一种天坛株痘苗病毒的荧光标记穿梭载体及其制备方法技术

本发明专利技术公开的一种天坛株痘苗病毒的荧光标记穿梭载体，穿梭载体含有mCherry红色荧光蛋白报告基因，编码mCherry的DNA序列位于天坛株痘苗病毒胸苷激酶基因TK的同源重组臂TKL和TKR之间，由P7.5启动子启动mCherry红色荧光报告基因表达，穿梭载体含有氨苄青霉素筛选标记和大肠杆菌复制起始位点pUC ori。本发明专利技术以mCherry红色荧光蛋白基因为报告基因可用于筛选重组痘苗病毒，重组病毒感染肿瘤动物模型后可作为特异性分子探针成为追踪靶目标并实现小动物活体成像；同时可提高痘苗病毒的肿瘤细胞选择性。

Fluorescent labeled shuttle vector of Tiantan strain vaccinia virus and preparation method thereof

The present invention discloses a fluorescent labeled shuttle vector of Tiantan Vaccinia Virus. The shuttle vector contains mCherry red fluorescent protein reporter gene, and the DNA sequence encoding mCherry is located between the homologous recombinant arm TKL and TKR of the thymidine kinase gene TK of Tiantan Vaccinia Virus. The mCherry red fluorescent reporter gene table is activated by P7.5 promoter. The shuttle vector contains ampicillin screening marker and Escherichia coli replication start site pUC ori. The mCherry red fluorescent protein gene can be used as a reporter gene for screening recombinant vaccinia virus, and the recombinant virus can be used as a specific molecular probe to become a tracking target and realize in vivo imaging of small animals after infection of tumor animal models, and can improve the tumor cell selectivity of vaccinia virus.

【技术实现步骤摘要】
一种天坛株痘苗病毒的荧光标记穿梭载体及其制备方法
本专利技术属于生物基因工程
，具体涉及一种天坛株痘苗病毒的荧光标记穿梭载体，本专利技术还涉及一种天坛株痘苗病毒的荧光标记穿梭载体的制备方法。
技术介绍
肿瘤生物治疗技术是近年来兴起的一种全新的肿瘤治疗手段，具有副作用小、抗肿瘤活性高、适应性广等特点。将生物技术用于肿瘤治疗，既可靶向性地杀伤肿瘤细胞同时降低对正常细胞和组织的损害，是改变和提高患者自身机体免疫功能的治本方法，为最终攻克肿瘤带来希望，其应用前景广阔。痘苗病毒作为第一个成功应用于人类的疫苗，引起了长时间普遍的关注和研究。痘苗病毒具有许多理想的生物治疗载体属性，使其有可能成为疫苗和溶瘤病毒的优良载体。痘苗病毒能够选择性地感染肿瘤细胞，并在其中复制，最终使肿瘤细胞裂解。胸苷激酶TK为痘苗病毒DNA复制所必需，正常细胞中TK浓度较低，不足以供TK去除的痘苗病毒复制；而肿瘤细胞DNA代谢旺盛，有较高浓度的TK存在，所以TK去除的痘苗病毒更倾向于在肿瘤细胞中复制，这已在包括结肠癌、黑素瘤、肉瘤等在内的多种肿瘤细胞中得到证实。活体生物荧光成像技术是近年来发展起来的一项分子、基因表达本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种天坛株痘苗病毒的荧光标记穿梭载体，其特征在于，所述穿梭载体含有mCherry红色荧光蛋白报告基因。

【技术特征摘要】
1.一种天坛株痘苗病毒的荧光标记穿梭载体，其特征在于，所述穿梭载体含有mCherry红色荧光蛋白报告基因。2.根据权利要求1所述的一种天坛株痘苗病毒的荧光标记穿梭载体，其特征在于，编码所述mCherry的DNA序列位于天坛株痘苗病毒胸苷激酶基因TK的同源重组臂TKL和TKR之间，由P7.5启动子启动mCherry红色荧光报告基因表达，所述穿梭载体含有氨苄青霉素筛选标记和大肠杆菌复制起始位点pUCori。3.根据权利要求1所述的一种天坛株痘苗病毒的荧光标记穿梭载体，其特征在于，所述穿梭载体的核苷酸序列如序列1所示。4.根据权利要求1所述的一种天坛株痘苗病毒的荧光标记穿梭载体，其特征在于，所述穿梭载体的出发载体为pMV-VTTTK，pMV-VTTTK载体包含痘苗病毒天坛株的TK基因的同源重组臂TKL和TKR。5.根据权利要求4所述的一种天坛株痘苗病毒的荧光标记穿梭载体，其特征在于，所述pMV-VTTTK载体序列如序列2所示。6.如权利要求1-5任一所述的一种天坛株痘苗病毒的荧光标记穿梭载体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，根据GenBank:AY678264.1mCherry红色荧光蛋白报告基因DNA序列，设计扩增引物，以pbI111L-mCherry质粒为模板，PCR扩增获得红色荧光蛋白报告基因完整编码序列mCherryCDS；PCR扩增参数为：PCR反应体系为：5×PrimerSTARBuffer(Mg2+plus)10μl，dNTPMixture4μl，mcherryF(10μM)1μl，mcherryR(10μM)1μl，模板...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑梦迪，汪洋，马茜，张寒，张彦，
申请(专利权)人：西安医学院，
类型：发明
国别省市：陕西,61