HIV结合剂制造技术

本公开内容涉及对HIV具有特异性的结合剂以及使用该结合剂来治疗、预防和/或减轻HIV感染和/或AIDS的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】HIV结合剂相关申请本申请要求于2015年12月5日提交的美国序列号62/263,618的优先权。
本公开内容涉及对人类免疫缺陷病毒(HIV)具有特异性的结合剂、其制备方法以及使用其来治疗和/或预防HIV感染的方法。
技术介绍
当我们进入艾滋病流行的第四个十年时，在理解HIV发病机制以及有效的和安全的抗病毒药物的开发方面已经取得了重大进展。已经注册登记了30多种抗病毒药物，并且联合抗逆转录病毒疗法(combinationantiretroviraltherapy)(ART)对发病率和死亡率的影响非常显著。然而，尽管在对ART具有最佳依从性的患者中实现了HIV复制的长期抑制，但在治疗中断后HIV总是反弹。此外，成功的治疗不诱导或允许能够在不存在ART的情况下控制HIV复制的病毒特异性免疫响应的恢复/发展。因此，绝大多数HIV感染者需要终身ART来控制HIV复制和相关的疾病。过去研究了许多免疫干预措施并且目前正在进行以实现HIV功能性治愈为目的的进一步开发，其中病毒复制受到抑制而无需持续的抗病毒治疗。治疗性疫苗策略一直是研究的主要干预策略，但是除CMV-基载体HIV疫苗(在NHP模型中50％的疗效)外，在实验动物模型和患者中结果显示为中等(modest)的疗效。最新的研究对抗包膜广谱中和抗体(anti-envelopebroadneutralizingantibodies)(bNab)用作HIV感染中的治疗剂的可能性已经产生了感兴趣的结果。本领域需要用于靶向HIV的其他试剂，尤其是中和抗体，以及其使用方法。本公开内容通过提供可用于靶向HIV和由其感染的细胞和/或组织和/或携带其的细胞和/或组织的试剂和方法满足了这些需求。附图说明下面给出了附图的简要说明。附图旨在更详细地说明本专利技术。然而，附图并不意在以任何方式限制本专利技术的主题。图1A-D示出了来自未接受抗逆转录病毒疗法的慢性感染患者的70个血浆样品对来自HIV-1代表菌株全球组(GlobalPanel)的一组九(9)种HIV-1假病毒的中和结果。MLV假病毒用作阴性对照。加框的7个供体被选择用于收集淋巴结以分离有效的广谱中和抗体。用箭头突出显示供体SA003，其被选择用于分离本专利技术所述的广谱中和抗体。ID50值表示能够中和50％病毒感染的血浆的稀释度。图2示出了用于从淋巴结样品纯化记忆和生发中心IgGB细胞的设门(gating)和分选(sorting)策略。选择用于表达表面标记物CD19的B细胞，以及阴性选择用于缺乏IgA和IgMB细胞受体(BCR)表达的IgGB细胞。进一步选择生发中心B细胞用于表达CD38标记物(其在记忆B细胞上不存在)。图3A-B示出了不同浓度(μg/ml)的单克隆抗体LN01对来自HIV-1代表菌株全球组的一组九(9)种HIV-1假病毒(MLV作为阴性对照)的中和结果。IC50值表示能够中和50％病毒感染的单克隆抗体的浓度。误差棒表示复份的标准偏差。图4示出了单克隆抗体LN01对多进化枝组的118种HIV-1假病毒的中和结果。IC50值表示能够中和50％病毒感染的单克隆抗体的浓度。图5A-J示出了在图4中所描述的整组118种病毒和单独进化枝或循环重组形式的IC50值的分布。图6示出了当使用TZM-b1或表达Fcγ受体I的TZM-b1时，单克隆抗体LN01对来自HIV-1代表菌株全球组的一组九(9)种HIV-1假病毒的中和结果。图7示出了一组七(7)种HIV-2/HIV-1嵌合假病毒的中和结果，在HIV-2/HIV-1嵌合假病毒中，通过引入来自进化枝B或进化枝C(在变体7312A.C1C的情况下)HIV-1菌株的MPER共有序列的对应残基而诱变HIV-2(菌株7312A)MPER区域。图8A-D示出了LN01或7B2单克隆抗体与1423个15-mer肽(15-merpeptide)的阵列的结合，15-mer肽由12个氨基酸重叠，涵盖了用于进化枝A、B、C、D、组M、CRF01_AE和CRF02_AG的共有HIV-1Envgp160序列的全长。信号低于2.0E+4评分为负值。如预期，7B2与gp41免疫显性区域(gp41ID)反应。图9A-D示出了在存在或不存在可溶性CD4(sCD4)的情况下，通过表面等离子体共振评估的LN01、PGT145、PGT151和17B单克隆抗体与切割的可溶性HIV-1Env三聚体BG505SOSIP.664gp140的结合，切割的可溶性HIV-1Env三聚体BG505SOSIP.664gp140表达广谱中和的多个表位。如预期的，在存在和不存在sCD4的情况下，PGT145(V1-V2聚糖特异性)和PGT151(与gp120和gp41界面处的位点结合)以高亲和力结合BG505SOSIP.664gp140，而17b(与CD4结合诱导的位点结合)仅在存在sCD4的情况下结合BG505SOSIP.664gp140。图10A-B示出了通过ELISA测量的LN01和10E8(MPER特异性广谱中和抗体)抗体与一组HIV-1Env抗原和阴性对照(Ctr)抗原的结合。10E8抗体与含有MPER区域的gp41的重组外功能区(ecto-domain)反应。图11A-B示出了通过ELISA测量的LN01和10E8单克隆抗体与融合中间体gp41(gp41int)或作为阴性对照(PBS)的未包覆板(uncoatedplate)的结合。10E8抗体与含有MPER区域的gp41反应。图12示出了mAb10E8与gp41肽RRRNEQELLELDKWASLWNWFDITNWLWYIRRRR(SEQIDNO.89)的结合。图13A-C示出了LN01抗体点突变变体的效力。A.LN01VH和VL变体；B.LN01变体的IC50(μg/ml)；C.IC50比率(IC50LN01wt/IC50LN01变体(“var.”))。图14A-K示出了平行测试LN01变体7、8和38以及亲本LN01抗体对多进化枝组的8种病毒的中和。A-I.中和百分数(％)；J.IC50(μg/ml)；K.IC50比率(IC50LN01wt/IC50LN01变体(“var.”))。图15A-B示出了测试LN01变体41、42、43、44、48和50对多进化枝组的7种病毒的中和。A.IC50(μg/ml)；B.IC50比率(IC50LN01wt/IC50LN01变体(“var.”))。图16A-B示出了测试LN01变体49对一组7种病毒的中和。A.IC50(μg/ml)；B.IC50比率(IC50LN01wt/IC50LN01变体(“var.”))。图17示出了测试LN01变体82(IC50(μg/ml))。
技术实现思路
本公开内容涉及对人类免疫缺陷病毒(HIV)具有特异性的结合剂，制备这种结合剂的方法以及使用这种结合剂治疗、预防和/或减轻HIV感染的方法。具体实施方式本公开内容涉及对人类免疫缺陷病毒(HIV)具有结合亲和力的结合剂。在一些实施例中，结合剂在体外和/或体内可以结合病毒颗粒本身上或细胞表面上的HIV抗原。通常在体外，结合剂也可以结合分离的HIV抗原和/或其片段和/或衍生物。还提供了使用这种结合剂来诊断、治疗、预防和/或减轻一种或多种与HIV相关的疾病的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种在体外HIV中和测试中中和HIV和/或在体内中和HIV的结合剂，所述结合剂至少一种氨基酸序列，所述氨基酸序列选自由SEQ ID NO.1‑32组成的组和/或如表1所示。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.12.05 US 62/263,6181.一种在体外HIV中和测试中中和HIV和/或在体内中和HIV的结合剂，所述结合剂至少一种氨基酸序列，所述氨基酸序列选自由SEQIDNO.1-32组成的组和/或如表1所示。2.根据权利要求1所述的结合剂，所述结合剂包括至少一种氨基酸序列，所述氨基酸序列选自由SEQIDNO.25、SEQIDNO.26、SEQIDNO.27、SEQIDNO.28、SEQIDNO.29、SEQIDNO.30、SEQIDNO.31和SEQIDNO.32组成的组。3.根据权利要求1所述的结合剂，所述结合剂包括：以下的至少一种：SEQIDNO.1-6或GNT，或其保守取代的变体；SEQIDNO.1-8，或其保守取代的变体；SEQIDNO.9和10，或其保守取代的变体；SEQIDNO.11和12，或其保守取代的变体；SEQIDNO.13和14，或其保守取代的变体；SEQIDNO.15和16，或其保守取代的变体；SEQIDNO.17和18，或其保守取代的变体；SEQIDNO.19和20，或其保守取代的变体；SEQIDNO.21和22，或其保守取代的变体；和，SEQIDNO.23和24，或其保守取代的变体。4.根据权利要求1-3中任一项所述的结合剂，所述结合剂不包括：包括SEQIDNO.70或71的可变重链区；对应于SEQIDNO.70的22位的氨基酸为色氨酸(W)；对应于SEQIDNO.71的23位的氨基酸为色氨酸(W)；SEQIDNO.72-78中任意一种的CDRH3氨基酸序列；对应于SEQIDNO.72的8位的氨基酸为丙氨酸(A)；对应于SEQIDNO.73的9位的氨基酸为丙氨酸(A)；对应于SEQIDNO.74的10位的氨基酸为色氨酸(W)；对应于SEQIDNO.75的11位的氨基酸为色氨酸(W)；对应于SEQIDNO.76的12位的氨基酸为色氨酸(W)；对应于SEQIDNO.77的14位的氨基酸为色氨酸(W)；对应于SEQIDNO.78的15位的氨基酸为色氨酸(W)；包括SEQIDNO.79或80的可变轻链区；对应于SEQIDNO.79的5位的氨基酸为色氨酸(W)；对应于SEQIDNO.80的6位的氨基酸为色氨酸(W)。5.根据权利要求1-4中任一项所述的结合剂，其中所述结合剂对SEQIDNO.68的氨基酸残基L679、W680和K683和/或SEQIDNO.69的氨基酸残基L168、W169和K172表现出结合特异性。6.根据权利要求1-4中任一项所述的结合剂，其中所述结合剂对ITKWLWYIK(SEQIDNO.66)表现出结合特异性。7.根据权利要求1-4中任一项所述的结合剂，其中所述结合剂对ITKWLWYIK(SEQIDNO.66)而非LASWVKYIQ(SEQIDNO.65)和/或ITKWIKYIQ(SEQIDNO.67)表现出结合特异性。8.根据权利要求1-4中任一项所述的结合剂，其中所述结合剂在浓度为102-100μg/ml或100-101μg/ml对HIV-1假病毒BJOX(CRF07_BC)、CE1176、TRO.11(B)、X1632(G)、CH119(CRF07_BC)、CNE55(CRF01_AE)、25710(C)、CD0217(C)而非对照病毒SVA-MLV表现出中和性。9.根据权利要求8所述的结合剂，其中中和百分数为至少约50％。10.根据权利要求1-9中任一项所述的结合剂，其中所述结合剂中和图4中列出的118种HIV-1假病毒的大多数，IC50小于25μg/ml。11.根据权利要求1-10中任一项所述的结合剂，所述结合剂为分离的单克隆抗体。12.根据权利要求11所述的结合剂，其中所述单克隆抗体是人单克隆抗体。13.根据权利要求11或12所述的结合剂，其中抗体同种型是IgG1或IgG3。14.根据权利要求1所述的结合剂，所述结合剂包括至少一个重链CDR氨基酸序列，所述重链CDR氨基酸序列选自由SEQIDNO.1-3组成的组。15.根据权利要求1所述的结合剂，所述结合剂包括至少一个轻链CDR氨基酸序列，所述轻链CDR氨基酸序列选自由SEQIDNO.4-6或GNT组成的组。16.根据权利要求1所述的结合剂，所述结合剂包括至少一个重链可变氨基酸序列，所述重链可变氨基酸序列选自由SEQIDNO.7、SEQIDNO.9、SEQIDNO.11、SEQIDNO.13、SEQIDNO.15、SEQIDNO.17、SEQIDNO.19、SEQIDNO.21和SEQIDNO.23组成的组。17.根据权利要求1所述的结合剂，所述结合剂包括至少一个轻链可变氨基酸序列，所述轻链可变氨基酸序列选自由SEQIDNO.8、SEQIDNO.10、SEQIDNO.12、SEQIDNO.12、SEQIDNO.14、SEQIDNO.16、SEQIDNO.18、SEQIDNO.20、SEQIDNO.22和SEQIDNO.24组成的组。18.根据权利要求1-17中任一项所述的结合剂，所述结合剂包括SEQIDNO.1-32中的任意一种或多种序列的氨基酸残基的保守取代。19.根据权利要求1-18中任一项所述的结合剂，所述结合剂源自人抗体、人IgG、人IgG1、人IgG2、人IgG2a、人IgG2b、人IgG3、人IgG4、人IgM、人IgA、人IgA1、人IgA2、人IgD、人IgE、犬抗体、犬IgGA、犬IgGB、犬IgGC、犬IgGD、鸡抗体、鸡IgA、鸡IgD、鸡IgE、鸡IgG、鸡IgM、鸡IgY、山羊抗体、山羊IgG、小鼠抗体、小鼠I...

【专利技术属性】
技术研发人员：G·潘塔莱奥，A·兰扎韦基亚，
申请(专利权)人：沃迪奥斯大学医院中心，生物医学研究所，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH