用于检测靶核酸的方法和系统技术方案

本发明专利技术提供了用于核酸检测和鉴别的方法和系统。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于检测靶核酸的方法和系统相关申请的交叉引用本申请根据35U.S.C.119(e)要求2016年2月20日提交的美国申请号62/297,826和2016年2月26日提交的美国申请号62/300,623的优先权。
本公开一般涉及用于检测核酸的方法和系统。
技术介绍
可以通过各种定性和/或定量的方法实施少量靶核酸的检测，大多数所述方法使用两种主要策略——信号放大或靶核酸扩增。在后一种方法中，采用各种荧光标记探针的设计以提高特异性的qPCR方法认为是各种医学和非医学应用的金标准。然而，在使用点或护理点背景中，对无需庞大、昂贵和/或精密设备的检测核酸的方法和组合物存在需要。
技术实现思路
在一方面，提供了无扩增的靶核酸序列检测的方法。此类方法通常包括：(a)提供包含至少一个靶核酸序列的样品；(b)使所述样品与包含核酸部分和带正电荷的标签的探针接触，其中所述核酸部分与靶核酸序列的至少一部分互补，其中所述接触在核酸部分和互补的靶核酸序列之间形成探针-靶复合物的条件下进行；(c)在探针-靶复合物内切割探针以释放可检测的带正电荷的标签；和(d)基于电信号的变化检测释放的带正电荷的标签通过纳米微孔的移动；本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.无扩增的靶核酸序列检测的方法，所述方法包括：(a)提供包含至少一个靶核酸序列的样品；(b)使所述样品与包含核酸部分和带正电荷的标签的探针接触，其中所述核酸部分与所述靶核酸序列的至少一部分互补，其中所述接触在所述核酸部分和互补的靶核酸序列之间形成探针‑靶复合物的条件下进行；(c)在所述探针‑靶复合物内切割探针以释放可检测的带正电荷的标签；和(d)基于电信号的变化检测释放的带正电荷的标签通过纳米微孔的移动；其中电信号的变化指示样品中存在所述靶核酸序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.02.20 US 62/297,826;2016.02.26 US 62/300,6231.无扩增的靶核酸序列检测的方法，所述方法包括：(a)提供包含至少一个靶核酸序列的样品；(b)使所述样品与包含核酸部分和带正电荷的标签的探针接触，其中所述核酸部分与所述靶核酸序列的至少一部分互补，其中所述接触在所述核酸部分和互补的靶核酸序列之间形成探针-靶复合物的条件下进行；(c)在所述探针-靶复合物内切割探针以释放可检测的带正电荷的标签；和(d)基于电信号的变化检测释放的带正电荷的标签通过纳米微孔的移动；其中电信号的变化指示样品中存在所述靶核酸序列。2.根据权利要求1的方法，其中所述探针进一步包含选自下组的易切割的连接：RNA序列、DNA序列和无碱基核苷酸序列。3.根据权利要求2的方法，其中所述易切割的连接包含至少一个RNA残基。4.根据权利要求2的方法，其中所述易切割的连接包含氧化嘌呤或氧化嘧啶。5.根据权利要求2的方法，其中所述易切割的连接包含无嘌呤位点或无嘧啶位点。6.根据权利要求2的方法，其中所述易切割的连接包含脱氧尿苷、5-羟基尿嘧啶、5-羟甲基尿嘧啶或5-甲酰基尿嘧啶。7.根据权利要求2的方法，其中通过1型核糖核酸酶H或2型核糖核酸酶H切割所述易切割的连接。8.根据权利要求2的方法，其中通过DNAN-糖苷酶和DNAAP-裂合酶活性的组合切割所述易切割的连接。9.根据权利要求2的方法，其中通过DNAAP-裂合酶活性或内切脱氧核糖核酸酶切割所述易切割的连接。10.根据权利要求2的方法，其中通过DNAN-糖苷酶和内切脱氧核糖核酸酶的组合，或DNAN-糖苷酶和DNAAP-裂合酶活性的组合切割所述易切割的连接。11.根据权利要求1的方法，所述方法进一步包括：在步骤(b)中，进一步使所述样品与引物接触，其中所述引物与靶核酸序列的至少一部分互补，所述靶核酸序列的至少一部分在与探针互补的靶核酸序列的部分的上游，其中所述接触在所述引物和互补的靶核酸序列之间形成引物-靶复合物的条件下进行；和在步骤(c)中，使包含所述引物-靶复合物的样品与DNA聚合酶在引物延伸发生的条件下接触。12.根据权利要求11的方法，其中在引物延伸期间通过所述DNA聚合酶切割所述探针。13.根据权利要求11的方法，其中通过所述DNA聚合酶的5’核酸酶活性介导所述切割。14.根据权利要求11的方法，其中通过所述DNA聚合酶的延伸受反应中存在的dNTP类型数量的限制。15.根据权利要求14的方法，其中反应中存在的dNTP的数量为四种dNTP的一种，或两种，或三种。16.根据权利要求1的方法，所述方法进一步包括：在步骤(b)中，进一步使所述样品与至少两个引物接触，其中所述至少两个引物与所述靶核酸序列的部分互补，所述靶核酸序列的部分在与探针互补的靶核酸序列的部分的旁侧，其中所述接触在所述至少两个引物和互补的靶核酸序列之间形成引物-靶复合物的条件下进行；和在步骤(c)中，使用DNA聚合酶扩增所述至少两个引物之间的靶核酸序列。17.根据权利要求16的方法，其中扩增所述靶核酸序列包括聚合酶链式反应(PCR)或等温反应。18.根据权利要求16的方法，其中通过所述DNA聚合酶在扩增期间切割所述探针。19.根据权利要求16的方法，其中通过所述DNA聚合酶的5’瓣状内切核酸酶活性介导所述切割。20.根据权利要求16的方法，其中切割导致可检测的带正电荷的标签的检测，其指示靶扩增子的复制。21.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述探针包含净负电荷。22.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述可检测的带正电荷的标签在释放之前和之后包含净正电荷。23.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述可检测的带正电荷的标签在释放之前和之后包含带正电荷的核酸部分、非核酸部分或它们的组合。24.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述接触步骤包括使所述样品与多个探针接触，所述探针各自与至少两个不同的靶核酸序列互补并各自具有不同的正电荷(量或类型)，并且其中所述电信号(类型/量)能够区分所述至少两个不同的靶核酸序列。25.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述切割步骤包括酶促切割所述探针。26.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述可检测的带正电荷的标签通过所述纳米微孔。27.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述可检测的带正电荷的标签能通过它的电荷、形状、大小或它们的任何组合来检测。28.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述检测步骤进一步包括鉴别所述可检测的带正电荷的标签。29.根据权利要求28的方法，进一...

【专利技术属性】
技术研发人员：弗拉迪米尔I巴什基洛夫，西奥菲罗斯科特赛洛格罗，
申请(专利权)人：弗拉迪米尔I巴什基洛夫，西奥菲罗斯科特赛洛格罗，
类型：发明
国别省市：美国,US