本发明专利技术涉及使用缀合物转染细胞，该缀合物包含至少一个糖残基和至少一个选自核酸、核苷和核苷酸的核苷组分。该缀合物适于以高效率转染原核和真核细胞，例如植物细胞或包括人细胞在内的哺乳动物细胞。因此,为治疗分子提供了新的递送载体，所述治疗分子包括反义分子、siRNA分子、miRNA分子、antagomirs或这样的分子的前体以及所述的治疗性的核苷或核苷酸。进一步提供了用于发展展示特定性状的新的植物品系的方便的策略。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术涉及使用包含至少一个糖残基和至少一种选自核酸、核苷和核苷酸的核苷组分的缀合物转染细胞。该缀合物适用于高效转染原核和真核细胞，例如植物细胞或哺乳动物细胞，包括人细胞。因此，为治疗分子提供了新的递送载体，所述治疗分子包括转录物、信使RNA、反义分子、siRNA分子、miRNA分子、antagomirs或这样的分子的前体以及所述的治疗性的核苷或核苷酸。进一步提供了用于发展展示特殊的性状的新的植物品系的方便的策略。RNA干扰是强有力的工具，其利用短的RNA双链来抑制特定的蛋白质在细胞中的形成(1-3)。本质上，所述的沉默RNA分子是通过切酶复合体切割，由较大的转录物产生的(4)。然而对于生物技术应用，所述的RNA分子(siRNA)是以化学方法制备和施用的。在最近的十年，使用siRNA作为治疗剂的思想(5)受到强烈地追求，但是所述的主要障碍：RNA双链体的差的细胞摄取不能被克服(6)。目前，不同的RNA递送系统例如纳米颗粒(7，8)、脂质体(9，10)或聚阳离子聚合物(11)处于密集的研究之下。尽管在所述领域有实质性进展，然而，所述的经常还很高的毒性(12-14)和低的细胞的特异性代表了还没有被解决的问题。最近，受体介导的细胞内吞作用已经逐渐成为备选的递送策略(16-25)，其允许把所述的siRNA靶向特殊细胞类型。所述的方法要求把所述的siRNA连接到与细胞类型特异性的受体结合的配体。这引发内化作用加工，导致RNA-配体缀合物的摄取。目前，采用胆固醇修饰的RNA最成功地实施了所述的策略(24)。PCT/EP2013/064610(通过引文把它的公开内容并入本文中)描述了缀合物，其中使多不饱和脂肪酸残基(例如花生四烯酸残基)与核苷组分共价
结合。这些缀合物特别地可用于与其中存在大麻素受体的细胞接触。特别是，可以使用该缀合物转染神经元细胞和免疫细胞。然而，仍然需要转染敏感细胞以及特别到目前为止难以转染的那些细胞的方便的策略。在本专利技术中发现，采用糖修饰的寡核苷酸可以使存在于原核和真核细胞两者的细胞膜中的糖转运蛋白被有效地靶向。相应的受体介导的策略可以被成功地用于转染多种敏感细胞。本专利技术的第一个方面是包含糖残基和至少一种核苷组分的缀合物在转染细胞中的用途。术语”缀合物”也包括盐，特别是药学上可接受的盐，例如与无机的或有机的酸或碱的加成盐，正如本领域公知的那样。.根据本专利技术优选的方面，所述的缀合物包含糖残基和与其共价结合的至少一种核苷组分。根据另一个方面，根据本专利技术使用的缀合物可以包含至少一种核苷组分和与其非共价结合的糖修饰的化合物。术语”糖修饰的化合物”是指包含至少一个糖残基并且能够与核苷组分非共价结合(例如经由静电相互作用)的任何化合物。糖修饰的化合物的实例是聚阳离子物质，例如包含至少一个糖残基的阳离子型聚合物或阳离子型脂质体，其可以与聚阴离子核酸分子形成离子型缀合物。所述的糖残基可以与所述的化合物共价或非共价连接。用于本专利技术中的缀合物包含至少一个糖残基，特别地1-10个，更特别地1-5个糖残基。甚至更特别地，所述的缀合物包含1或2个糖残基。最特别地，所述的缀合物包含1个糖残基。如果所述的缀合物包含超过一个糖残基，则所述的糖残基可能是相同的或不同的。与所述的糖残基相连的所述的核苷组分可以选自核酸、核苷和核苷酸。在更具体的实施方式中，与所述的糖残基相连的所述的核苷组分是核酸分子，更特别地是RNA分子。所述的缀合物包含至少一个核苷组分，特别地包含1-25，更特别地包含2-20或2-10，并且甚至更特别地包含2-8，即2、3、4、5、6、7或8个核苷组分。如果所述的缀合物包含超过一个核苷组分，则所述的核苷组
分可以是相同的或不同的。在一种实施方式中，所述的缀合物可以包含:(i)一个糖残基和一个核苷组分，例如一个核酸分子，(ii)多个糖基和一个核苷组分，例如一个核酸分子，(iii)一个糖残基和多个核苷组分，例如多个核酸分子，或(iv)多个糖残基和多个核苷组分，例如多个核酸分子。在更具体的实施方式中，所述的缀合物包含1个糖残基和2-20，特别是2-8，即2、3、4、5、6、7或8个核苷组分。在一种实施方式中，所述的缀合物可以具有线型结构。因此，核苷组分可以被连接成直链，其中糖残基可以存在于所述的链之内、在所述的链的一端或在所述的链的两端。在另一种实施方式中，所述的缀合物具有分支结构，其中核苷组分经由分枝的接头(例如树枝状的接头)与糖残基结合。术语“糖残基”包括单糖、二糖和寡糖。单糖残基的实例是葡萄糖、甘露糖、半乳糖、核糖、阿拉伯糖、果糖、岩藻糖和唾液酸。二糖包括例如蔗糖、乳糖、海藻糖和麦芽糖。按照本专利技术，能被作为糖残基使用的寡糖包括线性的、分枝的或环状的寡糖。所述的寡糖典型地包含小数目(三至九)的单糖单元。环状的寡糖的特别优选的实例是环糊精。可以使所述的糖残基与至少一种核苷组分共价结合。优选地，使所述的糖残基经由接头与所述的至少一种核苷组分结合。所述的接头可以是线性的或分枝的接头并且通常具有2-50个原子的链长，包括碳原子以及特别是杂原子(例如S、N和/或O-原子)在内。例如，所述的接头可以是线性的接头，例如包含至少一个(例如1-10个，特别地2-5个以及更特别地3个)C1-C3烯化氧基团(特别地氧化乙烯基团)的接头。备选地，所述的接头可以是分枝的，例如树枝状的接头。可以经由已知的接头技术，把所述的糖残基连接到所述的至少一种核苷组分。然而优选地，所述的连接涉及Click反应，例如在叠氮化物和炔
基团之间、在受限的链烯(例如降冰片烯)和腈亚胺、腈氧化物或四嗪之间，从而导致由所述的Click反应形成的环状基团，特别地1,2,3-三唑基团。在一种具体的实施方式，根据本专利技术使用的所述的缀合物由通式(Ia)或(Ib)表示:Fn—(Lm-N)r (Ia)Fn—(Lm-N)r—Lm-Fn (Ib)其中F是糖残基，L是接头，N是核苷组分，其选自核酸、核苷和核苷酸，n是1-10，优选地1–5，更优选地为1的整数，，m是0或1，r是1-25，优选地2-20以及更优选地2-8的整数。在这个实施方式中，所述的缀合物可以由结构例如下列的结构代表:F—L—NF—(L—N)r其中F、L、N和r如上文定义，F—L*—(N)r其中L*是分枝的接头，并且F、N和r如上文定义，F—(L—N)r—L—F其中F、L、N和r如上文定义。在另一种实施方式中，所述的缀合物可以包含与所述的至少一种核苷组分共价结合的另一受体配体。所述的另一受体配体是不同于糖残基的化合物，例如叶酸、胆固醇、激素或多不饱和脂肪酸残基，特别是花生四烯酸残基，例如花生四烯酸乙醇胺。在这个实施方式，所述的缀合物可以由具有所述的通式(II)的结构代表:Fn—(Lm—N)r—Lm—Zs (II)其中F是糖残基，L是接头，n是1-10，优选地1-5，更加优选地为1的整数，m是0或，N是核苷组分，其选自核酸、核苷和核苷酸，r是1-25，优选地2-20以及更优选地2-8的整数，Z是另一受体配体，并且s是1-10，优选地1-5，更加优选地为1的整数。在这个实施方式中，所述的缀合物可以由结构例如下列的结构代表:F—L—N—ZF—(L—N)r—L—Z其中F、L本文档来自技高网...
【技术保护点】
包含至少一个糖残基和至少一个核苷组分的缀合物在转染细胞，特别是植物细胞或哺乳动物细胞，例如人细胞中的用途。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.01.15 EP 14151255.81.包含至少一个糖残基和至少一个核苷组分的缀合物在转染细胞，特别是植物细胞或哺乳动物细胞，例如人细胞中的用途。2.权利要求1所述的用途，其中在所述的缀合物中，至少一个糖残基与至少一个核苷组分共价结合，或其中所述的缀合物包含至少一个核苷组分和与其非共价结合的糖修饰的部分。3.权利要求1或2所述的用途，其中所述的核苷组分选自核酸、核苷和核苷酸。4.权利要求1-3中任意一项所述的用途，其中所述的核苷组分是核酸分子，特别是RNA分子，例如任选地具有至少一个3’-突出端的单链RNA分子或双链RNA分子，更特别地是siRNA分子。5.权利要求1-4中任意一项所述的用途，其中所述的核苷组分是包含至少一个修饰的结构单元的核酸分子。6.权利要求1-5中任意一项所述的用途，其中所述的核苷组分经由核碱基、糖或磷酸基，特别是存在于核酸分子中的结构单元的核碱基、糖或磷酸基，特别是经由存在于核酸分子中的末端结构单元，与所述的糖残基相连。7.权利要求1-6中任意一项所述的用途，其中所述的糖残基选自单糖，例如葡萄糖、甘露糖、半乳糖、核糖、阿拉伯糖、果糖、岩藻糖或唾液酸，二糖，例如蔗糖、乳糖、海藻糖或麦芽糖，和线性的、分枝的或环状的寡糖，例如环糊精。8.权利要求1-7中任意一项所述的用途，其中所述的缀合物包含:(i)一个糖残基和一个核苷组分，例如一个核酸分子，(ii)多个糖基和一个核苷组分，例如一个核酸分子，(iii)一个糖残基和多个核苷组分，例如多个核酸分子，或(iv)多个糖残基和多个核苷组分，例如多个核酸分子。9.权利要求1-8中任意一项所述的用途，其中所述的缀合物包含糖残
\t基，其与RNA转录物例如mRNA的3’-或5’-端共价结合。10.权利要求1-9中任意一项所述的用途，其中所述的糖残基经由接头与所述的至少一个核苷组分或所述的部分共价结合。11.权利要求10所述的用途，其中所...
【专利技术属性】
技术研发人员：T·卡雷尔，
申请(专利权)人：巴斯夫欧洲公司，
类型：发明
国别省市：德国;DE
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