一种杭白菊挥发油的提取及分析方法技术

本发明专利技术公开了一种杭白菊挥发油的提取及分析方法，采用顶空固相微萃取‑气相色谱‑三重四极杆串联质谱技术，检测杭白菊的挥发性成分，同时应用自动质谱退卷积定性系统对总离子流图自动进行反卷积处理，拆分重叠峰，并结合保留指数分析杭白菊的挥发性成分，使质谱检索结果更为准确，提高了定性分析的准确度。相比现有技术，本发明专利技术的提取及分析方法对于挥发性成分复杂、种类多的测定较为准确，能够分析到杭白菊中的88种挥发性成分。

【技术实现步骤摘要】
一种杭白菊挥发油的提取及分析方法
本专利技术涉及植物分析
，尤其涉及一种杭白菊挥发油的提取及分析方法。
技术介绍
菊花是菊科菊属宿根性草本植物的干燥头状花序，根据产地和加工方法主要分为“亳菊”、“滁菊”、“贡菊”、“杭菊”和“怀菊”等。2009年卫生部把菊花加入“药食同源“物品名单，成为人们最喜爱的饮品之一。杭白菊产于浙江桐乡，在我国有悠久的栽培历史。临床及现代药理实验表明，杭白菊具有抗炎、抗肿瘤、抗氧化、保护心血管等多方面的生物活性，而挥发油在抗肿瘤、解热镇痛、抗炎及促进药物吸收等方面也具有药理活性，所以，菊花中所含的挥发油与其生理活性密切相关。目前，国内外对挥发油的提取多采用溶剂浸提、水蒸汽蒸馏、超临界CO2流体萃取、超声波辅助萃取、顶空-固相微萃取等方法，再利用气相色谱质谱串联技术检测其成分。顶空-固相微萃取技术是近几年发展起来的前处理方法，它集采样、萃取、浓缩、进样于一体，操作简便、使用样品量少、易实现自动化，大大加快了分析检测的速度。萃取后的物质采用气相色谱质谱结合质谱谱库检索方法，将组分的质谱峰与质谱数据库(NIST2.2标准谱库)进行匹配比对，以匹配度高的化合物作为鉴定结果，这种定性分析方法在高匹配化合物较多时，容易出现定性错误。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术提供了一种杭白菊挥发油的提取及分析方法，其能够提高杭白菊挥发油定性分析的准确度。为了达到上述目的，本专利技术所采用的技术方案如下：一种杭白菊挥发油的提取及分析方法，其包括以下步骤：S1、顶空固相微萃取：将杭白菊待分析样品置于顶空瓶中，加入氯化钠和蒸馏水，然后将顶空瓶瓶口密封，插入萃取头，萃取温度为60～70℃，萃取时间为40～50min，萃取结束后将萃取头插入气相色谱-三重四级杆串联质联仪的气相色谱进样口解吸，解吸时间为4-5min；S2、气相色谱质谱串联分析：待分析样品在气相色谱-三重四级杆串联质联仪中进行色谱分析和质谱分析，得到总离子流图，并记录待分析样品的各个组分的保留时间；S3、测定待分析样品的保留指数：按照待分析样品的色谱分析条件和质谱分析条件对正构烷径C7～C40的标准样品进行气相色谱质谱串联分析，并记录每个正构烷烃标准样品的保留时间，根据公式计算待分析样品的各个组分的保留指数，式中，RI为待测化合物的保留指数；n为正构烷烃的碳原子数；RTx为待测化合物的保留时间(min)；RTn和RTn+1分别为碳原子数为n、n+1的正构烷烃的保留时间(min)，且RTn+1>RTx>RTn；S4、对总离子流图的共流色谱峰进行拆分处理，得到提纯的质谱图，采用纯净的质谱图在NIST2.2标准谱库中检索，根据匹配度、保留指数进行核对，以匹配度和保留指数最接近的化学结构为鉴定结果，同时运用峰面积归一化法计算杭白菊挥发油成分的相对含量。进一步，步骤S1中，氯化钠的添加量为待分析样品重量的1～3.3倍，蒸馏水的用量为每克待分析样品加入20～30ml蒸馏水，萃取温度为70℃，萃取时间为50min，萃取头为50/30μmDVB/CAR/PDMS，解吸时间为5min。进一步，步骤S2中，色谱分析条件为：TR-5MS弹性石英毛细柱30m×0.25mm×0.25μm；升温程序：初始温度40℃，保持1min，然后以13℃/min的速率升温至100℃，以3℃/min的速率升温至110℃，保持1min，再以5℃/min的速率升温至150℃并保持1min，以2℃/min的速率升温至180℃，保持1min，最后以15℃/min的速率升温至250℃并保持2min；分流比10：1；进样口温度为250℃；载气：99.999％高纯度氦气；流速1.2mL/min。进一步，步骤S2中，质谱分析条件为：EI离子源；离子源温度280℃；传输线温度280℃；电子轰击能量70eV；扫描方式为全扫描；质量扫描范围33～350m/z。进一步的，步骤S4中，应用自动质谱退卷积定性系统识别总离子流图的共流色谱峰，并拆分共流色谱峰，得到提纯的质谱图。优选地，步骤S1中，萃取头在插入顶空瓶瓶口前先进行老化处理，所述萃取头为50/30μmDVB/CAR/PDMS。优选地，所述老化处理是在气相色谱进样口中进行的。优选地，所述老化处理的时间为60min，温度为270℃。相比现有技术，本专利技术的有益效果在于：本专利技术采用顶空固相微萃取-气相色谱-三重四极杆串联质谱技术，检测杭白菊的挥发性成分，应用自动质谱退卷积定性系统识别拆分总离子流图的共流色谱峰，得到纯净的质谱图，并结合了保留指数法鉴定待测组分的性质，使质谱检索结果更为准确，提高了定性分析的准确度。本专利技术的提取及分析方法对于挥发性成分复杂、种类多的测定较为准确，能够分析到杭白菊中的88种挥发性成分，进一步促进杭白菊的推广应用及功效研究。附图说明图1为本专利技术的顶空固相微萃取方法中不同萃取头对杭白菊挥发性成分萃取效果的影响示意图；图2为本专利技术的顶空固相微萃取方法中不同萃取温度对杭白菊挥发性成分萃取效果的影响示意图；图3为本专利技术的顶空固相微萃取方法中不同萃取时间对杭白菊挥发性成分萃取效果的影响示意图；图4为本专利技术的顶空固相微萃取方法中NaCl添加量对杭白菊挥发性成分萃取效果的影响示意图；图5为本专利技术的顶空固相微萃取方法中解吸时间对杭白菊挥发性成分萃取效果的影响示意图；图6为本专利技术的杭白菊挥发性成分总离子流图。具体实施方式下面，结合附图以及具体实施方式，对本专利技术做进一步描述：据相有关文献报道，杭白菊挥发油的主要成分是萜烯类及其含氧衍生物。因此，本研究用峰面积代表萃取物质的量，出峰数代表萃取物质的种类，选择杭白菊挥发性成分的总峰面积、主峰面积(萜烯类及其含氧衍生物)、总峰数和主峰数四个参数来评价萃取效果，确定顶空固相微萃取杭白菊挥发性物质的最佳条件。实施例1萃取头的选择在正式采样前先将全新的萃取头放在气相色谱的进样口中进行老化，萃取头的老化条件见表1。表1萃取头的老化条件称取杭白菊碎片0.3g，置于20mL的顶空样品瓶中，加入8mL蒸馏水，萃取温度为40℃，萃取时间为20min，平衡时间为10min，分别考察已老化好的不同萃取头(85μmCAR/PDMS、65μmPDMS/DVB、50/30μmDVB/CAR/PDMS、85μmPA)对杭白菊挥发性物质的萃取效果，每个样品重复做3次。结果见附图1。由附图1可以看出，四种萃取头的萃取效果有明显差异。当用50/30μmDVB/CAR/PDMS萃取头时，总峰面积、总峰数、主峰面积和主峰数均为最大；当用85μmPA萃取头时，峰面积和出峰数均为最小。综合比较，四种萃取头对杭白菊挥发性物质的萃取效果依次为DVB/CAR/PDMS＞PDMS/DVB＞CAR/PDMS＞PA。专利技术人经过研究发现，以下几个因素影响了杭白菊挥发油的萃取效果：(1)萃取头涂层性质；(2)萃取头涂层厚度；(3)萃取头含杂质情况。涂层PDMS(聚二甲基硅氧烷)为非极性涂层，适用于萃取非极性化合物。涂层CAR为碳分子筛，其比表面积大易于吸附小分子化合物。涂层DVB(二乙烯苯)，为极性固体涂层，具有大孔径和吸附半挥发性物质的特点。涂层PA(聚丙烯酸酯)，为极性涂层，用于萃取强极性化合物。因此，萃取头涂层为DVB本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种杭白菊挥发油的提取及分析方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、顶空固相微萃取：将杭白菊待分析样品置于顶空瓶中，加入氯化钠和蒸馏水，然后将顶空瓶瓶口密封，插入萃取头，萃取温度为60～70℃，萃取时间为40～50min，萃取结束后将萃取头插入气相色谱‑三重四级杆串联质联仪的气相色谱进样口解吸，解吸时间为4‑5min；S2、气相色谱质谱串联分析：待分析样品在气相色谱‑三重四级杆串联质联仪中进行色谱分析和质谱分析，得到总离子流图，并记录待分析样品的各个组分的保留时间；S3、测定待分析样品的保留指数：按照待分析样品的色谱分析条件和质谱分析条件对正构烷径C7～C40的标准样品进行气相色谱质谱串联分析，并记录每个正构烷烃标准样品的保留时间，根据公式

【技术特征摘要】
1.一种杭白菊挥发油的提取及分析方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、顶空固相微萃取：将杭白菊待分析样品置于顶空瓶中，加入氯化钠和蒸馏水，然后将顶空瓶瓶口密封，插入萃取头，萃取温度为60～70℃，萃取时间为40～50min，萃取结束后将萃取头插入气相色谱-三重四级杆串联质联仪的气相色谱进样口解吸，解吸时间为4-5min；S2、气相色谱质谱串联分析：待分析样品在气相色谱-三重四级杆串联质联仪中进行色谱分析和质谱分析，得到总离子流图，并记录待分析样品的各个组分的保留时间；S3、测定待分析样品的保留指数：按照待分析样品的色谱分析条件和质谱分析条件对正构烷径C7～C40的标准样品进行气相色谱质谱串联分析，并记录每个正构烷烃标准样品的保留时间，根据公式计算待分析样品的各个组分的保留指数，式中，RI为待测化合物的保留指数；n为正构烷烃的碳原子数；RTx为待测化合物的保留时间(min)；RTn和RTn+1分别为碳原子数为n、n+1的正构烷烃的保留时间(min)，且RTn+1>RTx>RTn；S4、对总离子流图的共流色谱峰进行拆分处理，得到提纯的质谱图，采用纯净的质谱图在NIST2.2标准谱库中检索，根据匹配度、保留指数进行核对，以匹配度和保留指数最接近的化学结构为鉴定结果，同时运用峰面积归一化法计算杭白菊挥发油成分的相对含量。2.如权利要求1所述的杭白菊挥发油的提取及分析方法，其特征在于：步骤S1中，氯化钠的添加量为待分析样品重量的1～3.3倍，蒸馏水的用量为每克待分析样品加入20～30ml蒸馏水，萃取温度为70℃，萃取时间为50min...

【专利技术属性】
技术研发人员：李蓉，张鹏云，刘敬，李浩洋，
申请(专利权)人：中山出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：广东,44