【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物检测，具体涉及一种从中药中高通量筛选丁酰胆碱酯酶抑制剂的荧光探针及其制备方法与应用。
技术介绍
1、丁酰胆碱酯酶(bche)是一种丝氨酸水解酶，对体内酯的水解进行催化。丁酰胆碱酯酶和乙酰胆碱酯酶共同作用调节乙酰胆碱的分解，终止神经递质对突触后膜的兴奋作用，保证神经信号在生物体内的正常传递。近年来的研究证明，丁酰胆碱酯酶的活性与阿尔兹海默症，肝癌，肝硬化以及心脑血管类疾病等有着密切关系，因此，以丁酰胆碱酯酶为药物靶点开发新型药物是十分有必要的。
2、自古以来，中药就被用于治疗多种疾病和改善人类健康，药用植物在降低丁酰胆碱酯酶活性，治疗与丁酰胆碱酯酶失调相关的神经性系统疾病方面显示出巨大的潜力。而且相比较于传统药物，具有多成分，多靶点，且多途径等优点。因此从天然药物中筛选合适的丁酰胆碱酯酶抑制剂具有一定的应用前景。
3、荧光探针可以与待测物质特异性结合后表现出荧光响应，选择性的将化学信息转化为仪器可以测量的光学信号，从而达到检测化合物的目的。荧光探针具有灵敏度高、特异性强、操作简单、响应快速、成本低等特点，逐渐成为测定bche的主流方法。目前，已报道的大多数bche荧光探针存在着发射波长短、灵敏度低、难以克服中药中化学成分的荧光干扰等缺陷。
4、因此，开发一种灵敏度高且具有近红外发射波长，可从中药中高通量筛选丁酰胆碱酯酶抑制剂的荧光探针是十分有必要的。
技术实现思路
1、针对上述问题，本专利技术提供一种从中药中高通量筛选丁酰胆碱酯酶
2、为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、本专利技术第一方面在于提供一种从中药中高通量筛选丁酰胆碱酯酶抑制剂的荧光探针，所述荧光探针的结构式为：
4、
5、本专利技术第二方面在于提供一种如上所述的从中药中高通量筛选丁酰胆碱酯酶抑制剂的荧光探针的制备方法，具体步骤如下：
6、(1)将3-二氰基亚甲基-1,5,5-三甲基环己烯和3-溴-4-羟基苯甲醛溶于乙醇中，加入哌啶，在氮气保护下回流，反应结束后，进行硅胶柱色谱纯化，得化合物1；
7、(2)在氮气氛围下，将化合物1溶于吡啶和二氯甲烷的混合溶剂中，在冰浴中冷却15min，再滴加环丙甲酰氯，室温搅拌，反应结束后，进行硅胶柱色谱纯化，得荧光探针。
8、环丙甲酰氯在滴加过程中会剧烈放热，因此在滴加环丙甲酰氯过程中维持冰浴15min，以保持反应体系的稳定状态并减少副产物的生成。当反应体系保持相对稳定后，为了提高合成产率，在室温反应，这将提高分子热运动，提高分子碰撞几率，促进目标分子的生成。
9、优选地，所述步骤(1)中，以摩尔比计，3-二氰基亚甲基-1,5,5-三甲基环己烯：3-溴-4-羟基苯甲醛＝1：1。
10、优选地，所述步骤(2)中，以摩尔比计，化合物1：环丙甲酰氯＝1：1.5。
11、优选地，所述步骤(2)中，以体积比计，吡啶和二氯甲烷＝1：1。
12、优选地，所述步骤(1)中，反应时间为1.5h；所述步骤(2)中，反应时间为2h。
13、优选地，所述步骤(1)中，采用二氯甲烷与乙醇的混合溶剂为洗脱剂；以体积比计，二氯甲烷：乙醇＝200：1。
14、优选地，所述步骤(2)中，采用二氯甲烷与甲醇的混合溶剂为洗脱剂；以体积比计，二氯甲烷：甲醇＝200：1。
15、本专利技术第三方面在于提供一种如上所述的从中药中高通量筛选丁酰胆碱酯酶抑制剂的荧光探针在从中药中高通量筛选丁酰胆碱酯酶抑制剂中的应用。
16、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
17、(1)本专利技术的荧光探针具有较高的选择性、灵敏度和良好的线性范围；
18、(2)本专利技术的荧光探针发射光谱在近红外区，可以有效规避中药化学成分中的荧光干扰，提高检测的灵敏度，在中药有效物质筛选方面具有独特优势；
19、(3)本专利技术的荧光探针制备方法简单易操作，原料廉价易得，成本低，易于推广，具有广阔的应用前景。
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1.一种从中药中高通量筛选丁酰胆碱酯酶抑制剂的荧光探针，其特征在于，所述荧光探针的结构式为：
2.权利要求1所述的从中药中高通量筛选丁酰胆碱酯酶抑制剂的荧光探针的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：
3.根据权利要求2所述的从中药中高通量筛选丁酰胆碱酯酶抑制剂的荧光探针的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，以摩尔比计，3-二氰基亚甲基-1,5,5-三甲基环己烯：3-溴-4-羟基苯甲醛＝1：1。
4.根据权利要求2所述的从中药中高通量筛选丁酰胆碱酯酶抑制剂的荧光探针的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，以摩尔比计，化合物1：环丙甲酰氯＝1：1.5。
5.根据权利要求2所述的从中药中高通量筛选丁酰胆碱酯酶抑制剂的荧光探针的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，以体积比计，吡啶和二氯甲烷＝1：1。
6.根据权利要求2所述的从中药中高通量筛选丁酰胆碱酯酶抑制剂的荧光探针的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，反应时间为1.5h；所述步骤(2)中，反应时间为2h。
7.根据权利要求2所述的从中药中高通量筛选
8.根据权利要求2所述的从中药中高通量筛选丁酰胆碱酯酶抑制剂的荧光探针的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，采用二氯甲烷与甲醇的混合溶剂为洗脱剂；以体积比计，二氯甲烷：甲醇＝200：1。
9.权利要求1所述的从中药中高通量筛选丁酰胆碱酯酶抑制剂的荧光探针在从中药中高通量筛选丁酰胆碱酯酶抑制剂中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种从中药中高通量筛选丁酰胆碱酯酶抑制剂的荧光探针，其特征在于，所述荧光探针的结构式为：
2.权利要求1所述的从中药中高通量筛选丁酰胆碱酯酶抑制剂的荧光探针的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：
3.根据权利要求2所述的从中药中高通量筛选丁酰胆碱酯酶抑制剂的荧光探针的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，以摩尔比计，3-二氰基亚甲基-1,5,5-三甲基环己烯：3-溴-4-羟基苯甲醛＝1：1。
4.根据权利要求2所述的从中药中高通量筛选丁酰胆碱酯酶抑制剂的荧光探针的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，以摩尔比计，化合物1：环丙甲酰氯＝1：1.5。
5.根据权利要求2所述的从中药中高通量筛选丁酰胆碱酯酶抑制剂的荧光探针的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，以体积比计，吡啶...
【专利技术属性】
技术研发人员：唐志新，杨文杰，刘蕊芯，蒋海强，
申请(专利权)人：山东中医药大学，
类型：发明
国别省市：
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