一种基于磁珠的DNA提取方法、裂解液及试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种基于磁珠的DNA提取方法、裂解液及试剂盒。所述裂解液钠离子含量大于或等于140mmol的pH值在7至9的缓冲液中含有3mol/L至6mol/L离液剂、5mmol至20mmol的金属螯合剂、以及质量分数在5％至15％的聚乙二醇。所述提取方法包括以下步骤：(1)获得裂解反应体系；(2)裂解反应体系；(3)加入纳米磁珠；(4)获得结合有DNA的磁珠；(5)洗涤后进行DNA洗脱。所述试剂盒包括裂解液、蛋白酶K溶液、磁珠分散液、第一洗涤液、第二洗涤液、第三洗涤液、以及洗脱液。本发明专利技术试剂无毒，提高了实验安全性；只需要一部加液操作，人工成本大幅降低。

【技术实现步骤摘要】
一种基于磁珠的DNA提取方法、裂解液及试剂盒
本专利技术属于核酸提取领域，更具体地，涉及一种基于磁珠的DNA提取方法及裂解液。
技术介绍
DNA提取方法，是DNA监测的基础，有着重要的应用前景，目前DNA提取的生物样本采用毛发根部、口腔上皮细胞等等；口腔上皮细胞是由多层细胞组成，基底层细胞能不断分裂增生，以补充表层衰老或损伤脱落的细胞，具有较强的再生能力，代谢旺盛，且易脱落，上皮细胞与其他类型细胞一样具有完整的基因组DNA。提取口腔上皮细胞是一种简单，无创伤，无疼痛的取样方式，适用各个年龄阶段的人群。因此常成为疾病诊断，科研的实验材料传统DNA提取方法，多采用酚氯仿等有机试剂进行抽提，该方法存在有机试剂污染，甚至毒害的危险，且有收获效率不高，纯度不够等缺点。而离心柱法(过柱法)通过离心柱上的某些基团与DNA进行结合，从而得到DNA的方法，该方法极大的提搞了口腔拭子提取DNA的浓度和纯度。但需要在EP管中操作，需要反复离心清理后方可获得DNA产物，操作过程繁琐，无法做到批量化生产。而利用磁珠的化学基团对DNA的提议性吸附和解吸附，在外加磁场的作用下，快速的与母液分离，这种方法快速简单，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于基于磁珠的DNA提取方法的裂解液，其特征在于，钠离子含量大于或等于140mmol的pH值在7至9的缓冲液中含有3mol/L至6mol/L离液剂、5mmol至20mmol的金属螯合剂、以及质量分数在5％至15％的聚乙二醇。

【技术特征摘要】
1.一种用于基于磁珠的DNA提取方法的裂解液，其特征在于，钠离子含量大于或等于140mmol的pH值在7至9的缓冲液中含有3mol/L至6mol/L离液剂、5mmol至20mmol的金属螯合剂、以及质量分数在5％至15％的聚乙二醇。2.如权利要求1所述的裂解液，其特征在于，所述聚乙二醇分子量大于等于2000，优选为6000至10000，更优选为8000。3.如权利要求1所述的裂解液，其特征在于，所述离液剂选自盐酸胍、异硫氰酸胍中的一种或多种的组合。4.一种基于磁珠的DNA提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将生物样本与预混有蛋白酶K的如权利要求1或2所述的裂解液按照体积比1:1～2混匀，获得裂解反应体系；(2)将步骤(1)中获得的裂解反应体系加热至裂解温度处理30分钟至60分钟，进行裂解获得裂解后的裂解反应体系；(3)将步骤(2)中获得的裂解后的反应体系，加入纳米磁珠，其中每毫升加入2mg至5mg的纳米磁珠获得结合反应体系；(4)将步骤(3)中获得的结合反应体系结合处理10分钟以上，期间保持纳米磁珠均匀分散，磁力分离获得结合有DNA的磁珠；(5)将步骤(4)中获得的结合有DNA的磁珠洗涤后进行DNA洗脱，获得生物样本DNA。5.如权利要求4所述的基于磁珠的DNA提取方法，其特征在于，步骤(1)所述生物样本与所述裂解液按照体积比1:1混匀。6.如权利要求4所述的基于磁珠的DNA提取方法，其特征在于，所述步骤(2)所述裂解温度为56℃至65℃，优选65℃。7.如权利要求4所述的基于磁珠的DNA提取方法，其特征在于，所述步骤(3)每毫升加入3mg的纳米磁珠。8.如权利要求4所述的基于磁珠的DNA提取方法，其特征在于，步骤(4)所述保持纳米磁珠均匀分散具体如下：每3分钟至5分钟，将结合反应体系震荡混匀。9.一种配合磁棒法核酸自动化提取仪的试剂盒，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯思文，吴晗彬，孙祥忠，王佳港，
申请(专利权)人：武汉纳磁生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42