玉米籽粒中叶酸的提取和定量方法技术

本发明专利技术涉及植物叶酸提取，具体涉及一种玉米籽粒中叶酸的提取和定量方法。包括如下步骤：取玉米籽粒冻干粉，加入新制的提取液，超声涡旋后，置于100℃温度下震荡10min，冰上迅速冷却；加入α‑淀粉酶，37℃下恒温震荡酶解；加入蛋白酶，37℃下恒温震荡酶解；离心，取上清液，即得；所述提取液的配方为：每100ml提取液中含有NaH2PO4249‑349mg，Na2HPO4·2H2O 659‑759mg，L‑抗坏血酸1‑1.2g，2‑巯基乙醇0.4‑1.0ml，pH 6.8‑7.0。本发明专利技术同时准确定量了玉米籽粒中12种不同尾数、不同氧化态的叶酸，为叶酸代谢物的动态分析提供了技术支持。

【技术实现步骤摘要】
玉米籽粒中叶酸的提取和定量方法
本专利技术涉及植物叶酸提取，具体涉及一种玉米籽粒中叶酸的提取和定量方法。
技术介绍
叶酸是一类水溶性维生素(VB9)，包含叶酸、四氢叶酸及其相应的衍生物。作为一碳代谢的核心辅酶因子，叶酸在一碳循环以及DNA、氨基酸、蛋白等生命物质的合成中发挥着重要的作用。在动植物生长发育过程中，不同尾数、不同氧化形式的叶酸具有不同的生物活性，对动植物的生长发育至关重要。作物是人类和动物获取叶酸的主要来源，然而，作物中的叶酸含量较低，尤其是在谷物中的含量更低。因此，通过基因工程和育种技术来提高植物体内的叶酸水平成为了研究热点，如何获得作物中各种叶酸衍生物含量的可靠数据成为这一研究领域的关键。然而，由于天然样品中的叶酸含量低并且存在多种不稳定的衍生物，致使作物中各种叶酸的准确定量面临很大的挑战。此前已报道过生菜、花椰菜、细菌中的5-甲基四氢叶酸(5-M-THF)及其多谷氨酸衍生物的定量。但针对作物中天然的多谷氨酸5-甲酰四氢叶酸的定量少有报道。Campos等[1]通过比较婴幼儿配方奶粉在双酶处理和三酶处理下的单谷氨酸5-甲酰四氢叶酸含量，利用差值表征其多谷氨酸盐的含量，但本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.从玉米籽粒中提取叶酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)取玉米籽粒冻干粉，加入新制的提取液，超声涡旋后，置于100℃温度下震荡10min，冰上迅速冷却；(2)加入α‑淀粉酶，37℃下恒温震荡酶解；(3)加入蛋白酶，37℃下恒温震荡酶解；(4)离心，取上清液，即得；所述提取液的配方为：每100ml提取液中含有NaH2PO4 249‑349mg，Na2HPO4·2H2O659‑759mg，L‑抗坏血酸1‑1.2g，2‑巯基乙醇0.4‑1.0ml，pH 6.8‑7.0。

【技术特征摘要】
1.从玉米籽粒中提取叶酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)取玉米籽粒冻干粉，加入新制的提取液，超声涡旋后，置于100℃温度下震荡10min，冰上迅速冷却；(2)加入α-淀粉酶，37℃下恒温震荡酶解；(3)加入蛋白酶，37℃下恒温震荡酶解；(4)离心，取上清液，即得；所述提取液的配方为：每100ml提取液中含有NaH2PO4249-349mg，Na2HPO4·2H2O659-759mg，L-抗坏血酸1-1.2g，2-巯基乙醇0.4-1.0ml，pH6.8-7.0。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，每毫克玉米籽粒冻干粉使用10-15μL的提取液，0.48-0.72个酶活力单位的α-淀粉酶，0.0021-0.0028个酶活力单位的蛋白酶。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，每毫克玉米籽粒冻干粉加入13μL的提取液，0.48个酶活力单位的α-淀粉酶，0.0021个酶活力单位的蛋白酶。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，每100ml提取液中含有NaH2PO4299.95mg，Na2HPO4·2H2O709.8mg，L-抗坏血酸1g，2-巯基乙醇0.5ml，pH7.0。5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，冰上迅速冷却5min；所述步骤(2)中，37℃下恒温震荡酶解30min；所述步骤(3)中，37℃下恒温震荡酶解60min。6.玉米籽粒中叶酸的定量方法，其特征在于，包括如下步骤：标准曲线绘制：用提取液将待测叶酸的标准品溶液稀释为梯度浓度，向每个浓度的标准品溶液中加入内标，然后分别进行HPLC–MS/MS检测，建立标准品和内标的相对响应值与标准品和内标的相对浓度之间的标准曲线方程；叶酸提取：使用权利要求1-5任一所述的方法提取玉米籽粒中的叶酸，提取时在提取液中加入内标；叶酸定量：对提取物进行HPLC–MS/MS检测，得到待测叶酸和内标的相对响应值；将待测叶酸和内标的相对响应值以及内标的浓度代入所述标准曲线方程中...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩莉妲，万幸，张春义，
申请(专利权)人：中国农业科学院生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11