用于选择特异性结合糖基化免疫检查点蛋白的抗体的方法技术

提供了产生和筛选相对于非糖基化ICP而特异性地与糖基化免疫检查点蛋白(ICP)结合的抗体的方法。此类抗体识别糖基化ICP的特定表位，并且可阻止或阻断糖基化ICP与其配体(诸如另一种ICP)的结合，并且可抑制这两种蛋白质之间的可导致免疫抑制的相互作用，如例如人PD‑L1/PD‑1相互作用。作为具体实例，提供了在其细胞外结构域内包含糖基化氨基酸残基的人PD‑L1和PD‑1多肽，用于产生分别特异性结合PD‑L1或PD并抑制PD‑L1/PD‑1相互作用的抗糖基化PD‑L1抗体或抗糖基化PD‑1抗体。通过该方法产生和选择的抗体尤其可用作用于破坏、阻断或中和ICP系统和其中的特定ICP相互作用的癌症治疗剂。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于选择特异性结合糖基化免疫检查点蛋白的抗体的方法序列表本申请包含以ASCII格式以电子方式提交了序列表，其由此通过引用整体并入本文。所述ASCII拷贝(于2017年3月23日创健的)被命名为24258_105006PCT_SL.txt，并且大小为31,652字节。相关领域本文所述方法总体上涉及分子生物学、医学和肿瘤学领域。更特别地，提供了用于制备、选择和筛选特异性以及优先结合糖基化的免疫检查点蛋白的抗体的方法。背景免疫检查点途径涉及携带免疫检查点分子(多肽和肽)的免疫细胞之间的相互作用，并且在正常条件下，在抗菌免疫反应期间维持自身耐受性和限制附属组织损伤。这些途径可被癌症和肿瘤细胞用于逃避免疫破坏。试图中断免疫检查点(诸如抗CTLA-4、抗-PD-1、抗-PD-L1抗体)以阻止肿瘤细胞与免疫T细胞的相互作用，提供抗肿瘤免疫和介导持续的癌症消退疗法的药物正在开发和测试中。免疫检查点途径的生物学是复杂的，检查点阻断药物(单独使用或组合使用)的全活性谱是目前被深入研究的主题。(S.Topalian等，2015,CancerCell,27(4):450-461)。癌症病因中的混淆事件是肿瘤能本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鉴定和分离优先结合糖基化免疫检查点蛋白(ICP)抗原的抗体的方法，所述方法包括：a)筛选与糖基化ICP抗原特异性结合的抗体群；b)筛选与所述ICP的未糖基化形式的结合比与所述糖基化ICP抗原的结合更弱的特异性结合所述糖基化ICP抗原的抗体；和c)分离以比对所述ICP的未糖基化形式的亲和力更大的亲和力与所述糖基化ICP结合的抗体。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.03.29 US 62/314,940;2016.07.12 US 62/361,2981.一种鉴定和分离优先结合糖基化免疫检查点蛋白(ICP)抗原的抗体的方法，所述方法包括：a)筛选与糖基化ICP抗原特异性结合的抗体群；b)筛选与所述ICP的未糖基化形式的结合比与所述糖基化ICP抗原的结合更弱的特异性结合所述糖基化ICP抗原的抗体；和c)分离以比对所述ICP的未糖基化形式的亲和力更大的亲和力与所述糖基化ICP结合的抗体。2.权利要求1的方法，其中所述抗体群是获自用糖基化ICP抗原或其肽免疫的动物的单克隆抗体，所述肽包含ICP的至少7个连续氨基酸的片段，所述片段包含至少一个通过附接于聚糖部分而被修饰的糖基化天冬酰胺(N)氨基酸。3.权利要求1或2所述的方法，所述方法还包括在所述筛选步骤之前：a)以在受体动物中引发特异性抗糖基化ICP抗体免疫反应的有效量向所述动物施用糖基化ICP抗原或其肽，所述肽包含ICP的至少7个连续氨基酸的片段，所述片段包含至少一个通过附接于聚糖部分而修饰的糖基化天冬酰胺(N)氨基酸；b)从所述动物产生分泌抗体群的杂交瘤群。4.权利要求1至3中任一项的方法，其中所述动物是小鼠或大鼠。5.权利要求2至4中任一项的方法，其中所述动物是针对表达人免疫球蛋白的基因的转基因动物。6.权利要求1的方法，其中所述抗体群是噬菌体展示抗体文库。7.权利要求6的方法，其中所述噬菌体抗体文库是人抗体所有组成成分的文库。8.权利要求1至7中任一项的方法，其中测试所述抗体与所述糖基化ICP抗原的结合，其Kd小于由所述抗体与所述ICP抗原的非糖基化形式的结合所展示的Kd的一半。9.权利要求8的方法，其中测试所述抗体与所述糖基化ICP抗原的结合，其中结合的Kd为由所述抗体与所述ICP抗原的非糖基化形式的结合所展示的Kd的至多1/5。10.权利要求9的方法，其中测试所述抗体与所述糖基化ICP抗原的结合，其中Kd小于由所述抗体与所述ICP抗原的非糖基化形式的结合所展示的Kd的一半。11.权利要求1至7中任一项的方法，其中测试所述抗体与所述糖基化ICP抗原的结合，其中表达所述糖基化ICP抗原的结合细胞的测量的荧光强度(MFI)值为由所述抗体与表达所述ICP抗原的未糖基化形式的细胞的结合所展示的MFI值的至少2倍至20倍，其中所述抗体直接或间接用荧光标记物标记。12.权利要求11的方法，其中测试所述抗体与所述糖基化ICP抗原的结合，其中结合糖基化ICP抗原的MFI值为由所述抗体与所述ICP抗原的未糖基化形式的结合所展示的MFI值的至少3倍至至少5倍。13.权利要求1至12中任一项的方法，其中所述糖基化ICP抗原或其肽在肿瘤或癌细胞上表达，并且所述ICP配体在免疫细胞上表达。14.权利要求1至12中任一项的方法，其中所述糖基化ICP抗原或其肽在免疫细胞上表达，并且所述ICP配体在肿瘤或癌细胞上表达。15.权利要求13或14所述的方法，其中所述免疫细胞是效应T细胞或天然杀伤细胞(NK细胞)。16.权利要求1-15中任一项的方法，其中所述ICP是人ICP。17.根据权利要求1-16中任一项的方法，其中所述糖基化ICP抗原选自由以下组成的组：CD47、CD96、TIM-3、LAG-3、CEACAM1、BTN1A1、脑信号蛋白4D、嗜乳脂蛋白样2(BTNL2)、BTLA、PD-1和PD-L1。18.权利要求17的方法，其中所述糖基化ICP是PD-L1。19.权利要求17的方法，其中所述糖基化ICP是PD-1。20.权利要求17的方法，其中所述糖基化ICP是CD47。21.权利要求17的方法，其中所述糖基化ICP是CD96。22.权利要求17的方法，其中所述糖基化ICP是TIM-3。23.权利要求17的方法，其中所述糖基化ICP是LAG-3。24.权利要求17的方法，其中所述糖基化ICP是CEACAM1。25.权利要求17的方法，其中所述糖基化ICP是BTN1A1。26.权利要求17的方法，其中所述糖基化ICP是脑信号蛋白4D。27.权利要求17的方法，其中所述糖基化ICP是BTNL2。28.权利要求17的方法，其中所述糖基化ICP是BTLA。29.权利要求1至28中任一项的方法，其中步骤(a)和/或步骤(b)中的筛选是通过流式细胞术分析。30.权利要求1至29中任一项的方法，其还包括测试所述抗体抑制所述ICP与其同源ICP结合伴侣的结合。31.权利要求1至30中任一项的方法，其还包括鉴定包含所述抗体...

【专利技术属性】
技术研发人员：S·S·刘，MC·洪，
申请(专利权)人：斯特库比股份有限公司，得克萨斯大学体系董事会，
类型：发明
国别省市：韩国,KR