【技术实现步骤摘要】
一种细菌生物膜胞外DNA提取方法
本专利技术属于生物领域，具体涉及一种细菌生物膜胞外DNA提取方法。
技术介绍
细菌生物膜是微生物在生长过程中为了适应生存环境而形成的与浮游细胞相对应的存在形式。细菌生物膜的特殊结构和其对耐药性的影响是造成很多慢性顽固性感染的原因。胞外DNA(eDNA)来自于死亡细菌体裂解释放或活菌主动分泌，是细菌生物膜胞外基质中的重要成分之一，eDNA在生物膜形成、成熟及转化方面发挥着重要作用。关于eDNA的提取，目前使用最多的是酶解法，已有研究表明，采用N-糖酰胺酶从不动杆菌生物膜中提取的eDNA，其产量较对照组提高了60到190倍，并且没有可观测的细胞裂解。eDNA可以分为游离态和结合态，提取结合态eDNA是提取生物膜中eDNA的关键步骤。虽然采用化学方法如SDS和NaOH处理能提取更多的eDNA，但是死活染色和显微镜观测结果表明化学提取过程中有大量细胞膜损坏，这可能会导致基因组DNA释放，从而影响eDNA的质量。酶处理能降解基质并释放结合态eDNA，前人研究了N-糖酰胺酶处理从大肠杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌生物膜中提取的eDNA量不...
【技术保护点】
1.一种细菌生物膜胞外DNA提取方法，其特征在于包括以下步骤：1)取生物膜样品，配制成OD600为1～3的细胞悬液，然后加入5～20μg/ml纤维素酶，35～40℃孵育10～60min，再加入2～10μg/ml蛋白酶K，35～40℃孵育30～120min；2)将酶解后的细胞悬液用0.1～0.5μm滤膜过滤，收集滤液，1～5℃离心，取上清；3)在上清中加入0.05～0.3倍体积的1～5mol/L乙酸钠溶液与1～5倍体积的无水乙醇，‑30～‑10℃过夜后再次离心，将沉淀物用无水乙醇洗涤，烘干，即得。
【技术特征摘要】
1.一种细菌生物膜胞外DNA提取方法，其特征在于包括以下步骤：1)取生物膜样品，配制成OD600为1～3的细胞悬液，然后加入5～20μg/ml纤维素酶，35～40℃孵育10～60min，再加入2～10μg/ml蛋白酶K，35～40℃孵育30～120min；2)将酶解后的细胞悬液用0.1～0.5μm滤膜过滤，收集滤液，1～5℃离心，取上清；3)在上清中加入0.05～0.3倍体积的1～5mol/L乙酸钠溶液与1～5倍体积的无水乙醇，-30～-10℃过夜后再次离心，将沉淀物用无水乙醇洗涤，烘干，即得。2.如权利要求1所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：蔡鹏，彭娜，高春辉，吴一超，黄巧云，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42
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