一种同一体系中同时对两个蛋白进行特异性标记或修饰的方法技术

本发明专利技术涉及一种同一体系中同时对两个蛋白进行特异性标记或修饰的方法，包括利用S1型和S11型两个新型intein具有极短的N‑intein或C‑intein小片段的优势，通过人工合成该intein小片段，并在合成的过程中引入拟修饰基团，后续通过反式剪接将拟修饰基团标记于目标蛋白的N端或C端。本发明专利技术操作简单，且标记效率高，在蛋白质标记领域具有重要的应用价值。

A method for simultaneously marking or modifying two proteins simultaneously in the same system

The invention relates to a method for a system of two protein specific markers or modification, including the use of S1 type and S11 type two intein model with very short small fragments of N intein or C intein advantage, through the artificial synthesis of the small fragments of intein, and introduces the concept of quasi modified groups in synthesis in the process of follow-up by trans splicing will be modified groups marked on the target protein N or C terminal. The invention has simple operation and high labeling efficiency, and has important application value in the field of protein marking.

【技术实现步骤摘要】
一种同一体系中同时对两个蛋白进行特异性标记或修饰的方法
本专利技术属于蛋白质标记的标记与修饰领域，特别涉及一种同一体系中同时对两个蛋白进行特异性标记或修饰的方法。
技术介绍
蛋白质标记的标记与修饰，在蛋白质研究应用领域具有重要的位置。如对蛋白质进行可视化标记可用于蛋白质示踪，观察蛋白质的动态变化，以对蛋白质结构功能进行探索；对蛋白质药物类进行功能化修饰可用于维持蛋白质药物的稳定性，延长其半衰期等。传统的蛋白质标记或修饰手段主要是通过化学反应，利用待标记物与蛋白质中氨基酸残基侧链基团反应，从而将待标记物添加于目标蛋白上。但是上述方法往往不具有特异性，因为蛋白质中可能会存在多个相同的氨基酸残基，造成标记多个位点，影响目标蛋白质的标记效果。为了解决这一问题，蛋白质内含子介导的蛋白质标记技术得到深入的研究与应用，可以通过反式剪接技术实现目标蛋白质的特异性标记。尤其是新型蛋白质内含子S1与S11型的出现，使蛋白质的特异性标记技术得到进一步深入。S1型intein的N-intein片段仅含有11个氨基酸，S11型intein的C-intein片段仅含有6个氨基酸，如此短的intein片段可以通过本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种同一体系中同时对两个蛋白进行特异性标记或修饰的方法，包括：(1)将目标蛋白1与S1型intein的C‑intein片段相连构建融合蛋白1；将目标蛋白2与S11型intein的N‑intein片段相连构建融合蛋白2；(2)化学合成S1型intein的N‑intein片段同时在其N端加入linker序列GGG，在linker的首个氨基酸G引入特异性标记1或修饰1，得到合成片段1；化学合成S11型intein的C‑intein片段同时在其C端加入linker序列CFNK，在linker的最末氨基酸K引入特异性标记2或修饰2，得到合成片段2；(3)将融合蛋白1、合成片段1、融合蛋白2及合成片段2混...

【技术特征摘要】
1.一种同一体系中同时对两个蛋白进行特异性标记或修饰的方法，包括：(1)将目标蛋白1与S1型intein的C-intein片段相连构建融合蛋白1；将目标蛋白2与S11型intein的N-intein片段相连构建融合蛋白2；(2)化学合成S1型intein的N-intein片段同时在其N端加入linker序列GGG，在linker的首个氨基酸G引入特异性标记1或修饰1，得到合成片段1；化学合成S11型intein的C-intein片段同时在其C端加入linker序列CFNK，在linker的最末氨基酸K引入特异性标记2或修饰2，得到合成片段2；(3)将融合蛋白1、合成片段1、融合蛋白2及合成片段2混合于同一体系中；通过S1型intein的反式剪接，融合蛋白1的N端被标记上特异性标记1或修饰1，通过S11型intein的反式剪接，融合蛋白2的C端被标记上特异性标记2或修饰2。2.根据权利要求1所述的一种同一体系中同时对两个蛋白进行特异性标记或修饰的方法，其特征在于：所述步骤(1)中的目标蛋白1和目标蛋白2为蛋白酶类、多肽类、蛋白药物或抗体。3.根据权利要求1所述的一种同一体系中同时对两个蛋白进行特异性标记或修饰的方法，其特征在于：所...

【专利技术属性】
技术研发人员：李雪，张露，张晓玲，孟清，
申请(专利权)人：东华大学，
类型：发明
国别省市：上海,31