一种FFPE样本核酸提取的快速脱蜡方法技术

本发明专利技术公开了一种FFPE样本核酸提取的快速脱蜡方法，涉及石蜡样本核酸提取领域，本发明专利技术的FFPE提取方法通过单一温度孵育，采用可溶解石蜡的油相试剂和可裂解组织样本的水相试剂，实现简单快速的FFPE样本脱蜡，在加有FFPE的样本管中加入该种试剂后，在特定温度条件下孵育30分钟至2小时，用机械装置或移液装置取出下层水相层的液体，该水相液体即为可用于后续核酸提取操作。本发明专利技术还提供了一种利用该方法进行快速脱蜡的试剂盒。本发明专利技术采用单一温度进行脱蜡和组织裂解操作，简化实验流程，缩短整体脱蜡时长；采用特定的试剂体系，可实现较理想的脱蜡和核酸提取效果。

【技术实现步骤摘要】
一种FFPE样本核酸提取的快速脱蜡方法
本专利技术涉及从石蜡包埋样本中提取核酸，尤其涉及一种FFPE样本核酸提取的快速脱蜡方法。
技术介绍
福尔马林固定石蜡包埋技术(Formalin-FixedandParaffin-Embedded,FFPE)是一种组织保存技术。这种技术为了维持细胞核蛋白结构，先用福尔马林固定然后将组织用固体石蜡包埋，以供切片后作组织学诊断或研究使用。如果要对FFPE组织进行分子生物学研究，首先就是要进行DNA的提取。但是固定剂的交联作用对核酸结构有损，福尔马林组织固定与石蜡包埋作用会妨碍核酸的提取，抑制DNA聚合酶的活性从而影响PCR扩增。除此之外，石蜡阻碍消化液对组织的渗透，从而抑制蛋白酶K和组织内蛋白的接触，影响组织消化和DNA释放。所以为了消除石蜡对DNA提取和PCR扩增的不良影响，必须在保证不增加外源性PCR抑制因子，并尽量减少DNA额外损伤的前提下对组织进行彻底脱蜡。目前应用在成熟试剂盒中的脱蜡方法主要是有机溶剂脱蜡法，其中应用最广泛的为脱蜡较彻底的二甲苯脱蜡法。二甲苯脱蜡方法主要包括：1)将FFPE浸泡在二甲苯溶液中充分震荡，使石蜡溶解在二甲苯中；2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种FFPE样本核酸提取的快速脱蜡方法，其特征在于，包括以下步骤：第一步：将FFPE样本与水相试剂和油相试剂充分混合，形成第一混合液；第二步：将第一混合液加热到50‑95℃范围内的任意温度，在该温度下充分孵育10min‑72h，形成第二分离液，所述第二分离液上层为油相，下层为水相；第三步：取出下层水相，进行核酸提取；所述油相试剂为与水不互溶、可溶解石蜡的油相溶液，所述水相试剂为FFPE样本裂解液且与石蜡不互溶、可溶于水的水相溶液，所述水相试剂包括pH缓冲液、表面活性剂和金属离子螯合剂。

【技术特征摘要】
1.一种FFPE样本核酸提取的快速脱蜡方法，其特征在于，包括以下步骤：第一步：将FFPE样本与水相试剂和油相试剂充分混合，形成第一混合液；第二步：将第一混合液加热到50-95℃范围内的任意温度，在该温度下充分孵育10min-72h，形成第二分离液，所述第二分离液上层为油相，下层为水相；第三步：取出下层水相，进行核酸提取；所述油相试剂为与水不互溶、可溶解石蜡的油相溶液，所述水相试剂为FFPE样本裂解液且与石蜡不互溶、可溶于水的水相溶液，所述水相试剂包括pH缓冲液、表面活性剂和金属离子螯合剂。2.如权利要求1所述的FFPE样本核酸提取的快速脱蜡方法，其特征在于，所述油相试剂为矿物油、石蜡油、植物油和硅油中的任意一种或者多种。3.如权利要求1所述的FFPE样本核酸提取的快速脱蜡方法，其特征在于，所述表面活性剂为tween、span、Triton、十二烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠的一种或者多种。4.如权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：方晓霞，徐宏，古宏晨，
申请(专利权)人：上海迈景纳米科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31