用于鉴定妊娠相关疾病的体外方法技术

本发明专利技术集中在用于鉴定或筛查具有患妊娠相关疾病(特别是妊娠期糖尿病或先兆子痫)的风险的人类受试者的体外方法，妊娠相关疾病违背从诸如龈沟液(GCF)的微创样品分离的一系列生物标志物的表达或浓度水平。此外，本发明专利技术的方法在妊娠的早期阶段提供高灵敏度和特异性(参见下面的实施例和附图)，这意味着它是用于在疾病的早期阶段检测妊娠相关疾病(特别是妊娠期糖尿病或先兆子痫)的强有力且成本效益好的方法，从而获得有效治疗并避免对母亲和婴儿造成显著的长期不良影响。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于鉴定妊娠相关疾病的体外方法
本专利技术可以包括在个体化医学领域中，其中特异性生物标志物用于鉴定特定的疾病或病症。具体地，在本专利技术中使用一些生物标志物用于鉴定具有发展母体妊娠期糖尿病或先兆子痫的风险的人类受试者。
技术介绍
母体妊娠期糖尿病(gestationaldiabetesmellitus，GDM)发生在约7％的妊娠中，是一种除了其他危险因素之外，与感染和全身性炎症有关的多因素疾病(TheassociationbetweenPorphyromonasgingivalis-specificmaternalserumIgGandlowbirthweight.DasanayakeAP,BoydD,MadianosPN,OffenbacherS,HillsE.JPeriodontol.2001Nov；72(11):1491-7.)。GDM被定义为在妊娠期间发病或首次识别的葡萄糖耐受不良(InternationalAssociationofDiabetesinPregnancyStudyGroupWorkingGrouponOutcomeD,FeigDS,CorcoyR,JensenDM,Kautzky-WillerA,NolanCJ,etal.Diabetesinpregnancyoutcomes:Asystematicreviewandproposedcodificationofdefinitions.DiabetesMetabResRev.2015)。它是一种在妊娠期间出现并通常在分娩后消失的糖尿病形式。如果不进行治疗，GDM会对母亲和婴儿造成显著的长期不良影响。围产期发病包括高胰岛素血症、巨大儿、低血糖、高胆红素血症和呼吸窘迫综合征，这些病症反过来可能产生随后的并发症。后代的长期发病包括肥胖和与遗传因素无关的糖尿病。此外，母亲的GDM与70％发展II型糖尿病的终生风险相关。本专利技术面临的问题是提供一种用于在妊娠期间尽早鉴定具有发展妊娠期糖尿病风险的妊娠女性受试者(特别是妇女)的新方法，以避免对母亲和婴儿的长期不良影响。此外，先兆子痫(PE)是一种多器官疾病，影响着全世界约3％至8％的妊娠妇女。最近的证据表明，有中等或高风险发展PE的患者在妊娠数周之前服用低剂量的阿司匹林与降低PE、宫内生长受限、早产和围产期死亡的风险相关。当前用于诊断PE的“黄金标准”是在妊娠后半期(妊娠大于24周)完成的，此时病理已经建立，并且扭转或限制对围产期结局潜在不良影响的可能性是有限的。PE是导致妊娠期间母体和幼儿死亡的主要原因。因此需要准确预测PE的早期诊断，精确识别和提前进行患者风险分层以及有效的治疗干预和监测PE。
技术实现思路
本专利技术为上述问题提供了明确的解决方案，因为它集中在一种体外方法，该体外方法用于鉴定或筛查有患妊娠相关疾病(特别是妊娠期糖尿病或先兆子痫)的风险的人类受试者，妊娠相关疾病违背从诸如龈沟液(GCF)的微创样品分离的一系列生物标志物的表达或浓度水平。此外，本专利技术的方法在妊娠的早期阶段提供高灵敏度和特异性(参见下面的实施例和附图)，这意味着它是用于在疾病的早期阶段检测妊娠相关疾病(特别是妊娠期糖尿病或先兆子痫)的强有力且成本效益好的方法，从而获得有效治疗并避免对母亲和婴儿造成显著的长期不良影响。附图说明图1.血糖与妊娠期糖尿病状态的接受者操作特征曲线。图2.血糖和PIGF(龈沟液)与妊娠期糖尿病状态的接受者操作特征曲线。图3.血糖、PIGF(龈沟液)和BMI与妊娠期糖尿病状态的接受者操作特征曲线。图4.非糖尿病与妊娠期糖尿病患者中的龈沟液中的PIGF。图5A.对照组与将发展妊娠期糖尿病的妇女的早期妊娠体重指数对比。(27.5与30.4，p值＝0.0022)B.对照组与将发展妊娠期糖尿病的妇女的早期妊娠血糖水平对比。(p值＝0.0018)。C.对照组与将发展妊娠期糖尿病的妇女的早期妊娠舒张压水平对比。(p值＝0.018)。D.健康妇女与将发展妊娠期糖尿病的妇女在妊娠11-14周时的临床附着水平(p值＝0.918)。E.健康妇女与将发展妊娠期糖尿病的妇女在妊娠11-14周时的平均牙周袋探诊深度(p值＝0.570)。F.健康妇女与将发展妊娠期糖尿病的妇女在妊娠11-14周时的探诊出血的平均值(％)(p值＝0.160)。G.健康妇女与将发展妊娠期糖尿病的妇女在妊娠11-14周时的牙周发炎表面积的平均值(PISA)(p值＝0.294)。图6.正常妊娠妇女(对照组)与妊娠期糖尿病患者(病例组)的母体GCFPLAP浓度的对比。先兆子痫患者的GCF-PLAP浓度显著高于健康妊娠妇女。图7.健康者和妊娠期糖尿病牙龈病患者在妊娠11-14周时的龈沟液样品中的外泌体表征。A)健康者的外泌体的CD63+的蛋白质免疫印迹(westernBlot)。B)PLAP+的蛋白质免疫印迹(westernBlot)。健康者(上)和妊娠期糖尿病患者(下)的电子显微镜照片。图8.A)从处于早期妊娠的发展妊娠期糖尿病或PE的患者与健康妊娠妇女(对照)的GCF(龈沟液)中分离出的胞外囊泡(EVs)的尺寸分布。B)处于早期妊娠的发展GDM的患者与对照组的GCF中的EVs浓度的量化。纳米颗粒跟踪分析根据制造商的说明，将使用NanoSightNS300系统(NanoSight)来分析获得的外泌体的尺寸分布。在分析之前，将从hgMSC、JEG-3细胞和胎盘外植体分离的外泌体样品在PBS中稀释。该仪器将测量纳米颗粒的布朗运动速率，并计算尺寸分布和浓度。图9.处于早期妊娠的发展GDM的患者(n＝12)与对照组(n＝17)的GCF中的EVs浓度的量化(P＝0.0007)。图10.A)健康妇女和将发展先兆子痫的妇女处于妊娠11-14周时测量的牙周袋探诊深度。B)健康妇女和将发展先兆子痫的妇女处于妊娠11-14周时的探诊出血(％)。C)健康妇女和将发展先兆子痫的妇女处于妊娠11-14周时的临床附着水平。图11.A)先兆子痫与严重牙周炎之间的关联的粗略优势比(O.R＝9.36，p值＝0.009)。B)PE与严重牙周炎之间的关联的调整回归模型(根据年龄、烟草使用情况和体重指数进行调整)。图12.A)正常妊娠妇女(对照组)与先兆子痫妇女(病例组)之间的龈沟液(GCF)和唾液sFlt-1浓度的对比。先兆子痫患者的母体GCF和唾液sFlt-1浓度的中值(144.3(p25-p75:131.9-201.9)pg/ml和180.5pg/ml(p25-p75:160.5-271.1)pg/ml)显著高于正常妊娠妇女(110.9(p25-p75:106.4-119.5)pg/ml和160.5(p25-p75:138.3-173)pg/ml)。(p值分别为0.033和0.045)。B)正常妊娠妇女和先兆子痫妇女的母体GCF和唾液中的PLAP/EVsCD63+比值。与正常妊娠者相比，先兆子痫患者具有显著更高的母体GCFPLAP/CD63+比值(p＝0.0008)。这些结果在母体唾液中并不显著。C)正常妊娠妇女(对照组)与先兆子痫妇女(病例组)之间的龈沟液(GCF)和唾液中的PlGF浓度的对比。两组之间的母体GCF和PlGF的唾液浓度的中值无显著差异。对照组在GCF中呈现出17本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于筛查具有发展妊娠相关疾病的风险的受试者的体外方法，其中所述妊娠相关疾病选自妊娠期糖尿病或先兆子痫，所述体外方法包括：(a)测量从待筛查的受试者，优选从人类受试者获得的龈沟液(GCF)样品中的至少胎盘血管生成肽(PlGF)、胎盘碱性磷酸酶(PLAP)或抗血管生成因子sFlt‑1(sFlt‑1)的表达谱或表达水平，或诸如外泌体或微囊泡的胞外囊泡(EVs)的浓度水平；以及(b)将待筛查的人类受试者的所述至少胎盘血管生成肽(PlGF)、胎盘碱性磷酸酶(PLAP)或抗血管生成因子sFlt‑1(sFlt‑1)的表达谱或表达水平或诸如外泌体或微囊泡的胞外囊泡(EVs)的浓度水平与已经建立的表达谱或表达水平进行比较；其中，至少胎盘血管生成肽(PlGF)、胎盘碱性磷酸酶(PLAP)或抗血管生成因子sFlt‑1(sFlt‑1)的差异表达或诸如外泌体或微囊泡的胞外囊泡(EVs)的浓度水平指示选自妊娠期糖尿病或先兆子痫的妊娠相关疾病。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.03.21 EP 16161490.4;2015.09.11 US 62/217,2701.用于筛查具有发展妊娠相关疾病的风险的受试者的体外方法，其中所述妊娠相关疾病选自妊娠期糖尿病或先兆子痫，所述体外方法包括：(a)测量从待筛查的受试者，优选从人类受试者获得的龈沟液(GCF)样品中的至少胎盘血管生成肽(PlGF)、胎盘碱性磷酸酶(PLAP)或抗血管生成因子sFlt-1(sFlt-1)的表达谱或表达水平，或诸如外泌体或微囊泡的胞外囊泡(EVs)的浓度水平；以及(b)将待筛查的人类受试者的所述至少胎盘血管生成肽(PlGF)、胎盘碱性磷酸酶(PLAP)或抗血管生成因子sFlt-1(sFlt-1)的表达谱或表达水平或诸如外泌体或微囊泡的胞外囊泡(EVs)的浓度水平与已经建立的表达谱或表达水平进行比较；其中，至少胎盘血管生成肽(PlGF)、胎盘碱性磷酸酶(PLAP)或抗血管生成因子sFlt-1(sFlt-1)的差异表达或诸如外泌体或微囊泡的胞外囊泡(EVs)的浓度水平指示选自妊娠期糖尿病或先兆子痫的妊娠相关疾病。2.根据权利要求1所述的用于筛查具有发展妊娠相关疾病风险的受试者的体外方法，其特征在于，所述妊娠相关疾病是妊娠期糖尿病，并且所述方法包括：(a)测量从待筛查的受试者，优选从人类受试者的龈沟液(GCF)样品获得的至少胎盘血管生成肽(PIGF)的表达谱或表达水平；以及(b)将待筛查的人类受试者的所述至少PlGF的表达谱或表达水平与已经建立的表达谱或表达水平进行比较，其中至少PlGF的过表达指示妊娠期糖尿病。3.根据权利要求2所述的用于筛查受试者的体外方法，其特征在于，所述方法包括：(a)测量至少PlGF和血糖的表达谱或表达水平，或至少PlGF和PLAP(胎盘碱性磷酸酶)的表达谱或表达水平，或至少PIGF和sFlt-1(抗血管生成因子sFlt-1)的表达谱或表达水平，或至少PlGF、PLAP和sFlt-1的表达谱或表达水平，或至少PlGF、PLAP和血糖的表达谱或表达水平，或至少PlGF、sFlt-1和血糖的表达谱或表达水平，或至少PlGF、PLAP、sFlt-1和血糖的表达谱或表达水平，其中PlGF、PLAP和sFlt-1从取自受试者的GCF样品获得；以及(b)将待筛查的受试者的所述至少PlGF和血糖的表达谱或表达水平，或至少PlGF和PLAP的表达谱或表达水平，或至少PIGF和sFlt-1的表达谱或表达水平，或至少PlGF、PLAP和sFlt-1的表达谱或表达水平，或至少PlGF、PLAP和血糖的表达谱或表达水平，或至少PlGF、sFlt-1和血糖的表达谱或表达水平，或至少PlGF、PLAP、sFlt-1和血糖的表达谱或表达水平与已经建立的表达谱或表达水平进行比较，其中，至少PlGF和血糖，或至少PlGF和PLA...

【专利技术属性】
技术研发人员：亚历杭德拉·查帕罗·帕迪利亚，塞巴斯蒂安·伊兰尼斯·洛佩兹，
申请(专利权)人：洛斯安第斯大学，
类型：发明
国别省市：智利,CL