一种桑黄菌的保藏方法技术

本发明专利技术涉及一种桑黄菌的保藏方法，培养基主料质量组份为：50％油桐树木屑+15％枫树木屑+25％麦麸+10％玉米芯粉，辅料质量组份为：16％硫酸镁+34％磷酸二氢钾+50％石膏粉，木屑管培养基配方为：主料﹕辅料﹕水＝1﹕0.03﹕1.4。制备方法为：先将主料里的两种木屑混合均匀，然后依次加入麦麸和玉米芯粉混合均匀，再加入混合好的辅料混合均匀后再加水拌匀即可；培养基分装试管、包扎、灭菌、接种桑黄菌生长良好经再次转接验证没有感染杂菌，即得桑黄保藏菌种。本发明专利技术的保藏方法效果优异，保藏种可有效保藏2‑5年；活化后菌丝生长速率，生长势和生物学转化率等基本不会受到影响。

Preservation method of Phellinus

The present invention relates to a method for preservation of Phellodendron morifolium. The main ingredient of culture medium is: 50% Tung sawdust + 15% Maple sawdust + 25% wheat bran + 10% corncob powder. The main ingredient is 16% magnesium sulfate + 34% potassium dihydrogen phosphate + 50% gypsum powder. The formula of sawdust tube culture medium is: main ingredient: water = 1:0.03:1.4. . The preparation method is as follows: firstly, two kinds of sawdust in the main material are mixed evenly, then wheat bran and corncob powder are added in turn, and then the mixed auxiliary materials are mixed evenly, and then water is added to mix evenly; the culture medium is packed in test tubes, bandaged, sterilized, and inoculated with Phellodendron morifolium, which grows well, and then transferred to verify that there is no contaminated fungi, that is to say, no contaminated fungi. Preservation of Phellinus. The preservation method of the invention has excellent effect, the preserved seed can be effectively preserved for 2 to 5 years, and the mycelial growth rate, growth potential and biological conversion rate after activation are basically not affected.

【技术实现步骤摘要】
一种桑黄菌的保藏方法
本专利技术涉及微生物保藏
，具体涉及一种桑黄菌的保藏方法。
技术介绍
桑黄是珍稀大型药用真菌，属担子菌亚门(Basidiomycota)、多孔菌科(Polyporaceae)、纤孔菌属(Inonotus)。其主要功能有治疗痢疾、盗汗、血崩、血淋、脐腹涩痛、脱肛泻血、带下、闭经、止泻、延年等，因此有“森林黄金”之美称。桑黄是目前国际公认的生物治癌效果最好的药用真菌，已引起国际科研部门、医药界和保健品行业的广泛关注。桑黄优良菌种是其生产的基础和关键，因此需要对菌种进行有效的保藏以确保菌种优良的生产性能。桑黄目前常用的是斜面传代保藏法，每隔3-6个月需转管1次，增加了操作和人力成本。虽然有人研究过一些桑黄菌培养方法，但普通培养和保藏的要求是不同的。可以说目前没有关于桑黄菌的保藏方法进行过研究和报道。因此，在桑黄菌保藏
还缺乏成本低，对设备和操作技术要求不高，可长时间保留桑黄菌株的优良遗传性能的保藏方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种桑黄菌的保藏方法，该方法成本低、操作简单、保藏时间长，菌株菌丝生长和栽培特性不受影响。该方法适合于科研机构和生产企业使用。一种桑黄菌的保藏方法，采用含有油桐树木屑和枫树木屑的培养基进行保藏。本专利技术经过大量探索实验发现油桐树木屑和枫树木屑的混合协同对于桑黄菌的保藏起着比较关键的作用，对于保藏之后恢复使用的桑黄菌的生长速率、生长势和生物学转化率几乎无影响，而尝试了很多其他树种的木屑或者混合均没有这两种的协同作用显著。上述的桑黄菌的保藏方法，优选油桐树木屑粒径长(0.5-1.5mm)×宽(0.1-0.5mm)；枫树木屑粒径长(0.5-1.5mm)×宽(0.1-0.5mm)。采用的油桐树和枫树木屑粒径粒径过大会影响保藏效果，粒径过小增加操作难度和成本，本专利技术两种木屑的粒径是经过专利技术人大量实验验证发现的较适宜的粒径范围。适宜的碳氮比和微量元素的添加对于桑黄菌的保藏效果也会产生较大的影响，因为它们是桑黄菌对营养的基本需求，在优选种类和配比的情况下，效果更加突出。上述培养基还含有调节碳氮比的其他碳源和氮源,调节碳氮比的其他碳源和氮源优选包括麦麸和/或玉米芯粉；优选碳氮比50～80：1。上述培养基还含有微量元素包括：镁、磷、钾、硫和钙源中的一种或多种。上述镁源来自硫酸镁，磷源和钾源来自磷酸二氢钾，硫源和钙源来自于石膏粉。经过大量实验摸索之后获得适合于桑黄菌保藏培养基配方为：M1﹕M2﹕水＝1﹕0.01-0.05﹕1.0-1.8，M1：45-55％油桐树木屑+10-25％枫树木屑+20-50％调节碳氮比的其他碳源和氮源；M2为微量元素。其中M1﹕M2﹕水还可以优选＝1﹕0.02-0.04﹕1.2-1.6。上述培养基配方优选为：M1﹕M2﹕水＝1﹕0.01-0.05﹕1.0-1.8，M1：45-55％油桐树木屑+10-25％枫树木屑+10-25％麦麸+10-25％玉米芯粉；M2：10-20％硫酸镁+30-40％磷酸二氢钾+45-55％石膏粉。其中M1﹕M2﹕水还可以优选＝1﹕0.02-0.04﹕1.2-1.6。上述培养基配方进一步优选为：M1﹕M2﹕水＝1﹕0.03﹕1.4，M1：50％油桐树木屑+15％枫树木屑+25％麦麸+10％玉米芯粉；M2：16％硫酸镁+34％磷酸二氢钾+50％石膏粉。上述的桑黄菌的保藏方法，具体包括以下步骤：a.桑黄菌母种接种至平皿培养基(土豆200g、葡萄糖20g、琼脂18g、水1000mL，pH值自然)上，封口，26℃恒温培养，待菌丝长满皿的三分之二；b.将以上长好的桑黄菌丝接入灭菌后的保藏培养基(试管中培养基占3/5)中，置26℃恒温培养，当菌丝长入木屑中1厘米时将木屑上方菌丝及菌皮清除，再让其26℃恒温培养直至菌丝长至试管的三分之二即可；c.长好菌的试管用牛皮纸包扎好，放入自封袋中，4℃保藏。上述的桑黄菌的保藏方法，菌种需要使用时，从4℃拿出置26℃恒温培养1-2天，即接种使用。本专利技术培养基优选制备方法为：(1)、按照比例先将主料里的两种木屑(油桐树木屑和枫树木屑)混合均匀，然后依次加入麦麸和玉米芯粉混合均匀，再加入混合好的微量元素辅料混合均匀后再加水拌匀；(2)、拌匀后的培养基装入25mm×200mm玻璃试管中，装量占试管长度的五分之三左右，稍压紧，擦净管口，塞上棉塞。(3)、用牛皮纸把每支试管棉塞连同管口包扎好，4-7支试管一捆再用牛皮纸包扎好，竖着码入高压灭菌锅，上面盖上聚丙烯塑料膜。(4)、以上培养基124℃，灭菌2小时；24小时后124℃，灭菌2小时；再24小时后124℃，灭菌1.5小时。本专利技术所述的桑黄菌保藏方法，优选具体包含以下步骤：(1)、桑黄菌母种接种至玻璃平皿培养基上，用封口膜封住边缘，置培养箱中26℃恒温培养，菌丝长满皿的三分之二时即可。(2)、将以上长好的桑黄菌丝接入灭菌后的试管中，置培养箱中26℃恒温培养，菌丝长至试管的三分之二时即可(菌丝长入木屑中1厘米左右将木屑上方菌丝及菌皮清除，再让其恒温培养)。(3)、从以上长好桑黄菌丝的试管中随机挑取半数以上接种新鲜试管斜面，进接验证试验，接种完后所有木屑管用牛皮纸包扎好，放入自封袋中，冰箱4℃保藏。验证试验确认没有感染杂菌后即得桑黄保藏菌种。本专利技术的优势：1、本专利技术的一种桑黄菌的保藏方法，填补了桑黄菌保藏
的空白，为桑黄菌的保藏提供了有效途径。2、本专利技术的保藏方法中所使用的培养基，不同于一般的桑黄菌培养时所需的培养基，是根据桑黄菌及其保藏需求摸索出来的最适配方。3、本专利技术的保藏方法效果优异，保藏种可有效保藏2-5年；活化后菌丝生长速率，生长势和生物学转化率等基本不会受到影响。4、本专利技术方法成本低、操作简单、保藏时间长，菌株菌丝生长和栽培特性不受影响。该方法适合于科研机构和生产企业使用，应用前景好、具体实施方式以下结合实施例旨在进一步说明本专利技术，而非限制本专利技术。实施例1培养基的制备：(1)木屑的制备：从山上砍下的油桐树和枫树，分别锯成木屑，油桐树木屑粒径长(0.5-1.5mm)×宽(0.1-0.5mm)；枫树木屑粒径长(0.5-1.5mm)×宽(0.1-0.5mm)，晒干(水份10％以下)。(2)称取干燥后的木屑，按比例将其混合均匀，然后依次加入麦麸和玉米芯粉混合均匀，再加入混合好的微量元素辅料混合均匀后再加水拌匀。具体比例如下：M1：50％油桐树木屑+15％枫树木屑+25％麦麸+10％玉米芯粉；M2：16％硫酸镁+34％磷酸二氢钾+50％石膏粉，M1﹕M2﹕水＝1﹕0.03﹕1.4。(3)拌匀后的培养基装入25mm×200mm玻璃试管中，装量占试管长度的五分之三左右，稍压紧，擦净管口，塞上棉塞。(4)用牛皮纸把每支试管棉塞连同管口包扎好，4-7支试管一捆再用牛皮纸包扎好，竖着码入高压灭菌锅，上面盖上聚丙烯塑料膜。(5)包扎好的试管124℃，灭菌2小时；24小时后124℃，灭菌2小时；再24小时后124℃，灭菌1.5小时，冷却后即可使用。实施例2桑黄保藏菌种的制备及使用：(1)桑黄菌母种接种至玻璃平皿培养基上，用封口膜封住边缘，置培养箱中26℃恒温培养，菌丝长满皿的三分之二时即可。(2)将长好的桑黄菌丝接入实施例1灭菌后的试管中，置培养箱中26本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种桑黄菌的保藏方法，其特征在于，采用含有油桐树木屑和枫树木屑的培养基进行保藏。

【技术特征摘要】
1.一种桑黄菌的保藏方法，其特征在于，采用含有油桐树木屑和枫树木屑的培养基进行保藏。2.根据权利要求1所述的桑黄菌的保藏方法，其特征在于，油桐树木屑粒径长(0.5-1.5mm)×宽(0.1-0.5mm)；枫树木屑粒径长(0.5-1.5mm)×宽(0.1-0.5mm)。3.根据权利要求1所述的桑黄菌的保藏方法，其特征在于，培养基还含有调节碳氮比的其他碳源和氮源,调节碳氮比的其他碳源和氮源优选包括麦麸和/或玉米芯粉；优选碳氮比50～80：1。4.根据权利要求1所述的桑黄菌的保藏方法，其特征在于，培养基还含有微量元素包括：镁、磷、钾、硫和钙源中的一种或多种。5.根据权利要求4所述的桑黄菌的保藏方法，其特征在于，镁源来自硫酸镁，磷源和钾源来自磷酸二氢钾，硫源和钙源来自于石膏粉。6.根据权利要求1-5任一项所述的桑黄菌的保藏方法，其特征在于，培养基配方为：M1﹕M2﹕水＝1﹕0.01-0.05﹕1.0-1.8，M1：45-55％油桐树木屑+10-25％枫树木屑+20-50％调节碳氮比的其他碳源和氮源；M2为微量元素。7.根据权利要求6所述的桑黄菌的保藏方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴胜莲，邵晨霞，唐少军，许隽，杨祎，靳磊，葛小鹏，贺月林，
申请(专利权)人：湖南省微生物研究院，
类型：发明
国别省市：湖南,43