一种检测DPEP1基因表达水平的成套试剂及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种检测DPEP1基因表达水平的成套试剂及其应用。成套试剂包括引物对DPEP1和探针DPEP1‑probe；所述引物对DPEP1的靶序列含有序列表的序列7所示的特异DNA片段；所述探针DPEP1‑probe为20‑30个核苷酸组成的单链DNA分子，与所述特异DNA片段甲中的部分区段相同或互补。采用成套试剂检测DPEP1基因的表达水平，进而辅助鉴定急性淋巴细胞白血病、辅助预测待测对象患急性淋巴细胞白血病的风险、辅助预测急性淋巴细胞白血病的治疗效果和辅助预测急性淋巴细胞白血病的发生和/或病程进展。本发明专利技术具有重要的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种检测DPEP1基因表达水平的成套试剂及其应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种检测DPEP1基因表达水平的成套试剂及其应用。
技术介绍
DPEP1(Dipeptidase1)是一种位于人16q24.3染色体上的锌金属肽酶，也被称为膜二肽酶、微粒体二肽酶或肾二肽酶，是一种能水解多种二肽并参与谷胱甘肽代谢的锌金属肽酶，在谷胱甘肽以及肿瘤相关的促炎分子白三烯的调控中起着重要作用。研究表明，DPEP1在多种肿瘤中表达异常，但其表达水平和预后意义在不同类型的肿瘤中尚存在争议，Wilms肿瘤中DPEP1的表达缺失，乳腺癌和胰腺导管腺癌中DPEP1的表达降低，结肠癌中DPEP1的表达增高，并且DPEP1的高表达与不良预后相关。在结肠癌、Wilms肿瘤、乳腺癌及胰腺导管腺癌患者中，DPEP1的异常表达影响了肿瘤细胞对化疗药物的敏感性以及侵袭浸润能力，并与肿瘤病人的预后有密切关系。目前尚未见DPEP1在血液恶性疾病的相关研究。
技术实现思路
本专利技术的目的是辅助预测急性淋巴细胞白血病的发生和/或病程进展。本专利技术首先保护一种成套试剂。所述成套试剂可包括引物对DPEP1和探针DPEP1-probe；所述引物对DPEP1可由引物DPEP1-F和引物DPEP1-R组成；所述引物对DPEP1的靶序列可含有特异DNA片段甲；所述特异DNA片段甲可为如下y1)或y2)：y1)序列表的序列7所示的单链DNA分子；y2)将序列7经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列7具有相同功能的DNA分子；所述探针DPEP1-probe可为20-30个核苷酸组成的单链DNA分子，与所述特异DNA片段甲中的部分区段相同或互补。所述引物DPEP1-F可为如下a1)或a2)：a1)序列表中序列1所示的单链DNA分子；a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的单链DNA分子。所述引物DPEP1-R可为如下b1)或b2)：b1)序列表中序列2所示的单链DNA分子；b2)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的单链DNA分子。所述探针DPEP1-probe可为如下c1)或c2)：c1)序列表中序列3所示的单链DNA分子；c2)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的单链DNA分子。所述探针DPEP1-probe的末端可具有荧光标记。所述探针DPEP1-probe的5’末端和/或3’末端可具有荧光标记。所述探针DPEP1-probe的5’末端可具有FAM荧光标记，3’末端可具有BHQ荧光标记。所述成套试剂中，所述引物DPEP1-F、所述引物DPEP1-R和所述探针DPEP1-probe的摩尔比具体可为40:40:25。上述任一所述成套试剂还可包括引物对ABL1和探针ABL1-probe；所述引物对ABL1可由引物ABL1-F和引物ABL1-R组成；所述引物对ABL1的靶序列可含有特异DNA片段乙；所述特异DNA片段乙可为如下z1)或z2)：z1)序列表的序列8所示的单链DNA分子；z2)将序列8经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列8具有相同功能的DNA分子；所述探针ABL1-probe可为20-30个核苷酸组成的单链DNA分子，与所述特异DNA片段乙中的部分区段相同或互补。所述引物ABL1-F可为如下d1)或d2)：d1)序列表中序列4所示的单链DNA分子；d2)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的单链DNA分子。所述引物ABL1-R可为如下e1)或e2)：e1)序列表中序列5所示的单链DNA分子；e2)将序列5经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列5具有相同功能的单链DNA分子。所述探针ABL1-probe为如下f1)或f2)：f1)序列表中序列6所示的单链DNA分子；f2)将序列6经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列6具有相同功能的单链DNA分子。所述探针ABL1-probe的末端可具有荧光标记。所述探针ABL1-probe的5’末端和/或3’末端可具有荧光标记。所述探针ABL1-probe的5’末端可具有FAM荧光标记，3’末端可具有TAMRA荧光标记。所述成套试剂中，引物ABL1-F、引物ABL1-R和探针ABL1-probe的摩尔比可为40:40:25。所述成套试剂还可包括阳性对照质粒和/或内参对照质粒；所述阳性对照质粒为向克隆载体或表达载体插入序列表中序列7所示的双链DNA分子，得到的重组质粒；所述内参对照质粒为向克隆载体或表达载体插入序列表中序列8所示的双链DNA分子，得到的重组质粒。所述克隆载体具体可为pMD18-T载体。所述成套试剂具体可由引物对DPEP1、探针DPEP1-probe、引物对ABL1、探针ABL1-probe、阳性对照质粒和内参对照质粒组成。上述任一所述成套试剂的制备方法也属于本专利技术的保护范围。上述任一所述成套试剂的制备方法可为将引物DPEP1-F和/或引物DPEP1-R和/或探针DPEP1-probe和/或引物ABL1-F和/或引物ABL1-R和/或探针ABL1-probe和/或阳性对照质粒和/或内参对照质粒分别单独包装。上述任一所述成套试剂在制备产品中的应用；所述产品的功能可为如下h1)-h8)中至少一种：h1)辅助鉴定急性淋巴细胞白血病；h2)辅助鉴定待测者是否为急性淋巴细胞白血病患者；h3)辅助鉴定待测细胞是否为急性淋巴细胞白血病肿瘤细胞；h4)检测DPEP1基因；h5)检测DPEP1基因的表达水平；h6)辅助预测待测对象患急性淋巴细胞白血病的风险；h7)辅助预测急性淋巴细胞白血病的治疗效果；h8)辅助预测急性淋巴细胞白血病的发生和/或病程进展。本专利技术还保护一种产品，其包括上述任一所述成套试剂；所述产品的功能可为如下h1)-h8)中至少一种：h1)辅助鉴定急性淋巴细胞白血病；h2)辅助鉴定待测者是否为急性淋巴细胞白血病患者；h3)辅助鉴定待测细胞是否为急性淋巴细胞白血病肿瘤细胞；h4)检测DPEP1基因；h5)检测DPEP1基因的表达水平；h6)辅助预测待测对象患急性淋巴细胞白血病的风险；h7)辅助预测急性淋巴细胞白血病的治疗效果；h8)辅助预测急性淋巴细胞白血病的发生和/或病程进展。DPEP1基因作为标志物在开发诊断急性淋巴细胞白血病的试剂中的应用也属于本专利技术的保护范围。检测DPEP1基因的表达水平的物质在制备产品中的应用也属于本专利技术的保护范围；所述产品的功能可为如下h1)或h2)或h3)或h6)或h7)或h8)中至少一种：h1)辅助鉴定急性淋巴细胞白血病；h2)辅助鉴定待测者是否为急性淋巴细胞白血病患者；h3)辅助鉴定待测细胞是否为急性淋巴细胞白血病肿瘤细胞；h6)辅助预测待测对象患急性淋巴细胞白血病的风险；h7)辅助预测急性淋巴细胞白血病的治疗效果；h8)辅助预测急性淋巴细胞白血病的发生和/或病程进展。上述应用中，所述检测DPEP1基因的表达水平的物质包括上述成套试剂。上述任一所述产品还可包括具有如下f1)或f2)或f3)或f4)或f5)或f6)的数据处理和结论显示功能的装置：本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.成套试剂，包括引物对DPEP1和探针DPEP1‑probe；所述引物对DPEP1由引物DPEP1‑F和引物DPEP1‑R组成；所述引物对DPEP1的靶序列含有特异DNA片段甲；所述特异DNA片段甲为如下y1)或y2)：y1)序列表的序列7所示的单链DNA分子；y2)将序列7经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列7具有相同功能的DNA分子；所述探针DPEP1‑probe为20‑30个核苷酸组成的单链DNA分子，与所述特异DNA片段甲中的部分区段相同或互补。

【技术特征摘要】
1.成套试剂，包括引物对DPEP1和探针DPEP1-probe；所述引物对DPEP1由引物DPEP1-F和引物DPEP1-R组成；所述引物对DPEP1的靶序列含有特异DNA片段甲；所述特异DNA片段甲为如下y1)或y2)：y1)序列表的序列7所示的单链DNA分子；y2)将序列7经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列7具有相同功能的DNA分子；所述探针DPEP1-probe为20-30个核苷酸组成的单链DNA分子，与所述特异DNA片段甲中的部分区段相同或互补。2.如权利要求1所述成套试剂，其特征在于：所述引物DPEP1-F为如下a1)或a2)：a1)序列表中序列1所示的单链DNA分子；a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的单链DNA分子；所述引物DPEP1-R为如下b1)或b2)：b1)序列表中序列2所示的单链DNA分子；b2)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的单链DNA分子；所述探针DPEP1-probe为如下c1)或c2)：c1)序列表中序列3所示的单链DNA分子；c2)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的单链DNA分子。3.如权利要求1或2所述成套试剂，其特征在于：所述成套试剂还包括引物对ABL1和探针ABL1-probe；所述引物对ABL1由引物ABL1-F和引物ABL1-R组成；所述引物对ABL1的靶序列含有特异DNA片段乙；所述特异DNA片段乙为如下z1)或z2)：z1)序列表的序列8所示的单链DNA分子；z2)将序列8经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列8具有相同功能的DNA分子；所述探针ABL1-probe为20-30个核苷酸组成的单链DNA分子，与所述特异DNA片段乙中的部分区段相同或互补。4.如权利要求3所述成套试剂，其特征在于：所述引物ABL1-F为如下d1)或d2)：d1)序列表中序列4所示的单链DNA分子；d2)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的单链DNA分子；所述引物ABL1-R为如下e1)或e2)：e1)序列表中序列5所示的单链DNA分子；e2)将序列5经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列5具有相同功能的单链DNA分子；所述探针ABL1-probe为如下f1)或f2)：f1)序列表中序列6所示的...

【专利技术属性】
技术研发人员：阮国瑞，刘开彦，张加敏，黄晓军，张静，卢润清，
申请(专利权)人：北京大学人民医院，
类型：发明
国别省市：北京,11