用于海关的快速鉴定方法技术

本申请涉及一种用于海关的快速鉴定方法，属于包含酶或微生物的测定或检测方法技术领域。取样品组织，纯化DNA；设计上、下引物序列，上游引物:5’CTTACCTGGGGGCACTGTA3’，下游引物:5’GCTCCCGAGTGGGCTCAC3’；以纯化得到的DNA为模板，结合上、下引物实施qPCR，qPCR的反应程序包括40个循环，每个循环为：95℃/3″，60℃/10″72℃/10″，对合成产物再次测序和确认比较，即可确认其是否为设定肉源。将本申请应用于虎肉等设定肉源的鉴定，具有操作简便、获取率高、成本低廉等优点。

【技术实现步骤摘要】
用于海关的快速鉴定方法
本申请涉及一种用于海关的快速鉴定方法，属于包含酶或微生物的测定或检测方法

技术介绍
虎(Pantheratigris)属于动物界(Animalia)、脊索动物门(Chordata)、脊椎动物亚门(Vertebrata)、哺乳纲(Mammalia)、食肉目(arnivora)、猫科(Felidae)、豹属(Panthera)，共有8个亚种：①孟加拉虎，分布于印支半岛；②西亚虎，又称里海虎，分布于土耳其、亚洲中部及西部；③东北虎，又称西伯利亚虎，分布于中苏边境的黑龙江及朝鲜一带；④爪哇虎，分布于印尼爪哇；⑤华南虎，又称厦门虎/南中国虎，分布于华中地区的南部；⑥巴厘虎，分布于印尼巴厘岛；⑦苏门答腊虎，分布于印尼苏门答腊；⑧东南亚虎，又称印支虎，分布于东南亚大陆地区。据2009年3月网上的数据，西亚虎、爪哇虎和巴厘虎三个亚种已灭绝，现存的5个亚种中，孟加拉虎约有3,060至4,735头，东北虎437至506头，华南虎20至30头，苏门答腊虎400至500头，东南亚虎1,180至1,790头。目前认为华南虎已在自然界中灭绝，仅在几个有限的动物园中圈养供游客观赏本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于海关的快速鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：取样品组织，纯化DNA；(2)设计上、下引物序列，上游引物:5’CTTACCTGGGGGCACTGTA3’，下游引物:5’GCTCCCGAGTGGGCTCAC3’；(3)以步骤(1)中纯化得到的DNA为模板，以步骤(2)中得到的上、下引物实施qPCR，qPCR的反应程序包括40个循环，每个循环为：95℃/3″，60℃/10″72℃/10″，对合成产物再次测序和确认比较，即可确认其是否为设定肉源。

【技术特征摘要】
1.用于海关的快速鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：取样品组织，纯化DNA；(2)设计上、下引物序列，上游引物:5’CTTACCTGGGGGCACTGTA3’，下游引物:5’GCTCCCGAGTGGGCTCAC3’；(3)以步骤(1)中纯化得到的DNA为模板，以步骤(2)中得到的上、下引物实施qPCR，qPCR的反应程序包括40个循环，每个循环为：95℃/3″，60℃/10″72℃/10″，对合成产物再次测序和确认比较，即可确认其是否为设定肉源。2.如权利要求1所述的用于海关的快速鉴定方法，其特征在于：步骤(1)中，所述纯化采用酚氯仿提取法纯化，将样品组织进行裂解后，离心取上清，上清中加入Tris-饱和酚；取上层水相，加酚氯仿混合液，混匀常温离心；取上层水相，加氯仿，混匀常温离心；取上层水相，加预冷异丙醇，混匀4℃离心；去上清，白色沉淀中加预冷70％乙醇，4℃离心；去上清，吸除70％乙醇，即得纯化DNA。3.如权利要求1所述的用于海关的快速鉴定方法，其特征在于，步骤(1)中，所述纯化采用以下步骤进行：①裂解匀浆：配制裂解液，将待检测组织置于裂解液中静置裂解...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨仙玉，张先福，马敬华，施伟斌，刘建勋，
申请(专利权)人：浙江农林大学，杭州野生动物世界有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33