【技术实现步骤摘要】
用于痘苗病毒天坛株TK基因的示踪打靶质粒及其制备方法
本专利技术属于生物基因工程
,具体涉及一种用于痘苗病毒天坛株TK基因的示踪打靶质粒,本专利技术还涉及该用于痘苗病毒天坛株TK基因的示踪打靶质粒的制备方法。
技术介绍
痘苗病毒(vacciniavirus,VACV)属于痘病毒科,正痘病毒属,是一种有包膜的双链DNA病毒,其基因组长达200kbp。VACV作为疫苗的载体或溶瘤病毒,相比其他病毒载体如逆转录病毒、人单纯疱疹病毒和腺病毒等,具有很多独特的优势。且VACV作为人类消灭天花的疫苗,在人体的应用长达一个多世纪,其安全性和有效性已经在实践中被充分验证。因此,VACV被认为是较理想的溶瘤病毒载体。痘苗病毒天坛株(VacciniavirusTianTan,VACV-VTT)是我国特有的病毒株,由于地域性使用原因,用于溶瘤病毒改造的痘苗病毒主要包括:WR株(Westernreserve)、韦氏株(Wyeth或NYCBOH)、李斯特株(Lister)和哥本哈根株(Copenhagen),针对VACV-VTT的溶瘤效力的研究尚少。为了研究并提高VACV-VTT的溶 ...
【技术保护点】
用于痘苗病毒天坛株TK基因的示踪打靶质粒,其特征在于,包括出发载体pMV、痘苗病毒天坛株TK基因的上游同源重组臂VTT‑TKL和下游同源重组臂VTT‑TKR,在VTT‑TKL与VTT‑TKR之间有痘苗病毒早/晚期启动子P11和晚期启动子P7.5,启动子P11和启动子P7.5间的连接序列有两个酶切位点,启动子P11的下游和启动子P7.5的下游均包含1个多克隆位点,启动子P7.5后的多克隆位点处插入示踪基因Luciferase,该示踪打靶质粒的核苷酸序列如序列1所示。
【技术特征摘要】
1.用于痘苗病毒天坛株TK基因的示踪打靶质粒,其特征在于,包括出发载体pMV、痘苗病毒天坛株TK基因的上游同源重组臂VTT-TKL和下游同源重组臂VTT-TKR,在VTT-TKL与VTT-TKR之间有痘苗病毒早/晚期启动子P11和晚期启动子P7.5,启动子P11和启动子P7.5间的连接序列有两个酶切位点,启动子P11的下游和启动子P7.5的下游均包含1个多克隆位点,启动子P7.5后的多克隆位点处插入示踪基因Luciferase,该示踪打靶质粒的核苷酸序列如序列1所示。2.如权利要求1所述的用于痘苗病毒天坛株TK基因的示踪打靶质粒,其特征在于,所述出发载体pMV包含大肠杆菌复制起始位点pUCori和氨苄青霉素抗性筛选标记。3.如权利要求1或2所述的用于痘苗病毒天坛株TK基因的示踪打靶质粒,其特征在于,所述启动子P11和启动子P7.5启动基因表达的顺序相反,启动子P11为反向启动,启动子P7.5为正向启动。4.如权利要求1所述的用于痘苗病毒天坛株TK基因的示踪打靶质粒的制备方法,其特征在于,具体按照以下步骤实施:步骤1:人工设计并合成启动子P7.5和启动子P11序列及两个多克隆位点序列,并克隆到pMV载体中,形成pMV-PRO质粒;设计合成引物,PCR获得上游同源重组臂VTT-TKL和下游同源重组臂VTT-TKR及示踪基因Luciferase片段;步骤2:将步骤1中得到的pMV-PRO质粒和VTT-TKR片段分别经BamHI/KpnI双酶切后纯化回收,将回收的片段进行连接、转化,获得中间质粒pMV-VTTTKR;步骤3:将步骤2中得到的pMV-VTTTKR质粒和步骤1中得到的VTT-TKL片段分别经PstI/SalI双酶切后纯化回收,将回收的片段进行连接、转化,获得打靶质粒pMV-VTTTK;步骤4:将步骤3中得到的pMV-VTTTK质粒和步骤1中得到的Luciferase片段分别经EcoRI/BamHI双酶切后纯化回收,将回收...
【专利技术属性】
技术研发人员:马茜,牛静燕,周丽,王婷,汪洋,
申请(专利权)人:西安医学院,
类型:发明
国别省市:陕西,61
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