使用短干扰核酸(siNA)的乙型肝炎病毒(HBV)基因表达的RNA干扰介导的抑制制造技术

本发明专利技术涉及使用短干扰核酸(siNA)的乙型肝炎病毒(HBV)基因表达的RNA干扰介导的抑制。本发明专利技术还涉及用于研究、诊断和治疗对HBV基因表达和/或活性的调节响应和/或调节HBV基因表达通路的性状、疾病或状况的化合物、组合物和方法。具体而言，本发明专利技术涉及包括能够调节或介导针对HBV基因表达的RNA干扰(RNAi)的双链核酸分子，包括小核酸分子，如短干扰核酸(siNA)、短干扰RNA(siRNA)、双链RNA(dsRNA)、微小RNA(miRNA)和短发夹RNA(shRNA)分子。

RNA interference mediated inhibition of hepatitis B virus (HBV) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)

The present invention relates to RNA interference mediated suppression of hepatitis B virus (HBV) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA). The invention also relates to compounds, compositions and methods for studying, diagnosing and treating regulatory responses to HBV gene expression and/or activity and/or regulating the properties, diseases or conditions of HBV gene expression pathways. Specifically, the present invention relates to a double-stranded nucleic acid molecule comprising RNA interference (RNAi) molecules capable of regulating or mediating the expression of HBV genes, including small nucleic acid molecules such as short interfering nucleic acid (siNA), short interfering RNA (siRNA), double-stranded RNA (dsRNA), microRNA (microRNA) and short hairpin RNA (shRNA).

【技术实现步骤摘要】
使用短干扰核酸(siNA)的乙型肝炎病毒(HBV)基因表达的RNA干扰介导的抑制本申请是申请日为2011年8月12的中国专利申请201180050143.8“使用短干扰核酸(siNA)的乙型肝炎病毒(HBV)基因表达的RNA干扰介导的抑制”的分案申请。序列表依照37CFR§1.52(e)(5)，经由EFS提交的序列表通过引用并入本文。经由EFS提交的序列表文本文件包含于2010年8月17日创建的文件″SequenceListing_IFD1″，其大小为455,495字节。
本专利技术涉及用于研究、诊断和治疗对HBV基因表达和/或活性的调节响应和/或调节HBV基因表达通路的性状、疾病或状况的化合物、组合物和方法。具体而言，本专利技术涉及包括能够调节或介导针对HBV基因表达的RNA干扰(RNAi)的双链核酸分子，包括小核酸分子，如短干扰核酸(siNA)、短干扰RNA(siRNA)、双链RNA(dsRNA)、微小RNA(miRNA)和短发夹RNA(shRNA)分子。
技术介绍
乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的传染性肝脏疾病。该疾病可以急性引起肝脏炎症、呕吐、黄疸并且在一些少数情况下严重的暴发性疾病、死亡。大多数感染导致慢性疾病，所述慢性疾病可以是无症状的或导致慢性肝脏炎症，所述慢性肝脏炎症导致肝硬化和肝细胞癌(HCC)发展的发病率上升。HBV感染是全球性问题，全世界有约＞350百万人被慢性感染，每年有60万人死于HBV相关的肝脏疾病或HCC。该疾病已引起在亚洲和非洲的疾病流行，并且在中国流行。HBV的传播是经由传染性血液或体液。目前有用于预防HBV感染的疫苗。然而，疫苗是预防性的，不能用于治疗已被感染的患者。有数个批准的通过阻断HBV聚合酶的作用而防止HBV复制的慢性乙型肝炎的化疗治疗(拉米夫定、阿德福韦、恩替卡韦和替比夫定)。所述治疗都没有导致病毒的完全清除，这些治疗导致在延长的治疗之后发展的耐药的HBV变异株。也可以用聚乙二醇化干扰素-α2a治疗乙型肝炎，但是这种治疗与严重的副作用相关，不是在所有患者中都有效。HBV是嗜肝病毒科的成员，基于抗原表位，其被分为4种主要血清型(adr、adw、ayr、ayw)。基于基因组序列，该病毒也可以归类为8种基因型(A-H。基因型A在美洲、非洲、印度和西欧是常见的。基因型B和C存在于亚洲和美国。基因型D在南欧和印度是最常见的。基因型E存在于西非和南非。基因型F和H通常存在于中美洲和南美洲。基因型G通常存在于欧洲和美国。HBV基因组由部分双链的环状DNA链组成。基因组是～3.3Kb长度。其编码4个已知基因(C、X、P和S)。HBV是在复制过程中利用逆转录酶的少数DNA病毒之一。HBV复制涉及多个阶段，包括进入、脱衣壳和将病毒基因组运输到细胞核中。最初，HBV基因组的复制涉及产生RNA中间体，然后所述RNA中间体被逆转录以产生DNA病毒基因组。由于目前的治疗方法效率低下、严重的副作用或由于耐药变异株的产生，目前的治疗方法是有限的，所以在临床上需要开发新的疗法来治疗HBV感染。通过RNA干扰(以下称为“RNAi”)改变病毒基因表达，特别是HBV基因表达，是满足这种需要的一种方法。通过短单链RNA(“ssRNA”)或双链RNA(″dsRNA″)分子诱导RNAi。短dsRNA分子，称为“短干扰核酸(“siNA”)”或“短干扰RNA”或“siRNA”或“RNAi抑制剂”使与该siNA共有序列同源性的信使RNA(″mRNAs″)的表达沉默。这可以经由通过包含siNA的内切核酸酶复合物，通常称为RNA诱导性沉默复合物(RISC)介导的mRNA切割发生。目标RNA的切割一般发生于与siNA双链体的引导序列互补的区域中部(Elbashir等人，2001，GenesDev.，15，188)。此外，RNA干扰还可以涉及小RNA(例如微小RNA或miRNA)介导的基因沉默，推测通过抑制翻译或调节染色质结构且从而阻止目标基因序列的转录的细胞机制(参见例如，Allshire，2002，Science，297：1818-1819；Volpe等人，2002，Science，297：1833-1837；Jenuwein，2002，Science，297：2215-2218；和Hall等人，2002，Science，297：2232-2237)。数项研究已经尝试使用RNAi用于治疗HBV，在RNAIfortreatingHepatitisBViralInfection，Chen，Y等人.，PharmaceuticalResearch，2008第25卷，第1期，第72-86页中已经全面综述了这种方法。然而，正如上述参考文献中所述，单一siRNA的转染往往不能提供足够的基因沉默。出处同上。因此，尽管RNAi
取得了显著进步，但是仍然需要可以有效抑制HBV基因表达并且可以治疗与HBV表达相关的疾病如肝脏疾病和癌症的试剂。
技术实现思路
本专利技术提供了对于用调节HBV表达的新的短干扰核酸(siNA)分子治疗对调节HBV基因表达响应的疾病的问题的解决方案。本专利技术提供了用小核酸分子通过RNA干扰(RNAi)用于调节HBV基因的表达并用于治疗乙型肝炎和由乙型肝炎感染导致的这种状况的化合物、组合物和方法。特别地，本专利技术的特征在于用于调节HBV基因和/或涉及HBV基因表达和/或活性的途径的其他基因表达的小核酸分子和方法，所述小核酸分子即短干扰核酸(siNA)分子，包括但不限于短干扰RNA(siRNA)、双链RNA(dsRNA)、微小RNA(miRNA)、短发夹RNA(shRNA)和环状RNA分子。本专利技术人已经发现，选择来自所有已知的完整HBV基因组的保守区的目标位点导致具有高的效力和功效的序列。在一个方面，本专利技术提供了在细胞或哺乳动物中抑制HBV基因表达的双链短干扰核酸(siNA)分子，其中所述双链siNA包含有义和反义链。反义链包含与和HBV基因的表达相关的RNA的至少一部分互补的序列。有义链包含与反义链互补的序列。在各个实施方案中，至少一条链包含至少一个选自序列SEQIDNO：1-502的15个核苷酸的序列。在某些实施方案中，反义链包含至少15个核苷酸，所述至少15个核苷酸与表1a中所述的目标序列具有序列互补性。在其他和/或在相同的实施方案中，反义链包含至少一个表1b中所述的反义序列之一的15个核苷酸的序列。在一些实施方案中，有义链包含至少一个表1b中所述的有义链序列的15个核苷酸的序列。在本专利技术的该方面的某些实施方案中，提供了双链短干扰核酸(siNA)分子，其中反义链包含表1c中所述的修饰的序列，所述修饰的序列与本专利技术的目标序列具有序列互补性。在一些实施方案中，有义链还包含表1c中所述的修饰的序列。在某些实施方案中，本专利技术提供了调节HBV表达的双链短干扰核酸(siNA)分子，其中siNA包含有义链和反义链；每条链独立地是15-30个核苷酸的长度；反义链包含与下列中任一个具有序列互补性的至少15个核苷酸：在本专利技术的一些实施方案中，siNA分子的反义链包含至少一个下列的15个核苷酸：在一些实施方案中，本专利技术的siNA分子的有义链包含至少一个下列的15个核苷酸：在一些实施方案中，本专利技术的siNA分子包含下列中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.双链短干扰核酸(siNA)分子，其包含下列任一种：R‑008380648‑000E、R‑008380783‑000R、R‑008380665‑000N、R‑008380645‑000D、R‑008380408‑000R、R‑008380633‑000U、R‑008380767‑000R、R‑008380730‑000C、R‑008380777‑000H、R‑008380740‑000V、R‑008380558‑000M、R‑008380406‑000Y、R‑008380764‑000P、R‑008380772‑000P、R‑008380389‑000D、R‑008380362‑000H、R‑008380363‑000S、R‑008380340‑000F、R‑008380689‑000H、R‑008380756‑000P、R‑008380736‑000E、R‑008380757‑000Y、R‑008380753‑000N、R‑008380737‑000N、R‑008380734‑000M、或R‑008380791‑000R。

【技术特征摘要】
2010.08.17 US 61/3745551.双链短干扰核酸(siNA)分子，其包含下列任一种：R-008380648-000E、R-008380783-000R、R-008380665-000N、R-008380645-000D、R-008380408-000R、R-008380633-000U、R-008380767-000R、R-008380730-000C、R-008380777-000H、R-008380740-000V、R-008380558-000M、R-008380406-000Y、R-008380764-000P、R-008380772-000P、R-008380389-000D、R-008380362-000H、R-008380363-000S、R-008380340-000F、R-008380689-000H、R-008380756-000P、R-008380736-000E、R-008380757-000Y、R-008380753-000N、R-008380737-000N、R-008380734-000M、或R-008380791-000R。2.组合物，...

【专利技术属性】
技术研发人员：S巴茨，D布朗，M罗宾逊，
申请(专利权)人：瑟纳治疗公司，
类型：发明
国别省市：美国,US