本发明专利技术公开了先兆子痫胎盘间充质干细胞条件培养基在肿瘤治疗的应用,描述了通过在液体培养基中培养来自先兆子痫胎盘的胎盘间充质干细胞可获得的条件培养基(CM)。本发明专利技术的目的条件培养基包含至少IP‑10和TARC蛋白质并且将它用于肿瘤,优选上皮肿瘤的治疗性疗法。
【技术实现步骤摘要】
先兆子痫胎盘间充质干细胞条件培养基在肿瘤治疗的应用本申请是申请日为2013年10月2日、专利技术名称为“先兆子痫胎盘间充质干细胞条件培养基用于在肿瘤治疗中的应用”的中国专利申请号201380062876.2的分案申请。
本专利技术涉及用于肿瘤病理的疗法治疗的领域。
技术介绍
在过去几十年间,抗肿瘤疗法取得了重大进展,因此使得越来越多的病例有效地改善预后,一旦预兆不好,从而使它们可以治疗或有时可以治愈。然而,如果肿瘤部位和疾病阶段确实允许外科手术的话,常规的肿瘤治疗仍然是基于外科手术。外科手术通常伴随化疗和/或放射疗法治疗,不幸的是伴有严重的副作用。化疗是全身给药的,因此它的细胞毒性作用可不加区别地以癌症和健康细胞为作用目标,特别是那些表征为高增殖速率的组织。实际上,化疗可能导致另外的病理状态的发作,如骨髓抑制和粘膜炎。放射治疗也会诱导实际上由肿瘤区域辐射过程中的健康细胞DNA的损伤引起的严重的副作用。这种现象甚至可以导致继发性肿瘤的形成。因此,临床肿瘤研究集中在评估能够在肿瘤细胞上施加更强的靶向作用的替代性治疗方法,例如通过使用治疗剂在癌细胞的生长和肿瘤细胞的转移性侵袭期间以及在肿瘤新血管生成期间选择性地干扰这些特别活化的细胞机制。在更创新的解决方案中,基于干细胞的疗法,包括使用干细胞和在生理条件下由干细胞产生的因子的那些方法起着重要的作用。特别地,最近的实验证据表明人胚胎干细胞能够分泌可以选择性抑制癌细胞的体外增殖和肿瘤发生的营养因子。在分离自骨髓和脂肪组织的成人间充质干细胞(MSC)中也报道了抗肿瘤活性。例如,在体内小鼠模型中观察到,静脉给药的人MSC能够选择性地迁移向恶性组织,以在肿瘤基质中结合并且抑制癌细胞增殖。基于这种特殊的MSC朝着活性肿瘤发生部位的定向运动,近来已经研发了针对MSC的另外的治疗应用。这些方法包括直接在肿瘤区域利用间充质细胞作为载体来选择性地运载具有抗肿瘤活性的生物分子。尽管上面描述的很有前景的结果,但人干细胞在临床实践中的应用仍然是一个挑战。人胚胎干细胞伴随着重要的伦理和生物安全问题,因为它们有限的特性使得难以预测潜在的副作用,如继发性肿瘤的发生。另一方面,MSC的治疗性应用意味着通过高度侵袭性的方法从骨髓或脂肪组织收获它们,以及由于其天然的低浓度(骨髓中0.001%的单核细胞),需要将这些细胞暴露于困难的和昂贵的体外扩增方法。最近的研究报道了间充质中存在的胎盘绒毛膜绒毛和羊膜中存在的特定细胞群,命名为胎盘间充质干细胞(PDMSC)(HuangYC,YangZM,ChenXH,TanMY,WangJ,LiXQ,etal.Isolationofmesenchymalstemcellsfromhumanplacentaldeciduabasalisandresistancetohypoxiaandserumdeprivation.StemCellRev.2009;5(3):247-55)。由于胎盘组织的独特的特征,这些细胞具有干细胞-间充质细胞表型,这赋予它们连同增高的增殖和分化潜能,以及具有良好限定的寿命和受控的增殖速率的基本特征,从而降低了与其体内使用相关的继发性肿瘤潜在形成的风险。此外,PDMSC能够发挥免疫抑制和抗炎活性。基于上述独特的可塑性和分化性能,以及易于恢复和使用,胎盘组织、胎盘间充质干细胞已经成为深入研究的主题,主要在再生医学领域。RüsterB.和他的同事报道了MSC具备能力以便自发地迁移至损伤的器官和组织,以参与修复过程(RüsterB,S,LudwigRJ,BistrianR,MüllerS,SeifriedE,etal.Mesenchymalstemcellsdisplaycoordinatedrollingandadhesionbehavioronendothelialcells.Blood.2006;108(12):3938-44)。间充质干细胞的特有的缺乏免疫原性进一步支持其在再生医学中的应用,免疫原型的缺乏是由于HLA-II和共刺激分子(CD80、CD86、CD40)缺乏表达,需要这种表达直接刺激T淋巴细胞并且赋予针对细胞毒性T淋巴细胞的抗裂解性。其它研究表明来源于生理性胎盘的羊膜上的PDMSC可以对肿瘤细胞系增殖施加抑制性作用(MagattiM,DeMunariS,VertuaE,ParoliniO.AmnioticMembrane-DerivedCellsInhibitProliferationofCancerCellLinesbyInducingCellCycleArrest.JCellMolMed.2012Jan19.doi:10.1111/j.1582-4934.2012.01531.x.)。国际专利申请第WO2013/093878号公开了使用由分离自足月的生理性人胎盘的绒毛膜绒毛的PDMSC细胞调节的培养基用于治疗先兆子痫综合征。先兆子痫是一种严重的人怀孕相关的综合征,表征为加剧的母体-胎盘炎症反应,普遍的内皮损伤和缺陷的胎盘发育。
技术实现思路
如在以下实验部分进行进一步的详细说明,本专利技术人观察到,通过在液体培养基中培养由分离自患先兆子痫的人胎盘的胎盘间充质干细胞产生的条件培养基(CM),对肿瘤增殖和血管生成产生了令人惊讶的抑制效果。特别地,如图1所示,相比于对照组,通过上述条件培养基治疗原发性和转移性肿瘤乳腺组织外植体诱导显著的和令人惊讶的VEGF表达水平的下降(“血管内皮生长因子”),已知作为主要的血管生长因子参与肿瘤新血管发生过程,以及转录因子JunB(激活蛋白-1(AP-1)家族的癌基因成员,其表达与差的乳腺癌预后直接相关。这些细胞的治疗功效确实令人惊讶,因为通过培养生理胎盘间充质干细胞获得的条件培养基通过刺激血管发生对肿瘤外植体施加相反的作用。施加于血管发生过程和肿瘤细胞增殖的实验证实的抑制作用(其证明对于晚期癌症组织是特别有效的)强烈地表明条件培养基(通过在液体培养基中培养来自人先兆子痫胎盘的胎盘间充质干细胞可获得)的临床抗肿瘤效果。本专利技术人遵循的以鉴定由先兆子痫PDMSC分泌的有助于协调上述CM抗肿瘤作用的蛋白质的实验方法,是基于通过使用能够特异性地和同时地识别多种不同细胞因子、趋化因子和生长因子的可商购的抗体芯片(antibodyarray)的培养基的蛋白质组学分析。蛋白质组分析的结果允许鉴定以下提及的多个因子,其中,IP-10(干扰素γ诱导的蛋白10)和TARC(胸腺和活化调节的趋化因子)是关键的。因此,本专利技术的主题是通过在不含血清的液体基础培养基中培养分离自先兆子痫胎盘的胎盘间充质干细胞可获得条件培养基(CM),并且该条件培养基包含至少IP-10和TARC因子,用于在肿瘤的治疗性疗法中应用。此外,本专利技术的主题包括产生条件培养基和药物组合物(其包括IP-10和TARC蛋白质)的方法。附图说明图1示出了相比于对照组,通过本专利技术的条件培养基治疗原发性和转移性肿瘤乳腺组织外植体诱导显著的和令人惊讶的VEGF和JunB表达水平的下降。图2示出了在肿瘤外植体中,用本专利技术的目的条件培养基(CM)处理诱导了PARP基因表达水平统计上显著的降低,伴随着CASP3和p16Ink4A的基因的表达水平的增加(p<0.本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于在肿瘤的治疗性疗法中应用的药物组合物,至少包含干扰素γ‑诱导的蛋白10(IP‑10)和胸腺活化调节的趋化因子(TARC),以及可选的药学上可接受的载体、赋形剂和/或稀释剂。
【技术特征摘要】
2012.10.02 IT TO2012A0008591.一种用于在肿瘤的治疗性疗法中应用的药物组合物,至少包含干扰素γ-诱导的蛋白10(IP-10)和胸腺活化调节的趋化因子(TARC),以及可选的药学上可接受的载体、赋形剂和/或稀释剂。2.根据权利要求1所述的药物组合物,进一步包含选自由以下组成的组中的蛋白质:可溶性fms-样酪氨酸激酶-1(sFlt-1)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α),以及它们的任意组合。3.根据权利要求1所述的药物组合物,进一步包含选自由以下组成的组中的一种或多种蛋白质:ENA-78、GRO、GRO-α、IL-5、IL-7、IL-10、IL-15、IL-16、MCP-1、MCP-2、MCSF、MDC、血管生成素、抑瘤素m、VEGF、BDNF、BLC、CKb8-1、嗜酸粒细胞趋...
【专利技术属性】
技术研发人员:亚历山德罗·罗尔福,图利娅·托德罗斯,
申请(专利权)人:科瑞恩生物科技股份责任有限公司,
类型:发明
国别省市:意大利,IT
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