流式细胞术用荧光探针和荧光标记细胞的分选方法技术

本发明专利技术涉及一种流式细胞术用荧光探针，其包含载体分子和与所述载体分子结合的卟啉，并且激发波长在350～650nm的范围内。本发明专利技术还涉及一种利用流式细胞仪进行的荧光标记细胞的分选方法，其包含用所述的流式细胞术用荧光探针对细胞进行荧光标记的工序、和利用流式细胞仪对用流式细胞术用荧光探针标记的荧光标记细胞进行分选的工序，所述利用流式细胞仪进行的荧光标记细胞的分选通过对荧光标记细胞照射波长为350～650nm的激发光、对荧光进行检测来进行。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】流式细胞术用荧光探针和荧光标记细胞的分选方法
本专利技术涉及流式细胞术用荧光探针和荧光标记细胞的分选方法。
技术介绍
近年来，在癌、发生学的研究领域中，广泛进行使用了小鼠等动物的生物体内的荧光成像分析。移植到小鼠的iPS细胞或ES细胞等干细胞、癌细胞及肝硬化细胞等疾病相关细胞等细胞在移植后、在什么位置进行分化、生长、转移等的信息分析中，荧光成像分析为主要的方法。特别是，为了在维持小鼠等动物的生存的状态下观察移植细胞的进程，目前的情况是只有使用荧光成像分析的方法，其被定位为特别重要的分析方法。生物体内的移植细胞的荧光成像分析通常通过如下来进行：在移植前预先在体外(invitro)用荧光探针标记细胞，将该细胞移植到小鼠等生物体内，在体内(invivo)用荧光成像装置进行观察。例如，专利文献1中记载了将结合有阴离子性卟啉与阳离子性有机烷氧基硅烷和非阳离子性硅烷的含卟啉的复合物用作用于生物体观察的近红外荧光探针。现有技术文献专利文献专利文献1：日本特开2013-136555号公报
技术实现思路
专利技术所要解决的课题但是，在生物体观察用的近红外荧光探针的情况下，目前的情况是无法用荧光显微镜或流式细胞仪等体外荧光成像装置检测荧光，难以确认在体外与近红外荧光探针结合的荧光标记细胞。本专利技术为了解决上述以往的问题，提供一种能够用于使用了流式细胞仪的流式细胞术分析的流式细胞术用荧光探针和荧光标记细胞的分选方法。用于解决课题的手段本专利技术涉及一种流式细胞术用荧光探针，其特征在于，其包含载体分子和与所述载体分子结合的卟啉，并且激发波长为350～650nm的范围。本专利技术还涉及一种利用流式细胞仪进行的荧光标记细胞的分选方法，其特征在于，其包含用流式细胞术用荧光探针对细胞进行荧光标记的工序、和利用流式细胞仪对用流式细胞术用荧光探针标记的荧光标记细胞进行分选的工序，所述流式细胞术用荧光探针包含载体分子和与所述载体分子结合的卟啉、且激发波长为350～650nm的范围，所述利用流式细胞仪进行的荧光标记细胞的分选通过对荧光标记细胞照射波长为350～650nm的激发光、对荧光进行检测来进行。上述载体分子优选为聚硅氧烷。上述流式细胞术用荧光探针可以通过特异性结合于细胞表面来标记细胞，也可以通过被摄入细胞内部来标记细胞。所述流式细胞术用荧光探针的荧光波长优选为400～800nm。专利技术效果本专利技术能够提供一种能够用于利用流式细胞仪进行的流式细胞术分析的流式细胞术用荧光探针。另外，通过使用该流式细胞术用荧光探针标记细胞，能够利用流式细胞仪对荧光标记细胞进行分选。附图说明图1表示四(4-羧基苯基)卟啉(TCPP)及TCPP与(3-巯基丙基)三甲氧基硅烷(MPTMS)的混合分子(PPSHNPs)的用傅里叶变换红外分光光度计(FT-IR)测定的FR-IR光谱。图2表示PPSHNPs的29Si固体核磁共振(固体NMR)光谱。图3表示PPSHNPs的TG和DTA曲线。图4中，图4A表示FA-PEG/ICG-PPSHNPs生成反应后的上清液的吸收光谱，图4B表示叶酸的浓度校准曲线。图5表示PPSHNPs、及进一步使吲哚菁绿(ICG)及叶酸(FA)与PPSHNPs结合而成的复合物(FA-PEG/ICG-PPSHNPs)的吸收光谱。图6中，图6A表示FA-PEG/ICG-PPSHNPs的短波长侧的激发光谱及荧光光谱，图6B表示FA-PEG/ICG-PPSHNPs的长波长侧的激发光谱及荧光光谱。图7中，图7A表示来自小鼠的巨噬细胞的RAW264.7细胞的明视野图像(Brightfield)、用DAPI染色的RAW264.7细胞的由荧光显微镜得到的荧光图像(DAPI)、用进一步使吲哚菁绿(ICG)与PPSHNPs结合而成的复合物(ICG-PPSHNPs)标记的RAW264.7细胞的由荧光显微镜得到荧光图像(ICG-PPSHNPs)、以及将这三个图像重叠而得到的图像(融合，Merge)。图7B表示来自人的宫颈癌的HeLaS3细胞的明视野图像(Brightfield)、用DAPI染色的HeLaS3细胞的由荧光显微镜得到的荧光图像(DAPI)、利用FA-PEG/ICG-PPSHNPs标记的HeLaS3细胞的由荧光显微镜得到的荧光图像(FA-PEG/ICG-PPSHNPs)、以及将这三个图像重叠而得到的图像(融合)。图7C表示来自人的结肠癌的HCT116细胞的明视野图像(Brightfield)、用DAPI染色的HCT116细胞的由荧光显微镜得到的荧光图像(DAPI)、用FA-PEG/ICG-PPSHNPs标记的HCT116细胞的由荧光显微镜得到的荧光图像(FA-PEG/ICG-PPSHNPs)、以及将这三个图像重叠而得到的图像(融合)。图8中，图8A表示用流式细胞仪(激发波长为405nm、荧光波长为670nm)分析用ICG-PPSHNPs进行了标记的RAW264.7细胞的结果。图8B表示用流式细胞仪(激发波长为405nm、荧光波长为670nm)分析用FA-PEG/ICG-PPSHNPs进行了标记的HeLaS3细胞的结果。图8C表示用流式细胞仪(激发波长为405nm、荧光波长为670nm)分析用FA-PEG/ICG-PPSHNPs进行了标记的HCT116细胞的结果。图9中，图9A表示用流式细胞仪(激发波长为405nm、荧光波长为710nm)分析用ICG-PPSHNPs进行了标记的RAW264.7细胞的结果。图9B表示用流式细胞仪(激发波长为405nm、荧光波长为710nm)分析用FA-PEG/ICG-PPSHNPs进行了标记的HeLaS3细胞的结果。图9C表示用流式细胞仪(激发波长为405nm、荧光波长为710nm)分析用FA-PEG/ICG-PPSHNPs进行了标记的HCT116细胞的结果。图10中，图10A表示用流式细胞仪(激发波长为405nm、荧光波长为780nm)分析用ICG-PPSHNPs进行了标记的RAW264.7细胞的结果。图10B表示用流式细胞仪(激发波长为405nm、荧光波长为780nm)分析用FA-PEG/ICG-PPSHNPs进行了标记的HeLaS3细胞的结果。图10C表示用流式细胞仪(激发波长为405nm、荧光波长为780nm)分析用FA-PEG/ICG-PPSHNPs进行了标记的HCT116细胞的结果。图11中，图11A表示用流式细胞仪(激发波长为640nm、荧光波长为780nm)分析用ICG-PPSHNPs进行了标记的RAW264.7细胞的结果。图11B表示用流式细胞仪(激发波长为640nm、荧光波长为780nm)分析用FA-PEG/ICG-PPSHNPs进行了标记的HeLaS3细胞的结果。图11C表示用流式细胞仪(激发波长为640nm、荧光波长为780nm)分析用FA-PEG/ICG-PPSHNPs进行了标记的HCT116细胞的结果。具体实施方式本专利技术的专利技术者们发现了将包含载体分子和与载体分子结合的卟啉、且激发波长为350～650nm的范围的荧光探针用于利用流式细胞术荧光分析进行的荧光标记细胞的检测/分选，从而完成了本专利技术。(流式细胞术用荧光探针)本专利技术的流式细胞术用荧光探针包含载体分子和与载体分子结合的卟啉。所述流式细胞术用荧光探针的激发波长为本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种流式细胞术用荧光探针，其特征在于，其包含载体分子和与所述载体分子结合的卟啉，并且激发波长为350～650nm的范围。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.04.28 JP 2016-0913561.一种流式细胞术用荧光探针，其特征在于，其包含载体分子和与所述载体分子结合的卟啉，并且激发波长为350～650nm的范围。2.根据权利要求1所述的流式细胞术用荧光探针，其中，所述载体分子为聚硅氧烷。3.根据权利要求1或2所述的流式细胞术用荧光探针，其通过特异性结合于细胞表面来标记细胞。4.根据权利要求1或2所述的流式细胞术用荧光探针，其通过被摄入到细胞内部来标记细胞。5.根据权利要求1～4中任一项所述的流式细胞术用荧光探针，其中，所述流式细胞术用荧光探针的荧光波长为400～800nm的范围。6.一种利用流式细胞仪进行的荧光标记细胞的分选方法，其特征在于，其包含：用流式细胞术用荧光探针对细胞进行荧光标记的工序、和利用流...

【专利技术属性】
技术研发人员：林幸一朗，坂本涉，余语利信，丸冈弘规，
申请(专利权)人：国立大学法人名古屋大学，仓敷纺绩株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP