一种癌胚抗原检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及免疫检测技术领域，具体涉及一种癌胚抗原检测试剂盒及其制备方法。检测试剂盒包括包被有CEA抗体的磁性微球混悬液、CEA校准品、CEA质控品、CEA示踪物工作液、浓缩洗涤液、底物液和标本稀释液。该试剂盒检测结果准确、稳定性好、特异性强、灵敏度高、线性范围宽、检测时间短、使用方便，适于推广应用。

A detection kit for carcinoembryonic antigen and its preparation method

The invention relates to the field of immunoassay technology, in particular to a carcinoembryonic antigen detection kit and a preparation method thereof. The detection kit includes magnetic microsphere suspension coated with CEA antibody, CEA calibration products, CEA quality control products, CEA tracer working fluid, concentrated detergent, substrate solution and sample dilution solution. The kit is accurate, stable, specific, sensitive, wide linear range, short detection time and easy to use. It is suitable for popularization and application.

【技术实现步骤摘要】
一种癌胚抗原检测试剂盒及其制备方法
本专利技术涉及免疫检测
，具体涉及一种癌胚抗原检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
癌胚抗原(CEA)是一种广谱性的肿瘤标志物，最早是1965年由Gold和Freedman首先从结肠癌和正常胎儿消化道的提取物中分离出来的，是一种具有人类胚胎抗原特性的酸性糖蛋白。CEA认为是一种与人体肿瘤有关的抗原，分子量为175100-200000道尔顿，其糖类含量在50％-60％之间变化。CEA升高常见于结肠癌、大肠癌、胰腺癌、胃癌、小细胞肺癌、乳腺癌、甲状腺髓样癌等。血清CEA浓度的增加不仅见于恶性病还可见于各种良性疾病，如肝硬化，严重吸烟者，支气管炎，胰腺炎，胃炎，感染性肠炎和肾脏疾病，所以CEA不是恶性肿瘤的特异性标志，在诊断上只有辅助价值。此外，血清CEA水平与结直肠癌患者的预后和处理具有重大意义。肿瘤成功切除后，循环系统中的CEA浓度下降，而原发性肿瘤的复发或转移则伴随CEA的浓度升高。磁微粒化学发光法是免疫分析技术的新发展，该技术将磁性微球应用于免疫检测的固相，大大提高了反应的表面积，增加了抗原或抗体的吸附量，加快了反应速度，提高了检测的灵敏度。相比于时间免疫分辨荧光、免疫层析及ELISA方法，具有准确度高、特异性好、精密度高、线性范围广、试剂稳定性良好等特点；目前磁微粒化学发光免疫分析技术已成为在免疫诊断领域全球使用最广泛的分析方法，也是免疫试剂重要的发展方向之一。现有技术癌胚抗原的检测方法主要有酶联免疫法、时间分辨荧光免疫分析法、化学发光法等，然而这些方法具有线性范围窄，检测时间长等缺点，无法满足临床需求，因此寻找一种更有效的检测方式就成了临床应用的关键。
技术实现思路
本专利技术的目的在于是：针对现有技术存在的不足，提供一种用于检测癌胚抗原的检测试剂盒；该试剂盒检测结果准确、稳定性好、特异性强、灵敏度高、线性范围宽、检测时间短、使用方便，适于推广应用。为了实现上述目的，本专利技术的技术方案是：一种癌胚抗原检测试剂盒，其特征在于：所述检测试剂盒包括包被CEA抗体的磁性微球混悬液、CEA校准品、CEA质控品、CEA示踪物工作液、浓缩洗涤液、底物液和标本稀释液。所述包被CEA抗体的磁性微球混悬液的浓度按照1:1000-1:5500的比例配制；所述CEA示踪物工作液为吖啶酯标记的CEA单克隆抗体溶液按照其与示踪物稀释液1:1000-1:4000的比例配制；作为一种改进的技术方案，所述CEA校准品和质控品均由CEA校准品稀释液配制而成，所述CEA校准品的浓度分别为0ng/mL、5ng/mL、20ng/mL、100ng/mL、400ng/mL、1000ng/mL；所述CEA质控品的浓度为20ng/mL、400ng/mL。作为一种优选的技术方案，所述包被CEA抗体的磁性微球混悬液的浓度按照1:3000的比例配制，所述CEA示踪物工作液为吖啶酯标记的CEA单克隆抗体溶液按照其与示踪物稀释液1:2000的比例配制。作为一种优选的技术方案，所述校准品稀释液为pH7.4-7.6的PB缓冲液，且每1L缓冲液中还含有5-15g酪蛋白、20-35gNa2HPO4·12H2O、2-3.5gNa2H2PO4·2H2O、5-15mL的小牛血清和0.3-0.5mL的Proclin-300。作为一种优选的技术方案，所述浓缩洗涤液为0.04-0.06mol、pH7.4-7.6的Tris-HCl缓冲液，且每1L缓冲液中还含有0.02-0.08％v/v的吐温-20和0.7-0.8％v/v的Proclin-300；所述标本稀释液为pH7.4-7.6的PB缓冲液，且每1LPB缓冲液还含有200-205ml的小牛血清和1-1.5mL的Proclin-300。作为一种优选的技术方案，所述底物液包括底物液A和底物液B,所述底物液A为0.01-0.1mol/LpH6.8-7.8的磷酸盐缓冲溶液，且所述缓冲溶液中含有0.01-0.2mol/L的双氧水和0.2-0.7mol/L的硝酸；所述底物液B为0.01-0.1mol/L、pH6.8-7.8的磷酸盐缓冲溶液，且缓冲溶液中含有0.1-0.6g/L的氢氧化钠溶液。本专利技术的第二个目的在于：提供一种检测癌胚抗原的检测试剂盒的制备方法。为了实现上述专利技术的目的，本专利技术的技术方案是：一种检测癌胚抗原的检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：(1)制备CEA磁性微球混悬液将活化后的磁微粒加磁场，用吗啉乙磺酸缓冲液清洗，并用吗啉乙磺酸缓冲液按照浓度为20-60mg/mL将磁微粒进行悬浮；加入CEA抗体，再加磁场，用含有吐温-20、PEG2000、牛血清白蛋白和Proclin-300的磷酸盐缓冲液清洗，并用该溶液配制成1-4mg/mL的磁性微球混悬母液，再将所述磁性微球混悬母液按1:1000-1:5500稀释，制得CEA磁性微球混悬液；(2)配制CEA校准品及质控品用校准品稀释液将CEA标准品按一定的比例稀释成系列校准品，其校准品浓度范围为0ng/mL-1000ng/mL；按照上述操作制备浓度为20ng/mL、400ng/mL的质控品，对校准品和质控品进行分装；(3)抗体的标记a.预处理：取适量CEA抗体用0.05-0.2M、pH值7.5-9.0的碳酸盐缓冲溶液于2-10℃透析10-20小时；b.抗体标记：取吖啶酯溶液和CEA抗体溶液，加入标记缓冲液，再加入标记缓冲液体积20-50％的1g/mL赖氨酸盐溶液进行反应，反应20-60分钟；c.纯化与收集：反应液用0.05-0.2MpH值7.5-9.0的碳酸盐缓冲溶液于2-8℃透析20-26小时，得到吖啶酯标记的CEA抗体溶液。(4)配制CEA示踪物工作液将吖啶酯标记的CEA单克隆抗体溶液与示踪物稀释液按照1:1000-1:4000的比例配制；(5)配制浓缩洗涤液按照每1LpH7.5-7.8的Tris-HCl缓冲液中含有7-10gNaCl、0.2-0.8ml吐温-20和6-8mlProclin-300进行配制；(6)配制底物液A和底物液B底物液A：用0.01-0.1mol/LpH6.8-7.8的磷酸盐缓冲溶液配制含有浓度为0.01-0.2mol/的双氧水和浓度为0.2-0.7mol/L的硝酸溶液；底物液B：用0.01-0.1mol/LpH6.8-7.8的磷酸盐缓冲溶液配制含有浓度为0.1-0.6g/L的氢氧化钠溶液；(7)标本稀释液的配制按照每1LpH7.4-7.6的PB缓冲液中还含有200-205ml的小牛血清和1-1.5mL的Proclin-300进行配制；(8)将上述步骤(1)-(7)制备的磁性微球混悬液、示踪物工作液、校准品、质控品、浓缩洗涤液、底物液A、底物液B和标本稀释液的分装。作为一种改进的技术方案，所述步骤(4)中示踪物稀释液为pH7.5-7.8的PBS缓冲液，且每1LPBS缓冲液中还含有8-11g牛血清白蛋白、5-6g氯化钾、0.1-1g的酪蛋白、0.02-0.04％v/v的Proclin-300和0.3～1.0％v/v的AES。作为一种改进的技术方案，所述步骤(3)中的标记缓冲液为0.1-0.15M、pH为7-9的CB缓冲液。本专利技术采用以上技术方案，与现有技术相比，具有以下优点：本专利技术是将双抗体夹心法免疫测定原理与超顺磁性纳本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种癌胚抗原检测试剂盒，其特征在于：所述检测试剂盒包括包被CEA抗体的磁性微球混悬液、CEA校准品、CEA质控品、CEA示踪物工作液、浓缩洗涤液、底物液和标本稀释液；所述包被CEA抗体的磁性微球混悬液的浓度按照1:1000‑1:5500的比例配制；所述CEA示踪物工作液为吖啶酯标记的CEA单克隆抗体溶液按照其与示踪物稀释液1:1000‑1:4000的比例配制。

【技术特征摘要】
1.一种癌胚抗原检测试剂盒，其特征在于：所述检测试剂盒包括包被CEA抗体的磁性微球混悬液、CEA校准品、CEA质控品、CEA示踪物工作液、浓缩洗涤液、底物液和标本稀释液；所述包被CEA抗体的磁性微球混悬液的浓度按照1:1000-1:5500的比例配制；所述CEA示踪物工作液为吖啶酯标记的CEA单克隆抗体溶液按照其与示踪物稀释液1:1000-1:4000的比例配制。2.根据权利要求1所述的一种癌胚抗原检测试剂盒，其特征在于：所述CEA校准品和质控品均由CEA校准品稀释液配制而成，所述CEA校准品的浓度分别为0ng/mL、5ng/mL、20ng/mL、100ng/mL、400ng/mL、1000ng/mL；所述CEA质控品的浓度为20ng/mL、400ng/mL。3.根据权利要求1所述的一种癌胚抗原检测试剂盒，其特征在于：所述包被CEA抗体的磁性微球混悬液的浓度按照1:3000的比例配制，所述CEA示踪物工作液为吖啶酯标记的CEA单克隆抗体溶液按照其与示踪物稀释液1:2000的比例配制。4.根据权利要求1所述的一种癌胚抗原检测试剂盒，其特征在于：所述校准品稀释液为pH7.4-7.6的PB缓冲液，且每1L缓冲液中还含有5-15g酪蛋白、20-35gNa2HPO4·12H2O、2-3.5gNa2H2PO4·2H2O、5-15mL的小牛血清和0.3-0.5mL的Proclin-300。5.根据权利要求1所述的一种癌胚抗原检测试剂盒，其特征在于：所述浓缩洗涤液为0.04-0.06mol、pH7.4-7.6的Tris-HCl缓冲液，且每1L缓冲液中还含有0.02-0.08％v/v的吐温-20和0.7-0.8％v/v的Proclin-300；所述标本稀释液为pH7.4-7.6的PB缓冲液，且每1LPB缓冲液还含有15-30mL的小牛血清和0.7-0.8％v/v的Proclin-300。6.根据权利要求1所述的一种癌胚抗原检测试剂盒，其特征在于：所述底物液包括底物液A和底物液B,所述底物液A为0.01-0.1mol/LpH6.8-7.8的磷酸盐缓冲溶液，且所述缓冲溶液中含有0.01-0.2mol/L的双氧水和0.2-0.7mol/L的硝酸；所述底物液B为0.01-0.1mol/L、pH6.8-7.8的磷酸盐缓冲溶液，且缓冲溶液中含有0.1-0.6g/L的氢氧化钠溶液。7.根据权利要求1-6任一项所述的癌胚抗原检测试剂盒的制备方法，其特征在于所述制备方法包括以下步骤：(1)制备CEA磁性微球混悬液将活化后的磁微粒加磁场，用吗啉乙磺酸缓冲液清洗，并用吗啉乙磺酸缓冲液按照浓度为20-60mg/mL将磁微粒进行悬浮；加...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨致亭，魏红，李贞，孙树凯，杨锋斌，
申请(专利权)人：潍坊市康华生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37