一种鱿鱼肌肉细胞结缔组织扫描电镜样品的制备方法技术

一种鱿鱼肌肉细胞结缔组织扫描电镜样品的制备方法，所述的制备方法包括如下步骤：步骤（a），鱿鱼胴体肉判断横纵截面后，取样混合固定液室温4‑6日固定；步骤（b），不接触样品的条件下去除固定液，更换0.9‑1.1M的NaOH溶液；步骤（c），NaOH溶液更换3.4%NaCl溶液进行清洗操作3‑5次/15min后，静止放置一夜；步骤（d），用固定液1固定1‑3h，再用固定液2固定1‑3h后，避开样品胶头滴管吸出固定液2，纯水清洗3‑4次/14‑16min；步骤（e），60‑90%的乙醇按浓度梯度由低到高顺序逐次脱水14‑16min，最后用98‑100%甲醇反复脱水3‑4次，每次脱水14‑16min；步骤（f），脱水样品放入98‑100%乙醇溶液中，利用液态氮快速冻结，冻结的试样用刀片迅速切断，放入叔丁醇中进行置换3‑4次；步骤（g），经冻结干燥器干燥22‑26h后，喷金处理后，利用扫描电镜观察。

【技术实现步骤摘要】
一种鱿鱼肌肉细胞结缔组织扫描电镜样品的制备方法
本专利技术涉及的是一种鱿鱼肌肉细胞结缔组织扫描电镜样品的制备方法，属于试验分析用的鱼类肌肉细胞结缔组织扫描电镜样品的制备

技术介绍
鱿鱼肌肉组织结构复杂，比起其他鱼类细胞直径极小，对鱿鱼肌肉细胞结缔组织显微结构观察之前的样品制备研究技术尚不成熟，通过常规的制备方法获得的扫描电镜观察样品，在预处理时经常出现结缔组织随细胞质溶解或部分溶解，观察时存在结缔组织纤维结构不完整、图像不清晰等问题，导致不能顺利进行后续实验，不能正确的分析研究这鱿鱼复杂特殊的肌肉理化性质。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术存在的不足，而提供一种能够保证样品在处理时去除细胞质后的扫描电镜样品结构完整，扫描电镜观察的结缔组织结构清晰，图像立体感强的鱿鱼肌肉细胞结缔组织扫描电镜样品的制备方法。本专利技术的目的是通过如下技术方案来完成的，一种鱿鱼肌肉细胞结缔组织扫描电镜样品的制备方法，所述的制备方法包括如下步骤：步骤（a）、采肉、前固定：鱿鱼胴体肉判断横纵截面后，取样混合固定液室温4-6日固定，所述的取样混合固定液的组成是：1.8-2.2％戊二醛、1.8本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鱿鱼肌肉细胞结缔组织扫描电镜样品的制备方法，其特征在于：所述的制备方法包括如下步骤：步骤（a）、采肉、前固定：鱿鱼胴体肉判断横纵截面后，取样混合固定液室温4‑6日固定，所述的取样混合固定液的组成是：1.8‑2.2％戊二醛、1.8‑2.2％甲醛、0.35‑0.39 M磷酸缓冲液 pH 7.2‑7.6；步骤（b）、细胞要素的去除：不接触样品的条件下去除固定液，更换0.9‑1.1M的NaOH溶液，震动8‑14日，其间每天更换NaOH溶液；步骤（c）、清洗：NaOH溶液更换3.4% NaCl溶液进行清洗操作3‑5次/15min后，静止放置一夜；步骤（d）、后固定：用固定液1固定1‑3h，再用固...

【技术特征摘要】
1.一种鱿鱼肌肉细胞结缔组织扫描电镜样品的制备方法，其特征在于：所述的制备方法包括如下步骤：步骤（a）、采肉、前固定：鱿鱼胴体肉判断横纵截面后，取样混合固定液室温4-6日固定，所述的取样混合固定液的组成是：1.8-2.2％戊二醛、1.8-2.2％甲醛、0.35-0.39M磷酸缓冲液pH7.2-7.6；步骤（b）、细胞要素的去除：不接触样品的条件下去除固定液，更换0.9-1.1M的NaOH溶液，震动8-14日，其间每天更换NaOH溶液；步骤（c）、清洗：NaOH溶液更换3.4%NaCl溶液进行清洗操作3-5次/15min后，静止放置一夜；步骤（d）、后固定：用固定液1固定1-3h，再用固定液2固定1-3h后，避开样品胶头滴管吸出固定液2，纯水清洗3-4次/14-16min；所述固定液1的组成为0.8-1.2%单宁酸和3.4%NaCl；所述的固定液2的组成为：0.8-1.1%四氧化锇溶液和3.2-3.6%NaCl；步骤（e）、脱水：60-90%的乙醇按浓度梯度由低到高顺序逐次脱水14-16min，最后用98-100%甲醇反复脱水3-4次，每次脱水14-16min；步骤（f）、置换：脱水样品放入98-100%乙醇溶液中，利用液态氮快速冻结，冻结的试样用刀片迅速切断，放入叔丁醇中进行置换3-4次，每次14-16min；步骤（g）、冷冻干燥、金...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈美龄，
申请(专利权)人：浙江海洋大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33