【技术实现步骤摘要】
应用iTRAQ技术研究三阴性乳腺癌外泌体差异表达蛋白的方法
本专利技术涉及三阴性乳腺癌领域，具体涉及一种应用iTRAQ技术研究三阴性乳腺癌外泌体差异表达蛋白的方法。
技术介绍
三阴性乳腺癌(triple-negativebreastcancer,TNBC)是指雌激素受体(estrogenreceptor，ER)、孕激素受体(progesteronereceptor，PR)及人类上皮细胞生长因子受体2(humanepidermalgrowthfactorreceptor2，Her2)均无表达的一类乳腺癌，具有发病低龄化、恶性程度高，侵袭性强，仅有部分对放化疗敏感，具有治疗棘手及易复发的特征，在治疗后1～3年内为复发高峰期，大多数患者死于治疗的最初5年，是目前乳腺癌治疗最棘手的亚型之一。三阴性乳腺癌的致病机制和互作蛋白十分复杂，至今所知甚少。外泌体(exosomes)是一种由细胞分泌的、大小在30-120nm的膜状结构。其广泛存在于血液、尿液、唾液，等各种体液中。在外泌体被发现的初期，许多研究者认为外泌体可能是作为“垃圾袋”，用来存放细胞中各种不再需要的物质，然而，现...
【技术保护点】
1.应用iTRAQ技术研究三阴性乳腺癌外泌体差异表达蛋白的方法，其特征在于，该方法包含以下步骤：(1)外泌体及外泌体蛋白质的提取处理；(2)对步骤(1)所得外泌体蛋白样品进行酶解和除盐得到多肽；(3)对步骤(2)所得多肽进行iTRAQ标记、混合；(4)对步骤(3)标记的多肽肽段混合物进行HPLC分离及LC‑MS分析；(5)对上述所得到质谱鉴定结果进行生物信息学分析、定量分析获取三阴性乳腺癌外泌体差异表达蛋白。
【技术特征摘要】
1.应用iTRAQ技术研究三阴性乳腺癌外泌体差异表达蛋白的方法，其特征在于，该方法包含以下步骤：(1)外泌体及外泌体蛋白质的提取处理；(2)对步骤(1)所得外泌体蛋白样品进行酶解和除盐得到多肽；(3)对步骤(2)所得多肽进行iTRAQ标记、混合；(4)对步骤(3)标记的多肽肽段混合物进行HPLC分离及LC-MS分析；(5)对上述所得到质谱鉴定结果进行生物信息学分析、定量分析获取三阴性乳腺癌外泌体差异表达蛋白。2.如权利要求1所述的应用iTRAQ技术研究三阴性乳腺癌外泌体差异表达蛋白的方法，其特征在于，外泌体及外泌体蛋白的提取处理分为实验组和对照组，实验组A为三阴性乳腺癌患者血液样品、对照组B为HER2阳性的乳腺癌患者血液样品、对照组C为正常人血液样品。3.如权利要求1所述的应用iTRAQ技术研究三阴性乳腺癌外泌体差异表达蛋白的方法，其特征在于，步骤(1)中外泌体的提取采用美国101Bio的试剂盒ExosomeIsolationKit从血浆中提取外泌体，外泌体蛋白的提取和处理包括蛋白裂解液裂解，DTT还原和IAM烷基化处理。4.如权利要求1所述的应用iTRAQ技术研究三阴性乳腺癌外泌体差异表达蛋白的方法，其特征在于，步骤(2)中蛋白质酶解除盐方法为利用胰蛋白酶对蛋白质进行酶解，利用C18柱对酶解后的肽段进行脱盐，真空冷冻干燥脱盐后的肽段得到多肽。5.如权利要求1所述的应用iTRAQ技术研究三阴性乳腺癌外泌体差异表达蛋白的方法，其特征在于，步骤(3)中多肽标记方法为采用iTRAQ-8标试剂盒对多肽进行标记。6.如权利要求1所述的应用iTRAQ技术研究三阴性乳腺癌外泌体差异表达蛋白的方法，其特征在于，步骤(4)具体包括：a)HPLC分离多肽肽段混合物；色谱仪：Ultimate3000HPLC系统；色谱柱：DurashellC18柱；流动相：流动相A为2％乙腈/0.1％甲酸/98％H2O,缓冲液B为98％乙腈/0.1％甲酸/2％H2O；流速：1ml/min；样品采集：每分钟收集一个样品，共收集42个样品组分，合并样品组分为12个组分，并用Strata-X柱进行脱盐，真空干燥脱盐后的样品即得到多肽样品；b)步骤a)真空干燥后的多肽样品溶解后进行质谱鉴定；质谱仪：TripleTOF5600plus+EksigentnanoLC系统；多肽样品溶液配制和捕获柱上样：将步骤a)真空干燥后的多肽样品溶解于2％...
【专利技术属性】
技术研发人员：李丽仙，郑晓东，辇伟奇，廖斌，杨薇，伍青，庞才双，
申请(专利权)人：重庆市肿瘤研究所，
类型：发明
国别省市：重庆,50
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