一种重组蛋白的复性方法技术

本发明专利技术属于发酵工业领域，具体涉及一种重组蛋白的复性方法，将重组蛋白的包涵体用变性液充分溶解，离心后取上清液得到变性蛋白液；将变性蛋白液与复性液混合后加入发酵罐；控制发酵罐的温度、pH、搅拌转速同时液面下通入气体复性。本发明专利技术使用菌体发酵的发酵罐进行复性，利用发酵罐可对pH、搅拌转速、温度等参数进行监测和记录的功能，不需要单独的设备和混合装置，同时采用液面下通气，并用发酵罐流量计等装置有效控制分压，保证整个复性过程可控，有利于工艺的重复性。与传统的混合复性方式相比，本发明专利技术提高了复性工艺的可控性、可追溯性和稳定性，减少了二硫键错配，提升了产品质量，降低了操作难度，并成功实现了复性工艺可放大性。

A refolding method for recombinant protein

The invention belongs to the field of fermentation industry, in particular to a refolding method of recombinant protein, which fully dissolves the inclusion body of the recombinant protein with denatured liquid, centrifuges the supernatant to obtain denatured protein liquid, mixes the denatured protein liquid with the renatured liquid and adds it to the fermentation tank, and controls the temperature, pH and agitation speed of the fermentation tank at the same time under the liquid level. Gas refolding is introduced. The invention uses a fermentation tank for refolding by fermentation of bacteria. The fermentation tank can monitor and record parameters such as pH, stirring speed and temperature. No separate equipment and mixing device are needed. At the same time, under-liquid ventilation is adopted and partial pressure is effectively controlled by devices such as a flowmeter of fermentation tank to ensure that the refolding process is controllable. It is conducive to the repeatability of the process. Compared with the traditional hybrid renaturation method, the invention improves the controllability, traceability and stability of the renaturation process, reduces disulfide bond mismatch, improves product quality, reduces operation difficulty, and successfully realizes the enlargement of the renaturation process.

【技术实现步骤摘要】
一种重组蛋白的复性方法
本专利技术属于发酵工业领域，具体涉及一种重组蛋白的复性方法，尤其是大规模的重组蛋白的复性方法。
技术介绍
重组蛋白是以基因工程和细胞工程等技术生产的、源自生物体内的蛋白药物。重组蛋白已成为现在生物技术生产的最重要的产品。近二十几年来蛋白质药物发展迅速，目前有近百种重组蛋白药物上市，几千种处于研发状态。欧美在蛋白质药物研究上整体实力强，在全球有较大的市场。重组蛋白质药物可分为多肽和基因工程药物、单克隆抗体和基因工程抗体、重组疫苗。与以往的小分子药物相比，重组蛋白质药物具有高活性、特异性强、低毒性、生物功能明确、有利于临床应用的特点。由于其成本低、成功率高、安全可靠，已成为医药产品中的重要组成部分。目前上市的重组蛋白药物大致可以分为以下几类：多肽类激素药：包括人胰岛素、人生长激素、卵泡刺激激素和其他激素；人造血因子：包括重组人促红细胞生成素、粒细胞/单核细胞集落刺激因子GM-CSF、其他造血相关因子；人细胞因子：包括A-干扰素、B-干扰素、其他细胞因子；人血浆蛋白因子：包括重组人凝血因子重组人凝血因子×、重组人凝血因子组织血浆酶原激活物tPA、C反应蛋白、重组人抗本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组蛋白的复性方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将重组蛋白的包涵体用变性液充分溶解，离心后取上清液得到变性蛋白液；(2)将变性蛋白液与复性液混合后加入发酵罐；(3)控制发酵罐的温度、pH、搅拌转速同时液面下通入气体复性。

【技术特征摘要】
1.一种重组蛋白的复性方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将重组蛋白的包涵体用变性液充分溶解，离心后取上清液得到变性蛋白液；(2)将变性蛋白液与复性液混合后加入发酵罐；(3)控制发酵罐的温度、pH、搅拌转速同时液面下通入气体复性。2.根据权利要求1所述的复性方法，其特征在于，步骤(1)所述变性液为：5-8M盐酸胍，5-20mM巯基乙醇，5-50mMTris，pH8.0～9.0。3.根据权利要求1所述的复性方法，其特征在于，步骤(2)所述复性液为：1-2M尿素，50-200mM精氨酸，pH8.5～9.5。4.根据权利要求1所述的复性方法，其特征在于，步骤(2)所述变性蛋白液与复性液的体积比为1:10～1:20。5.根据权利要求1所述的复性方法，其特征在于，在变性液中投入的包涵体量应使复性体系蛋白终浓度为0.1-2.0mg/ml。6.根据权利要求1所述的复性方法，其特征在于，步骤(3)所述发酵罐中复性的温度为5-15℃，pH为8.0～9.0...

【专利技术属性】
技术研发人员：齐连权，李晓然，崔颖，王延山，张琪，姜玲，郑博恺，
申请(专利权)人：北京泰德制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11