利用高效液相色谱鉴别金银花和山银花的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用高效液相色谱鉴别金银花和山银花的方法，其特征在于，当待测物为金银花或山银花中的一种或两种时，通过高效液相色谱检测待测物干燥品中断马钱子酸的重量百分比来鉴别金银花和山银花，当测待测物干燥品中断马钱子酸含量小于1.5％，判定为非金银花；断马钱子酸含量大于1.0％，判定为非山银花。断马钱子酸含量小于等于1.5％，且大于等于1.0％时，判定为金银花或山银花的混合物。本发明专利技术通过高效液相色谱检测金银花和山银花干燥品中断马钱子酸的重量百分比来鉴别金银花和山银花，快捷、准确，为药品的生产、流通、使用过程中提供了一种鉴别真假的依据。

【技术实现步骤摘要】
利用高效液相色谱鉴别金银花和山银花的方法
本专利技术属于中药材来源品种鉴定
，涉及一种鉴别金银花和山银花的方法，具体涉及一种利用高效液相色谱鉴别金银花和山银花的方法。
技术介绍
金银花和山银花自2005版《中华人民共和国药典》起分列为两种药材。由于二者原植物种属相近、药材外观形态相似，难以区分，因此市场上金银花和山银花药材来源不清、品种混乱，因为山银花产量大，价格低，市场上经常存在山银花冒充金银花现象，然而两者的物质基础相差较大，从而直接影响到药材及其制剂的疗效，更严重的是山银花中皂苷含量比金银花多，而皂苷可以导致注射剂的溶血现象，直接危害用药者的生命安全。用传统方法可将金银花及山银花同其他药材分开，但是现有的用于金银花与山银花两者之间的品种鉴别方法均存在一些不足之处。如传统的外观形态鉴别依赖经验、主观性大，尤其是对于市场上两者混合品或粉碎状态无法鉴别；DNA分子鉴定法技术复杂、环境为万级实验，要求高，成本高，检验周期长，影响因素多导致重复性差。药理法验证成本高、周期长、影响因素多导致误差大，这些方法虽然可以在一定程度上对近缘品种进行区分，但无法对药效的优劣进行评价。专利CN103173532B(一种鉴别金银花和山银花的方法及其应用)涉及一种鉴别金银花和山银花的方法及其应用。本方法包括PCR扩增ITS2核苷酸序列，包括1)提取样品DNA；2)PCR扩增含有核糖体DNA的ITS2序列的片段；3)对扩增产物进行拼接，获得完整ITS2基因间隔区；4)构建样品的ITS2序列的NJ树。专利CN104419754A(一种快速鉴别金银花真伪的方法)公开了一种鉴别金银花及其常见伪品山银花的方法，是利用高分辨率溶解曲线技术对金银花与山银花的标志性核酸位点进行分析。本方法通过对供试金银花样品进行DNA提取、PCR扩增和HRM分析，确认标志性核酸位点分型，进而对金银花真伪进行鉴定。上述方法属于DNA分子鉴定法、需要PCR扩增，技术复杂，成本高。专利CN105277721B(一种鉴别口炎清制剂原料山银花和金银花的方法)公开了一种区分金银花和山银花的鉴别方法，包括以下步骤：以山银花或含山银花原料的制剂为对照；构建急性口腔炎症模型；通过比较供试品和对照标准品对急性口腔炎症模型细胞中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-8和IL-10表达水平的影响，鉴别区分金银花和山银花或其复方制剂。本方法需要山银花或含山银花原料的制剂为对照，构建急性口腔炎症模型；存在检验方法复杂、检验不够快速、成本高、影响因素多、误差大的缺陷。
技术实现思路
本专利技术的目的是为克服上述现有技术的不足，提供一种利用高效液相色谱鉴别金银花和山银花的方法。本方法以断马钱子酸为指标，采用液相色谱法进行检测金银花及山银花干燥品中断马钱子酸的重量百分比，来鉴别金银花和山银花。为实现上述目的，本专利技术采用下述技术方案：利用高效液相色谱鉴别金银花和山银花的方法，当待测物为金银花或山银花中的一种或两种时，通过高效液相色谱检测金银花和山银花干燥品中断马钱子酸的重量百分比来鉴别金银花和山银花。优选的，上述鉴别方法中，当断马钱子酸含量小于1.5％时，判定为非金银花；断马钱子酸含量大于1.0％，判定为非山银花；当断马钱子酸含量小于等于1.5％，且大于等于1.0％时，判定为金银花或山银花的混合物。优选的，上述鉴别金银花和山银花中断马钱子酸的含量的检测方法为：取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，于200-280nm波长处测定峰面积，采用外标法或标准曲线法计算，得到金银花和山银花中断马钱子酸的含量。上述方法中，取对照品溶液与供试品溶液视为进样量为2-25μL。一步优选的，取对照品溶液与供试品溶液视为进样量为2-20μL。进一步优选的，上述检测方法的波长范围为230～254nm。进一步优选的，上述检测方法的最优波长为240nm。优选的，上述高效液相色谱法的测定条件为：色谱柱C18，4.6mm×250mm，5μm；波长200～280nm；以乙腈为流动相A，以pH值为1.5～4的酸水溶液为流动相B，采用梯度洗脱，其中流动相A0～20min，体积百分比5％→15％；20～25min，体积百分比15％→23％；其余为流动相B。进一步优选的，所述酸水溶液包括磷酸、甲酸、乙酸、磷酸盐中的一种或几种。进一步优选的，对照品溶液的制备步骤：取断马钱子酸对照品，精密称定，加溶剂制成0.05-0.5mg/mL的溶液。供试品溶液的制备：取供试品粉末0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入溶剂10-50mL，超声处理15-60分钟，摇匀，过滤，即得。进一步优选的，所述超声的功率为250W，频率35kHz。进一步优选的，所述溶剂为水、0-50％乙醇溶液或0-50％甲醇溶液中的一种或几种。本专利技术的有益效果：本专利技术通过高效液相色谱检测金银花和山银花干燥品中断马钱子酸的重量百分比来鉴别金银花和山银花，快捷、准确，为药品的生产、流通、使用过程中提供了一种鉴别真假的依据。附图说明图1是断马钱子酸对照品谱图；图2是金银花谱图；图3是山银花谱图；图4是不同产地山银花谱图；图5是不同产地、不同溶剂、不同干燥方式的山银花谱图；图6是254nm检测波长下山银花谱图；图7是河南不同批次金银花谱图；图8是河北不同批次金银花谱图；图9是山东不同批次金银花谱图。具体实施方式下面结合附图和实施例对本专利技术进行进一步的阐述，应该说明的是，下述说明仅是为了解释本专利技术，并不对其内容进行限定。实施例1建立检测方法1.仪器与材料1.1仪器安捷伦1260二元高效液相色谱仪，安捷伦G4212B二极管列阵检测器，安捷伦EclipseXDB-C18色谱柱(150mm×4.6mm，5μm)，KH500B型超声清洗器(昆山GRAD)，明澈D24UV超纯水系统(密理博中国)。1.2材料与试剂乙腈(FisherScientific)为色谱级，水为一级超纯水，无水乙醇(COMIO)等其他试剂为分析级；断马钱子酸对照品购置于上海诗丹德标准技术服务有限公司生产，批号：60077-46-5。2.试验方法2.1色谱条件色谱柱C18，4.6mm×250mm，5μm；波长240nm；以乙腈为流动相A，以pH值为2.0的磷酸水溶液为流动相B，采用梯度洗脱，其中流动相A0～20min，体积百分比5％→15％；20～25min，体积百分比15％→23％；其余为流动相B。2.2对照品溶液的制备取断马钱子酸对照品，精密称定，加10％乙醇制成0.27mg/mL的溶液。2.3供试品溶液的制备取样品粉末(过四号筛)约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入10％乙醇25ml，超声处理(功率250W，频率35kHz)30分钟，摇匀，滤过，即得。2.4方法学研究2.4.1线性考察精密吸取对照品溶液(0.27mg/mL)2、5、10、15、20、25μl，分别注入液相色谱仪，记录峰面积。以峰面积(A)对进样质量(m，μg)进行线性回归，回归方程为：A＝1182*C-24.2，相关系数R＝0.9998，结果表明断马钱子酸溶液在0.54μg～6.75μg之间呈良好的线性关系。结果见表1。表1线性关系考察2.4.2仪器精密度精密吸取对照品溶液(0.27mg/mL)10μL，注入液相色谱仪，记本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.利用高效液相色谱鉴别金银花和山银花的方法，其特征在于，当待测物干燥品为金银花或山银花中的一种或两种时，通过高效液相色谱检测待测物干燥品中断马钱子酸的重量百分比来鉴别金银花和山银花。

【技术特征摘要】
1.利用高效液相色谱鉴别金银花和山银花的方法，其特征在于，当待测物干燥品为金银花或山银花中的一种或两种时，通过高效液相色谱检测待测物干燥品中断马钱子酸的重量百分比来鉴别金银花和山银花。2.根据权利要求1所述的鉴别金银花和山银花的方法，其特征在于，当待测物干燥品中断马钱子酸含量小于1.5％，判定为非金银花；断马钱子酸含量大于1.0％，判定为非山银花；断马钱子酸含量小于等于1.5％，且大于等于1.0％时，判定为金银花或山银花的混合物。3.根据权利要求1或2所述的鉴别金银花和山银花的方法，其特征在于，所述断马钱子酸的含量的检测方法为：取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，于200-280nm波长处测定峰面积，采用外标法或标准曲线法计算，得到金银花和山银花中断马钱子酸的含量。4.根据权利要求3所述的鉴别金银花和山银花的方法，其特征在于，所述高效液相色谱法的测定条件为：色谱柱C18，4.6mm×250mm，5μm；波长200～280nm；以乙腈为流动相A，以pH值为1.5～4的酸水溶液为流动相B，采用梯度洗脱，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：张芳，于晓，张永清，郭庆梅，王雨伟，王蕾，王绍源，
申请(专利权)人：山东中医药大学，
类型：发明
国别省市：山东,37