一种磁珠法核酸提取转化试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术提供了一种磁珠法核酸提取转化试剂盒及其使用方法。所述试剂盒包括裂解液、蛋白酶K、磁珠液、转化试剂、核酸保护剂、结合液、洗涤液Ⅰ、洗涤液Ⅱ及洗脱剂。该试剂盒的使用方法包括步骤：(1)裂解；(2)转化；(3)分层；(4)结合；(5)初级洗涤；(6)次级洗涤；(7)干燥；(8)洗脱。本发明专利技术所述的试剂盒及其使用方法能实现样本在进行自动化核酸提取的同时完成转化。样本被裂解释放核酸后便开始转化，并且在转化完成后通过结合液使核酸与蛋白质分离，然后用磁珠法对甲基化的核酸进行纯化，再以后续对样品的qPCR检测时试验程序中的预变性步骤来代替前面省略的脱磺基步骤，整个提取转化程省去了原核酸提取步骤中的纯化过程。

【技术实现步骤摘要】
一种磁珠法核酸提取转化试剂盒及其使用方法
本专利技术涉及生物
，特别涉及一种磁珠法核酸提取转化试剂盒，以及使用该试剂盒的方法。
技术介绍
表观遗传学是研究在基因的核苷酸序列不发生改变的情况下，基因的表达和调控的可遗传变化的一门遗传学分支学科，表观遗传的现象很多，比如RNA介导的基因沉默，组蛋白修饰等。甲基化是生物的表观遗传之一，且与多种疾病的发生密切相关。研究发现，DNA异常甲基化与肿瘤的发生、发展、细胞癌变有着密切的联系，近年来以甲基化分析为代表的表观遗传学和表观基因组学较为活跃。DNA甲基化(DNAmethylation)是指在DNA甲基化转移酶(DNMT)催化下，以S-腺苷甲硫氨酸为甲基供体，将活性甲基转移至DNA链中特定碱基上的化学修饰过程。DNA甲基化一般发生在CpG位点(胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤位点，即DNA序列中胞嘧啶后紧连鸟嘌呤的位点)。经DNA甲基转移酶催化胞嘧啶转化为5-甲基胞嘧啶。人类基因中约80％～90％的CpG位点已被甲基化，但是在某些特定区域，如富含胞嘧啶和鸟嘌呤的CpG岛则未被甲基化。这与包含所有广泛表达基因在内的56％的哺乳动物基因中的启动子有关。1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种磁珠法核酸提取转化试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括裂解液、蛋白酶K、磁珠液、转化试剂、核酸保护剂、结合液、洗涤液Ⅰ、洗涤液Ⅱ及洗脱剂。

【技术特征摘要】
1.一种磁珠法核酸提取转化试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括裂解液、蛋白酶K、磁珠液、转化试剂、核酸保护剂、结合液、洗涤液Ⅰ、洗涤液Ⅱ及洗脱剂。2.根据权利要求1所述的磁珠法核酸提取转化试剂盒，其特征在于：所述裂解液包括Tris-HCl、异硫氰酸胍、氢氧化钠、NonidetP40、叠氮钠、异丙醇、TritonX-100、儿茶素和CarrierRNA；优选地，Tris-HCl的摩尔浓度为15mmol/L，pH为3.3；优选地，异硫氰酸胍的摩尔浓度为10mmol/L；优选地，氢氧化钠的摩尔浓度为5mmol/L；优选地，NonidetP40的质量百分比浓度为5％；优选地，叠氮钠的质量百分比浓度为0.01％；优选地，异丙醇的质量百分比浓度为85％；优选地，TritonX-100的质量百分比浓度为4％；优选地，儿茶素的质量百分比浓度为2％；优选地，CarrierRNA的浓度为0.5μg/μl。3.根据权利要求1所述的磁珠法核酸提取转化试剂盒，其特征在于：所述磁珠液包括Tris-HCl、EDTA-2Na和磁珠；优选地，所述磁珠液中磁珠的含量为50mg/ml，所述磁珠为超顺四氧化三铁或超顺三氧化二铁制成的纳米磁性颗粒，且外表由表面修饰有羟基或羧基的二氧化硅包被。4.根据权利要求1所述的磁珠法核酸提取转化试剂盒，其特征在于：所述转化试剂包括重亚硫酸盐和/或亚硫酸氢盐，以及尿素和对苯二酚；所述重亚硫酸盐包括重亚硫酸钠，所述亚硫酸氢盐包括亚硫酸氢钠、亚硫酸氢镁、亚硫酸氢铵、偏亚硫酸氢钾、偏亚硫酸氢钠中的一种或多种。5.根据权利要求1所述的磁珠法核酸提取转化试剂盒，其特征在于：所述洗涤液Ⅰ包括Tris-HCl、乙醇、二硫苏糖醇；优选地，Tris-HCl的摩尔浓度为65mmol/L；优选地，乙醇的质量百分比浓度为70～80％；优选地，二硫苏糖醇的质量百分比浓度为0.5％。6.根据权利要求1所述的磁珠法核酸提取转化试剂盒，其特征在于：所述洗涤液Ⅱ包括醋酸钠和乙醇；优选地，所述醋酸钠的摩尔浓度为30mmol/L；优选地，所述乙醇的质...

【专利技术属性】
技术研发人员：许嘉森，吴诗扬，刘志明，赖炳林，严志会，
申请(专利权)人：益善生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44