用于检测融合基因的混合基因、标准质粒、试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种用于检测融合基因的混合基因，其基因序列如SEQ ID NO:1所示，包括SEQ ID NO:2的BCR‑ABL融合基因、SEQ ID NO:3的AML‑ETO融合基因、SEQ ID NO:4的PML‑RARA融合基因和SEQ ID NO:5的ABL内参基因；还涉及含有混合基因的标准质粒，包括SEQ ID NO:6的PUC57质粒；还涉及一种含有标准质粒的试剂盒；还涉及一种标准质粒的制备方法。其优点在于，能够用于在定量检测人的骨髓或外周血标本中的白血病相关融合基因中BCR‑ABL、RUNX1‑RUNX1T1(AML‑ETO)和PML‑RARA融合基因双标准曲线建立；有效地提高了检测效率及精确度，降低人为操作失误，避免出现多质粒污染；标准质粒的最低检出拷贝数为1*100个/ml；操作简单，不易污染，检测范围大，能够有效降低检测成本。

Mixed gene, standard plasmid, reagent kit for detecting fusion gene and preparation method thereof

The present invention relates to a hybrid gene for detecting fusion genes, whose gene sequence is shown as SEQ ID NO:1, including the BCR_ABL fusion gene of SEQ ID NO:2, the AML_ETO fusion gene of SEQ ID NO:3, the PML_RARA fusion gene of SEQ ID NO:4 and the ABL internal reference gene of SEQ ID NO:5, and also relates to the ABL internal reference gene containing the mixed gene. A quasiplasmid, including a PUC57 plasmid SEQ ID NO:6, also relates to a kit containing a standard plasmid, and also relates to a method for preparing a standard plasmid. The advantages of this method are that it can be used to quantitatively detect BCR_ABL, RUNX1_RUNX1T1 (AML_ETO) and PML_RARA fusion genes in human bone marrow or peripheral blood specimens, and the establishment of double standard curves can effectively improve the detection efficiency and accuracy, reduce human errors and avoid multi-plasmid contamination. The lowest detection copy number of standard plasmids is 1 * 100 / ml. The operation is simple, not easy to be contaminated, the detection range is large, and the detection cost can be effectively reduced.

【技术实现步骤摘要】
用于检测融合基因的混合基因、标准质粒、试剂盒及其制备方法
本专利技术涉及分子生物学
，尤其涉及一种用于检测融合基因的混合基因、标准质粒、试剂盒及其制备方法。
技术介绍
目前针对临床血液病融合基因定量检测，主要是以合成ABL内参基因作为单荧光标准曲线，进行相对定量；也有以分别合成ABL内参基因和目的基因序列做双荧光定量标准曲线，进行定量。单荧光标准曲线，存在需要基因扩增效率达到100％的理想状态，在实际检测过程中难以达到，检测结果准确性和一致性难以保证。另外由于目前血液病融合基因定量项目较多，双标准曲线法，需要合成多个目的基因质粒，有操作复杂，易污染，检测范围小的缺点。因此，亟需一种混合多基因序列的标准质粒，能够简化日常白血病融合基因荧光定量PCR法检测过程中的双标准曲线的制备。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术中的不足，提供一种用于检测融合基因的混合基因、标准质粒及其制备方法。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案是：一方面，本专利技术提供一种用于检测融合基因的混合基因，其基因序列如SEQIDNO:1所示。优选地，如SEQIDNO:2所示的BCR-ABL融合基因、如S本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测融合基因的混合基因，其特征在于，其基因序列如SEQ ID NO:1所示。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测融合基因的混合基因，其特征在于，其基因序列如SEQIDNO:1所示。2.根据权利要求1所述的用于检测融合基因的混合基因，其特征在于，包括如SEQIDNO:2所示的BCR-ABL融合基因、如SEQIDNO:3所示的AML-ETO融合基因、如SEQIDNO:4所示的PML-RARA融合基因和如SEQIDNO:5所示的ABL内参基因。3.一种用于检测融合基因的标准质粒，包括如权利要求1或2所述的混合基因，其特征在于，还包括具有如SEQIDNO:6所示的PUC57质粒。4.一种用于检测融合基因的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求3所述的标准质粒。5.一种用于检测融合基因的标准质粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤S1、对需要进行荧光定量的融合基因和内参基因设计相对应的引物探针；步骤S2、根据步骤S1的所述引物探针的位置截取所述引物探针对应的所述融合基因和所述内参基因的基因序列；步骤S3、将步骤S2中截取的所述融合基因的基因序列和所述所述内参基因的基因序列进行基因合成，得到混合基因；步骤S4、将步骤S3中的所述混合基因插入到PUC57质粒，得到标准质粒；其中，在步骤S1中，所述融合基因包括如SEQIDNO:2所示的BCR-ABL融合基因、如SEQIDNO:3所示的AML-ETO融合基因、如SEQIDNO:4所示的PML-RARA融合基因和如SEQIDNO:5所示的ABL内参基因。6.根据权利要求5所述的用于检测融合基因的标准质粒的制备方法，其特征在于，所述BCR-ABL融合基因的对应的引物探针包括如SEQIDNO:7所示的BCR-ABL-F、如S...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹金良，
申请(专利权)人：上海科医联创医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31