艰难梭菌tcdA毒性基因的LAMP定量检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种艰难梭菌tcdA毒性基因的LAMP定量检测试剂盒，包括：所述艰难梭菌tcdA毒性基因的LAMP检测引物组、艰难梭菌tcdA毒性基因的qLAMP定量检测试剂盒及艰难梭菌tcdA毒性基因定量检测的方法。本发明专利技术将tcdA基因LAMP检测技术与实时荧光定量技术有效结合(qLamp)，不仅节省时间、特异性强、灵敏度高，且可以达到tcdA毒株分型以及定量的目的。

【技术实现步骤摘要】
艰难梭菌tcdA毒性基因的LAMP定量检测试剂盒
本专利技术属于定量检测试剂盒领域，尤其涉及一种艰难梭菌tcdA毒性基因的LAMP定量检测试剂盒。
技术介绍
艰难梭菌1935年由Hall等人首次发现，因其严格厌氧且很难分离培养，故得名。艰难梭菌是一种条件致病型菌株，当病人为长期摄入抗生素类药物后，导致肠道菌群失衡，此时艰难梭菌大量繁殖，并释放大量毒素，对人体肠道造成极大损伤。研究发现大部分艰难梭菌都产生外毒素A和外毒素B这两种毒蛋白。外毒素A首先与粘膜细胞的毒素受体结合，破坏肠道粘膜屏障，造成肠道炎症及损伤，然后外毒素B进一步破坏肠道健康，最终导致伪膜性肠炎和炎症性肠病。tcdA是编码艰难梭菌毒素A的基因，它是艰难梭菌破坏肠道的第一步，因此我们的研究致力于检测tcdA基因，从而尽早检测出有毒性的艰难梭菌，使患者做到早发现早治疗，也可以有效避免抗生素滥用。目前常用的艰难梭菌检测方法主要有：细胞常规培养法、酶联免疫法、酶联免疫层析法、PCR检测、Real-timePCR检测。这些方法有些检测时间长，有些灵敏度不够且很难做到毒株分型。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种简便的tcdA定本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种艰难梭菌tcdA毒性基因的LAMP定量检测试剂盒，其特征在于：包括：所述艰难梭菌tcdA毒性基因的LAMP检测引物组、艰难梭菌tcdA毒性基因的qLAMP定量检测试剂盒及所述艰难梭菌tcdA毒性基因定量检测的方法；所述艰难梭菌tcdA毒性基因的LAMP检测引物组包括所述内引物FIP/BIP外引物F3/B3和环引物LB；所述艰难梭菌tcdA毒性基因的qLAMP定量检测试剂盒包含以下组分：反应液：1×ThermoPol反应缓冲液（2 mM Tris‑Hcl，10 mM (NH)4SO4，50 mM KCl，2 mM MgSO4，0.1％ Tween‑20，pH 8.8 @25℃）；0.2‑...

【技术特征摘要】
1.一种艰难梭菌tcdA毒性基因的LAMP定量检测试剂盒，其特征在于：包括：所述艰难梭菌tcdA毒性基因的LAMP检测引物组、艰难梭菌tcdA毒性基因的qLAMP定量检测试剂盒及所述艰难梭菌tcdA毒性基因定量检测的方法；所述艰难梭菌tcdA毒性基因的LAMP检测引物组包括所述内引物FIP/BIP外引物F3/B3和环引物LB；所述艰难梭菌tcdA毒性基因的qLAMP定量检测试剂盒包含以下组分：反应液：1×ThermoPol反应缓冲液（2mMTris-Hcl，10mM(NH)4SO4，50mMKCl，2mMMgSO4，0.1％Tween-20，pH8.8@25℃）；0.2-2.2mMdNTPs；2-12mMMgSO4；0-1.8M甜菜碱；0.2μMF3/B3；1.0-1.8μMFIP/BIP；0-1.8mMLB，ddH2O补足至17μL；0.2X-2.2X荧光显色剂Evagreen；320U/mLBstDNA聚合酶；DNA样本1μL，共混合成20μL反应体系；反应温度：49-71℃；标准品：S1，S2，S3，S4，S5，分别是浓度为10ng/μL，1ng/μL，100pg/μL，10pg/μL，1pg/μL艰难梭菌ATCC43255菌株DNA。2.根据权利要求1所述的一种艰难梭菌tcdA毒性基因的LAMP定量检测试剂盒，其特征在于：所述外引物F3/B3为用于检测tcdA的环介导等温扩增反应引物，且外引物F3/B3的序列号为：F3Sequence(5'to3')：GCCATATTYTTTAGATTCAGACAA和B3Sequence(5'to3')：CTAAAAAAAG...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨璐溪，李晓燕，
申请(专利权)人：厦门蓝特生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：福建,35