一种杏仁香茶树种质资源的筛选方法技术

本发明专利技术公开了一种杏仁香茶树种质资源的筛选方法，包括如下步骤：挑选三份茶树原料，其中两份具有“杏仁香”茶树种质资，另一份无“杏仁香”茶树种质资，称取50‑70mg样本，放入研磨机中研磨，取出后，超声提取20‑40min；向样本加入100‑300μL的氯仿，混合均匀后，加入水，混匀，超声提取10‑30min；向玻璃衍生小瓶中加入甲氧胺盐酸盐吡啶溶液，涡旋震荡2min后，于震荡培养箱中进行肟化反应，取出样本后，在室温放置30min；采集样本数据进行GC‑MS代谢组学分析。通过本发明专利技术技术方案可以快速的对茶叶代谢物中扁桃腈的含量进行快速的分析，从而可以快速的实现杏仁香茶树种质资源的筛选工作，将原来通过4年时间选育的工作大大的缩短。

【技术实现步骤摘要】
一种杏仁香茶树种质资源的筛选方法
本专利技术涉及茶叶种植
，具体为一种杏仁香茶树种质资源的筛选方法。
技术介绍
“杏仁香”红茶是利用一种特殊的茶树原料加工制成的红茶，成品茶具有杏仁奶香，这类种质资源极为稀少，且无法从茶树的生物学形态进行辨识，因此这类茶树种质资源进行品种选育极为困难。目前的筛选方法为单株采集鲜叶或单株扦插繁育后分别进行红茶加工试制，但是这两种方法工作量极大，筛选速度均较慢。利用单株采集鲜叶加工试制的方法，由于单株茶树茶青数量较少，加工困难，无法保持种质资源原有的特性，因此造成具有某种特性的茶树种质资源无法筛选到，且每株茶树单独加工耗费人力及时间极多，效率低，而利用无性扦插育苗，对扦插苗栽培种植后再进行加工试制的方法，选育时间需要4年以上，这种大规模的扦插繁育最终可以从几千份的茶树种质资源中筛选到能够加工“杏仁香”的品种，但该方法具有耗时长、成本高、工作量大等缺点。因此需要一种新的技术方案，可以快速的筛选出杏仁香茶树品种，便于快速的种植这种稀缺品种。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种杏仁香茶树种质资源的筛选方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种杏仁香茶树种质资源的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、原料选择：挑选三份茶树原料，其中两份具有“杏仁香”茶树种质资，另一份无“杏仁香”茶树，作为对照；S2、样本研磨：称取50-70mg样本，放入研磨机中研磨，取出后，超声提取20-40min；S3、样本提取：向S2中样本加入100-300μL的氯仿，混合均匀后，加入水，混匀，超声提取10-30min；向玻璃衍生小瓶中加入甲氧胺盐酸盐吡啶溶液，涡旋震荡2min后，于震荡培养箱中进行肟化反应，取出样本后，在室温放置30min；S4、数据分析：采集样本数据进行GC-MS代谢组学分析。作为本专利技术的一种优选技术方案：在步骤S1中三份茶树样本均采集一芽两叶状态。作为本专利技术的一种优选技术方案：在步骤S2中加入360μL的冷甲醇和40μL的内标置入研磨机进行研磨。作为本专利技术的一种优选技术方案：在步骤S3中震荡培养箱中温度处于30-40℃，反应时间90min。作为本专利技术的一种优选技术方案：在步骤S4中，GC-MS色谱条件：DB-5MS毛细管柱，载气为高纯氦气，流速1.0mL/min，进样口的温度为260℃，进样量1μL，分流进样，分流比6:1，溶剂延迟5min。作为本专利技术的一种优选技术方案：在步骤S4中，GC-MS质谱条件：电子轰击离子源，离子源温度230℃，四级杆温度150℃，电子能量70eV，扫描方式为全扫描模式(SCAN)。作为本专利技术的一种优选技术方案：所述氦气纯度不小于99.999％。作为本专利技术的一种优选技术方案：质量扫描范围：m/z50-500。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：通过本专利技术技术方案，可以发现具有杏仁香茶树种质资源其代谢物中扁桃腈含量丰富，而扁桃腈含量较少甚至无的茶树品种则无法产生杏仁香，而通过本专利技术技术方案可以快速的对茶叶代谢物中扁桃腈的含量进行快速的分析，从而可以快速的实现杏仁香茶树种质资源的筛选工作，将原来通过4年时间选育的工作大大的缩短，可以精确的确定杏仁香茶树质资源，更加满足市场的需求，便于实施，操作方便，实用性强，便于推广使用。附图说明图1为“杏仁香”种质1代谢物总离子流图；图2为“杏仁香”种质2代谢物总离子流图；图3为非“杏仁香”种质代谢物总离子流图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1本专利技术提供一种技术方案：一种杏仁香茶树种质资源的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、原料选择：挑选三份茶树原料，其中两份具有“杏仁香”茶树种质资，另一份无“杏仁香”茶树，采集3份茶树的一芽两叶；S2、样本研磨：称取60mg样本，360μL的冷甲醇和40μL的内标放入研磨机中研磨，取出后，超声提取30min；S3、样本提取：向S2中样本加入200μL的氯仿，混合均匀后，加入水，混匀，超声提取30min；向玻璃衍生小瓶中加入甲氧胺盐酸盐吡啶溶液，涡旋震荡2min后，于37℃震荡培养箱中进行肟化反应，反应时间90min，取出样本后，在室温放置30min；S4、数据分析：采集样本数据进行GC-MS代谢组学分析。在步骤S4中，GC-MS色谱条件：DB-5MS毛细管柱，载气为高纯氦气，氦气纯度不小于99.999％，流速1.0mL/min，进样口的温度为260℃，进样量1μL，分流进样，分流比6:1，溶剂延迟5min。在步骤S4中，GC-MS质谱条件：电子轰击离子源，离子源温度230℃，四级杆温度150℃，电子能量70eV，扫描方式为全扫描模式，质量扫描范围：m/z50-500。统计两组具有“杏仁香”的样品与一组“非杏仁香”样品的代谢物，共发现300多种代谢物，其中在“杏仁香”种植资源中同时调高或调低，且与非“非杏仁香”种质资源具有显著性差异的物质(p-value＜0.01)共48个。对上述物质其代谢通路通路进行分析，发现检测到的代谢物中有苯甲醇、S-扁桃酸、扁桃腈、苯丙氨酸等代谢物共同参与了香气物质苯甲醛的代谢途径，而苯甲醛是一类具有杏仁味道的香料物质，也是在红茶中产生“杏仁香”的物质。在参与形成苯甲醛的代谢物中，扁桃腈只存在于在具有“杏仁香”的茶树种质资源中，红茶加工过程中扁桃腈水解生成苯甲醛，产生杏仁香，三组茶叶其代谢物总离子流图如附图图1至图3所示，因此扁桃腈是鉴定“杏仁香”种质资源的特征代谢物。筛选出的代谢差异物通过本专利技术技术方案，可以发现具有杏仁香茶树种质资源其代谢物中扁桃腈含量丰富，而扁桃腈含量较少甚至无的茶树品种则无法产生杏仁香，而通过本专利技术技术方案可以快速的对茶叶代谢物中扁桃腈的含量进行快速的分析，从而可以快速的实现杏仁香茶树种质资源的筛选工作，将原来通过4年时间选育的工作大大的缩短，可以精确的确定杏仁香茶树质资源，更加满足市场的需求，便于实施，操作方便，实用性强，便于推广使用。实施例2本专利技术提供另一实施方式，一种杏仁香茶树种质资源的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、原料选择：挑选三份茶树原料，其中两份具有“杏仁香”茶树种质资，另一份无“杏仁香”茶树，作为对照；S2、样本研磨：称取50mg样本，放入研磨机中研磨，取出后，超声提取20min；S3、样本提取：向S2中样本加入100μL的氯仿，混合均匀后，加入水，混匀，超声提取10min；向玻璃衍生小瓶中加入甲氧胺盐酸盐吡啶溶液，涡旋震荡2min后，于震荡培养箱中进行肟化反应，取出样本后，在室温放置30min；S4、数据分析：采集样本数据进行GC-MS代谢组学分析。在步骤S1中三份茶树样本均采集一芽两叶状态；在步骤S2中加入360μL的冷甲醇和40μL的内标置入研磨机进行研磨；步骤S3中震荡培养箱中温度处于30-40℃，反应时间90min。在步骤S4中，GC-MS色谱条件：DB-5MS毛细管柱，载气为高纯氦气，流速1.0mL本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种杏仁香茶树种质资源的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、原料选择：挑选三份茶树原料，其中两份具有“杏仁香”茶树种质资，另一份无“杏仁香”茶树种质资，作为对照；S2、样本研磨：称取50‑70mg样本，放入研磨机中研磨，取出后，超声提取20‑40min；S3、样本提取：向S2中样本加入100‑300μL的氯仿，混合均匀后，加入水，混匀，超声提取10‑30min；向玻璃衍生小瓶中加入甲氧胺盐酸盐吡啶溶液，涡旋震荡2min后，于震荡培养箱中进行肟化反应，取出样本后，在室温放置30min；S4、数据分析：采集样本数据进行GC‑MS代谢组学分析。

【技术特征摘要】
1.一种杏仁香茶树种质资源的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、原料选择：挑选三份茶树原料，其中两份具有“杏仁香”茶树种质资，另一份无“杏仁香”茶树种质资，作为对照；S2、样本研磨：称取50-70mg样本，放入研磨机中研磨，取出后，超声提取20-40min；S3、样本提取：向S2中样本加入100-300μL的氯仿，混合均匀后，加入水，混匀，超声提取10-30min；向玻璃衍生小瓶中加入甲氧胺盐酸盐吡啶溶液，涡旋震荡2min后，于震荡培养箱中进行肟化反应，取出样本后，在室温放置30min；S4、数据分析：采集样本数据进行GC-MS代谢组学分析。2.根据权利要求1所述的一种杏仁香茶树种质资源的筛选方法，其特征在于：在步骤S1中三份茶树样本均采集一芽两叶状态。3.根据权利要求1所述的一种杏仁香茶树种质资源的筛选方法，其特征在于：在步骤S2中加入360μL的冷甲醇和40μL的内标置入研磨机...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜晓辉，吴华玲，方开星，陈栋，王秋霜，秦丹丹，李红建，
申请(专利权)人：广东省农业科学院茶叶研究所，
类型：发明
国别省市：广东,44