用于修饰靶核酸的改进方法技术

本发明专利技术涉及用于修饰靶核酸的改进方法。该方法涉及构建体，其中引导RNA与供体RNA(融合NA)共价连接，通过同源重组引入靶核酸，并且基于核酸酶(例如CRISPR或TALEN)的引入，进入含有靶核酸的细胞。融合NA可以作为DNA载体引入。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于修饰靶核酸的改进方法
本专利技术涉及用于修饰靶核酸的改进方法。专利技术概述最初将CRISPR(规律成簇间隔短回文重复)系统鉴定为隶属于链球菌属(Streptococcus)的细菌的适应性防御机制(WO2007/025097)。那些细菌CRISPR系统依赖于与切割蛋白质复合的向导RNA(gRNA)来指导存在于侵入的病毒DNA内的互补序列的降解。Cas9(最先鉴定出的CRISPR/Cas系统蛋白质)是通过两种非编码RNA(crRNA和反式激活crRNA(tracrRNA))引导至邻近PAM(原间隔区邻近序列)序列基序的DNA靶序列的大的单体DNA核酸酶。随后，显示通过使crRNA与tracrRNA融合创建的合成RNA嵌合体(单个向导RNA或gRNA)具有同等功能(Jinek等2012)。若干研究组已发现，CRISPR切割特性可以用于前所未有地轻松破坏几乎任何生物基因组中的基因(MaliP等(2013)Science.339(6121):819-823；CongL等(2013)Science339(6121))。最近，提供修复模板允许在几乎任何位点编辑具有几乎任何所希望的序列的基因本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于修饰细胞中的靶核酸(靶NA)分子的方法，其包括步骤：a.提供包含与至少一个供体核酸(doNA)分子共价连接的向导核酸(gNA)分子的重组融合核酸(fuNA)分子；和b.将所述fuNA分子引入包含靶NA分子的一个或多个细胞；和c.将位点定向核酸修饰多肽引入所述一个或多个细胞；和d.在允许所述一个或多个细胞中同源重组的条件下孵育所述一个或多个细胞；和可选地e.分离一个或多个其中发生了同源重组的细胞，其中fuNA分子由RNA组成。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.04.29 EP 16167773.7;2016.04.29 EP 16167774.5;1.用于修饰细胞中的靶核酸(靶NA)分子的方法，其包括步骤：a.提供包含与至少一个供体核酸(doNA)分子共价连接的向导核酸(gNA)分子的重组融合核酸(fuNA)分子；和b.将所述fuNA分子引入包含靶NA分子的一个或多个细胞；和c.将位点定向核酸修饰多肽引入所述一个或多个细胞；和d.在允许所述一个或多个细胞中同源重组的条件下孵育所述一个或多个细胞；和可选地e.分离一个或多个其中发生了同源重组的细胞，其中fuNA分子由RNA组成。2.权利要求1的方法，其中gNA分子包含含有至少12个与靶NA分子的相同数目的连续碱基互补的碱基的间隔区核酸(间隔区NA)分子。3.权利要求2的方法，其中gNA分子进一步包含支架核酸(支架NA)分子。4.权利要求3的方法，其中支架NA分子与gNA分子共价结合。5.权利要求1至4中任一项的方法，其中细胞是微生物、动物、...

【专利技术属性】
技术研发人员：L·W·诺伊特布姆，J·A·麦克尔维尔，R·德皮尼奥巴罗科，C·德王尔德，M·F·菲勒，
申请(专利权)人：巴斯夫植物科学有限公司，
类型：发明
国别省市：德国,DE