为CGMCCNo.14983，其还公开了该内生真菌的发酵培养液、发酵培养液的乙酸乙酯提取物针对宫颈癌具有治疗活性。进一步开展银杏植物内生真菌活性物质的研究，对开发我国银杏植物药用内生真菌资源及新的微生物药物均具有重要的理论意义和潜在的应用价值。
技术实现思路
针对
技术介绍
，本公开对CN108102928A《一株银杏内生真菌及其应用》作进一步研究和探索，提供了一株银杏内生真菌的代谢产物产品及其在制备抗菌产品中的应用。本公开具体采用以下技术方案：在本公开的第一个方面，提供了一株银杏内生真菌的代谢产物产品，其特点是：所用的真菌为银杏内生真菌层生镰刀菌(Fusariumproliferatum)DZHQ1，保藏编号为CGMCCNo.14983，已于2017年11月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，经发酵培养和乙酸乙酯提取后得到发酵培养液的乙酸乙酯提取物，然后再经过甲醇或水溶解，溶解后即获得银杏内生真菌的代谢产物产品。在本公开的第二个方面，提供了一株银杏内生真菌的代谢产物产品的制备方法，该方法包括：所用的真菌为银杏内生真菌层生镰刀菌(Fusariumproliferatum)DZHQ1，保藏编号为CGMCCNo.14983，已于2017年11月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，经发酵培养和乙酸乙酯提取后得到的发酵培养液的乙酸乙酯提取物，然后再经过甲醇或水溶解，溶解后的溶解液即为银杏内生真菌的代谢产物产品。在本公开的第三个方面，提供了所述银杏内生真菌的代谢产物产品在制备抗菌产品中的应用。在本公开的第四个方面，提供了一种抗菌组合物，以所述的银杏内生真菌的代谢产物产品为活性成分。在本公开的第五个方面，提供一种抗菌方法，该方法包括使用所述银杏内生真菌的代谢产物产品或所述抗菌组合物抑制细菌的步骤。本公开其中的一个技术方案具有如下有益效果：本公开的银杏内生真菌的代谢产物在抗大肠杆菌和/或金黄色葡萄球菌检测中显示了较明显的抑制作用，具有制备新的抗菌产品的潜在用途。附图说明构成本公开一部分的说明书附图用来提供对本公开的进一步理解，本公开的示意性实施例及其说明用于解释本公开，并不构成对本公开的不当限定。图1：17#(17-1和17-2)样品的正离子色谱图。图2：18#(18-1和18-2)样品的正离子色谱图。图3：17#(17-1和17-2)样品的负离子色谱图。图4：18#(18-1和18-2)样品的负离子色谱图。图5：17#和18#银杏内生真菌粗提物甲醇溶液对大肠杆菌的抑制效果。图6：17#和18#银杏内生真菌粗提物水溶液对大肠杆菌的抑制效果。图7：17#和18#银杏内生真菌粗提物甲醇溶液对金黄色葡萄球菌的抑制效果。图8：17#和18#银杏内生真菌粗提物水溶液对金黄色葡萄球菌的抑制效果。具体实施方式应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本公开提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本公开的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作和/或它们的组合。本申请人对之前的研究成果CN108102928A《一株银杏内生真菌及其应用》作进一步研究和探索，提出了一株银杏内生真菌的代谢产物产品，其特点是：所用的真菌为CN108102928A中银杏内生真菌层生镰刀菌(Fusariumproliferatum)DZHQ1，保藏编号为CGMCCNo.14983，已于2017年11月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，经发酵培养和乙酸乙酯提取后得到发酵培养液的乙酸乙酯提取物，然后再经过甲醇或水溶解，溶解后的溶解液即为银杏内生真菌的代谢产物产品。在本公开的一个或一些具体的实施方式中，提供发酵培养和乙酸乙酯提取的方法，包括：挖取PDA固体培养基中培养好的银杏内生真菌，将菌丝块接种于PDA液体培养基中，20～28℃、100～150r/min摇床培养5～7d；然后按1:1～2:1的体积比加入乙酸乙酯(乙酸乙酯和发酵液体积比为1:1-2:1)，继续在摇床中培养4～8d；发酵液经过滤后除菌丝体，再进行分层，获得含有银杏内生真菌次级代谢产物的有机相；回收乙酸乙酯，得到含有银杏内生真菌次级代谢产物的浓缩液；最后，将浓缩液干燥，即为发酵培养液的乙酸乙酯提取物。其中，PDA固体培养基和PDA液体培养基为现有技术中常规的马铃薯培养基，配方可选择但不仅仅局限于：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂15～20g和水1000mL；或者，马铃薯200g、葡萄糖20g和水1000mL。在本公开的一个或一些具体的实施方式中，发酵液与乙酸乙酯的体积比例为1：1～1:2。在本公开的一个具体的实施方式中，所述银杏内生真菌的代谢产物产品的活性成分包括但并不仅仅限于甜菜碱、东莨菪素、去氢骆驼蓬碱、迷迭香酸、奥昔嘌醇、白藜芦醇、柚皮素、儿茶素、花旗松素和黄腐酚。进一步的，甲醇溶解后得到的银杏内生真菌的代谢产物产品活性成分包括但并不仅仅限于甜菜碱、东莨菪素、去氢骆驼蓬碱、迷迭香酸、奥昔嘌醇、白藜芦醇、柚皮素、儿茶素、花旗松素和黄腐酚。在本公开的一个具体的实施方式中，甜菜碱、东莨菪素、去氢骆驼蓬碱、迷迭香酸、奥昔嘌醇、白藜芦醇、柚皮素、儿茶素、花旗松素和黄腐酚为HPLC图中峰面积在105以上的峰代表的物质。在本公开的一个具体的实施方式中，所述银杏内生真菌的代谢产物如表3第6列或第7列所示。在本公开的一个或一些具体的实施方式中，乙酸乙酯提取物与甲醇或水的比例为(0.01～0.05)g:1mL；进一步的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株银杏内生真菌的代谢产物产品，其特征是：所用的真菌为银杏内生真菌层生镰刀菌(Fusarium proliferatum)DZHQ1，保藏编号为CGMCC No.14983，已于2017年11月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，经发酵培养和乙酸乙酯提取后得到发酵培养液的乙酸乙酯提取物，然后再经过甲醇或水溶解，溶解后即获得银杏内生真菌的代谢产物产品。

【技术特征摘要】
1.一株银杏内生真菌的代谢产物产品，其特征是：所用的真菌为银杏内生真菌层生镰刀菌(Fusariumproliferatum)DZHQ1，保藏编号为CGMCCNo.14983，已于2017年11月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，经发酵培养和乙酸乙酯提取后得到发酵培养液的乙酸乙酯提取物，然后再经过甲醇或水溶解，溶解后即获得银杏内生真菌的代谢产物产品。2.如权利要求1所述的代谢产物产品，其特征是：包括甜菜碱、东莨菪素、去氢骆驼蓬碱、迷迭香酸、奥昔嘌醇、白藜芦醇、柚皮素、儿茶素、花旗松素和黄腐酚；进一步的，甜菜碱、东莨菪素、去氢骆驼蓬碱、迷迭香酸、奥昔嘌醇、白藜芦醇、柚皮素、儿茶素、花旗松素和黄腐酚为HPLC图中峰面积在105以上的峰代表的物质。3.一株银杏内生真菌的代谢产物产品的制备方法，其特征是，该方法包括：挖取PDA固体培养基中培养好的银杏内生真菌(Fusariumproliferatum)DZHQ1，保藏编号为CGMCCNo.14983，将菌丝块接种于PDA液体培养基中，20～28℃、100～150r/min摇床培养5～7d；然后...

【专利技术属性】
技术研发人员：何庆，曾强成，刘帅，周海霞，蒙建州，祁胜文，张洪博，邵奕博，
申请(专利权)人：德州学院，
类型：发明
国别省市：山东,37