减少蛋白的三硫化物水平的方法技术

本发明专利技术涉及磺基半胱氨酸和其衍生物作为细胞培养添加剂来减少细胞培养产生的蛋白中的三硫化物水平的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】减少蛋白的三硫化物水平的方法本专利技术涉及磺基半胱氨酸和其衍生物作为细胞培养添加剂来减少细胞培养中产生的蛋白(例如IgG)的三硫化物水平的用途。重组蛋白，特别是单克隆抗体(mAb)，已成为一类重要的治疗性化合物，用于治疗广泛的疾病。这样的生物分子，例如治疗性蛋白(包括抗体)的高效和经济的大规模生产对于生物技术和制药工业而言是越来越重要的考虑。通常，蛋白使用细胞培养方法生产，例如，使用经重组工程改造以生产目的蛋白的哺乳动物或细菌细胞系。然而，这样的重组生产的蛋白显示明显的异质性。这样的异质性可由化学引起的修饰例如氧化、脱酰胺和糖化，以及翻译后修饰例如蛋白水解成熟、蛋白折叠、糖基化、磷酸化和二硫键形成导致。分子异质性是不需要的，特别是如果治疗性蛋白意图用于人，和必须被监管机构例如食品和药品管理局(FDA)批准。一种已受到特别关注的分子异质性是三硫化物键的形成。抗体(或免疫球蛋白)由四个多肽链组成：两个轻链多肽(LC)和两个重链多肽(HC)。四个链通常通过在重链和轻链中存在的半胱氨酸残基之间形成的二硫键以"Y"构型连接。这些二硫键决定天然HC2LC2四聚体的总体结构。通常，抗体含有四个链间二本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种减少蛋白的三硫化物键形成的方法，包括培养表达所述蛋白的细胞，其中在细胞培养期间一次或多次将进料培养基加入细胞培养物，所述进料培养基不含有任何显著量的半胱氨酸或胱氨酸，但包含S‑磺基半胱氨酸和/或其盐，其中相对于其中进料培养基中的半胱氨酸和/或胱氨酸未被S‑磺基半胱氨酸和/或其盐替换的细胞培养基中培养的细胞表达的蛋白，在所述蛋白中的三硫化物连键形成减少。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.04.28 EP 16167461.91.一种减少蛋白的三硫化物键形成的方法，包括培养表达所述蛋白的细胞，其中在细胞培养期间一次或多次将进料培养基加入细胞培养物，所述进料培养基不含有任何显著量的半胱氨酸或胱氨酸，但包含S-磺基半胱氨酸和/或其盐，其中相对于其中进料培养基中的半胱氨酸和/或胱氨酸未被S-磺基半胱氨酸和/或其盐替换的细胞培养基中培养的细胞表达的蛋白，在所述蛋白中的三硫化物连键形成减少。2.权利要求1的方法，特征在于S-磺基半胱氨酸和/或其盐是S-磺基半胱氨酸钠盐。3.权利要求1或2的方法，特征在于S-磺基半胱氨酸和/或S-磺基半胱氨酸盐以使得其在细胞培养物中的浓度介于0.4和50mM之间的量加入进料培养基中。4.权利要求1-3中一项或多项的方法，特征在于所述细胞在至少包含一种或多种糖组分、一种或多种氨基酸、一种或多种维生素或维生素前体、一种或多种盐、一种或多种缓冲剂组分、一种或多种辅因子和一种或多种核酸组分的细胞培养基中培养。5.权利要求1-4中一项或多项的方法，特征在于包含S-磺基半胱氨酸和/或其盐的进料的pH介于6...

【专利技术属性】
技术研发人员：A齐默，
申请(专利权)人：默克专利股份公司，
类型：发明
国别省市：德国,DE