一种荧光定量PCR探针技术联合检测沙眼衣原体、淋球菌、生殖道支原体的方法和试剂盒技术

本公开提供了一种引物探针组，该引物探针组用于荧光定量PCR联合检测沙眼衣原体和淋球菌以及生殖道支原体，该引物探针组包括：CT引物对、CT探针、MG引物对、MG探针、NG引物对和NG探针。另一方面，本公开还提供了一种荧光定量PCR联合检测沙眼衣原体和淋球菌以及生殖道支原体的方法。再一方面，本公开还提供了一种荧光定量PCR联合检测沙眼衣原体和淋球菌以及生殖道支原体的试剂盒。通过上述技术方案，本公开能够以更高的灵敏度且更好的特异性，实现对沙眼衣原体、淋球菌和生殖器支原体的联合检测。

A Fluorescence Quantitative PCR Probe for Detection of Chlamydia Trachomatis, Neisseria Gonorrhoeae and Mycoplasma Genitalium

A primer probe group is provided for the simultaneous detection of Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae and Mycoplasma genitalium by fluorescence quantitative PCR. The primer probe group includes CT primer pair, CT probe, MG primer pair, MG probe, NG primer pair and NG probe. On the other hand, the present disclosure also provides a fluorescent quantitative PCR method for the detection of Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae and Mycoplasma genitalium. On the other hand, the present disclosure also provides a fluorescence quantitative PCR combined detection of Chlamydia trachomatis, gonococcus and genital tract mycoplasma kit. Through the above technical scheme, the invention can realize the joint detection of Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae and Mycoplasma genitalium with higher sensitivity and better specificity.

【技术实现步骤摘要】
一种荧光定量PCR探针技术联合检测沙眼衣原体、淋球菌、生殖道支原体的方法和试剂盒
本公开涉及医药生物
，具体地，涉及一种用于荧光定量PCR联合检测沙眼衣原体和淋球菌以及生殖道支原体的探针引物组、一种荧光定量PCR联合检测沙眼衣原体和淋球菌以及生殖道支原体的方法以及一种荧光定量PCR联合检测沙眼衣原体和淋球菌以及生殖道支原体的试剂盒。
技术介绍
世界卫生组织估计全球每年约有3.4亿新增性传播感染病例，其中沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis，CT)和淋球菌(Neisseriagonorrhoeae，NG)以及生殖道支原体(Mycoplasmagenitourinary，MG)是最常见的三种病原体，导致了包括宫颈炎、盆腔炎、淋病、急性尿道综合症等多种不同症状的性病，并由此进一步导致不孕、胚胎夭折、低体质量胎儿和死胎等严重后果。因此开展沙眼衣原体、淋球菌和生殖器支原体的病原检测及鉴定对于临床性病的早期发现、早期治疗、降低疾病风险和控制传染性疾病具有重要的意义。已经有多份文献公开了沙眼衣原体、淋球菌和生殖器支原体的联合检测。例如：CN101935686A公开了一种淋球菌、人型支原体、生殖器支原体、沙眼衣原体、解脲支原体的检测方法和试剂盒，其中使用了多重PCR凝胶电泳分离方法；CN102277429A公开了一种淋球菌、沙眼衣原体及解脲脲原体的试剂盒，其中使用了芯片法；CN102888464A公开了在单个PCR反应容器中五重检测淋病奈瑟菌、沙眼衣原体、解脲支原体、人型支原体和生殖器支原体检测试剂盒，其中使用了荧光探针PCR法。但是，实验结果显示，已有的沙眼衣原体、淋球菌和生殖器支原体的联合检测方法存在灵敏度低和特异性差的缺陷。
技术实现思路
本公开的目的是克服已有的沙眼衣原体、淋球菌和生殖器支原体的联合检测方法存在灵敏度低和特异性差的缺陷，提供一种灵敏度高且特异性好的联合检测沙眼衣原体、淋球菌和生殖器支原体的方法。为了实现上述目的，一方面，本公开提供了一种引物探针组，该引物探针组用于荧光定量PCR联合检测沙眼衣原体和淋球菌以及生殖道支原体，其特征在于，该引物探针组包括：CT引物对、CT探针、MG引物对、MG探针、NG引物对和NG探针；其中，所述CT引物对包括SEQIDNO.1所示的正向CT引物和SEQIDNO.2所示的反向CT引物；所述CT探针如SEQIDNO.3所示且标记有第一荧光基团；所述MG引物对包括SEQIDNO.4所示的正向MG引物和SEQIDNO.5所示的反向MG引物；所述MG探针如SEQIDNO.6所示且标记有第二荧光基团；所述NG引物对包括SEQIDNO.7所示的正向MG引物和SEQIDNO.8所示的反向MG引物；所述MG探针如SEQIDNO.9所示且标记有第三荧光基团；所述第一荧光基团、所述第二荧光基团和所述第三荧光基团彼此相同或不同。另一方面，本公开还提供了一种荧光定量PCR联合检测沙眼衣原体和淋球菌以及生殖道支原体的方法，所述方法包括如下步骤：(1)提取待测样本的总DNA；(2)以所述总DNA为模板，并使用如上所述的引物探针组，进行荧光定量PCR反应；(3)收集不同检测通道的荧光信号，得到检测结果；a)若所述第一荧光基团对应的荧光通道有扩增曲线，则判定样品中含有沙眼衣原体；b)若所述第二荧光基团对应的荧光通道有扩增曲线，则判定样品中含有生殖道支原体；c)若所述第三荧光基团对应的荧光通道有扩增曲线，则判定样品中含有淋球菌。再一方面，本公开还提供了一种荧光定量PCR联合检测沙眼衣原体和淋球菌以及生殖道支原体的试剂盒，所述试剂盒包括如上所述的引物探针组。通过上述技术方案，本公开能够以更高的灵敏度且更好的特异性，实现对沙眼衣原体、淋球菌和生殖器支原体的联合检测。本公开的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。具体实施方式以下对本公开的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本公开，并不用于限制本公开。本公开提供了一种引物探针组，该引物探针组用于荧光定量PCR联合检测沙眼衣原体和淋球菌以及生殖道支原体，该引物探针组包括：CT引物对、CT探针、MG引物对、MG探针、NG引物对和NG探针；其中，所述CT引物对包括SEQIDNO.1所示的正向CT引物和SEQIDNO.2所示的反向CT引物；所述CT探针如SEQIDNO.3所示且标记有第一荧光基团；所述MG引物对包括SEQIDNO.4所示的正向MG引物和SEQIDNO.5所示的反向MG引物；所述MG探针如SEQIDNO.6所示且标记有第二荧光基团；所述NG引物对包括SEQIDNO.7所示的正向MG引物和SEQIDNO.8所示的反向MG引物；所述MG探针如SEQIDNO.9所示且标记有第三荧光基团；所述第一荧光基团、所述第二荧光基团和所述第三荧光基团彼此相同或不同。其中，所述第一荧光基团、所述第二荧光基团和所述第三荧光基团可以相同，在这种情况下，可以进行沙眼衣原体和淋球菌以及生殖道支原体的累加检测，即给出的检测结果是沙眼衣原体和淋球菌以及生殖道支原体中的任意一者，而不进行沙眼衣原体和淋球菌以及生殖道支原体之间的区分。其中，所述第一荧光基团、所述第二荧光基团和所述第三荧光基团可以彼此不同。在这种情况下，可以进行沙眼衣原体和淋球菌以及生殖道支原体的分别检测，即给出的检测结果进行了沙眼衣原体和淋球菌以及生殖道支原体之间的区分。其中，所述第一荧光基团、所述第二荧光基团和所述第三荧光基团的具体选择可以在本领域常规使用的实时定量PCR荧光基团中任意地选择，所述实时定量PCR荧光基团包括但不限于FAM荧光基团、ROX荧光基团、HEX荧光基团、CY3基团及CY5基团。优选地，所述第一荧光基团、所述第二荧光基团和所述第三荧光基团依次为FAM荧光基团、ROX荧光基团和HEX荧光基团。其中，优选地，该引物探针组还包括内参引物对和内参探针。内参引物对和内参探针可以有助于对不同样本浓度进行均一化。使得不同样本之间的定量结果具有可比性，因此具有了伴随诊断、用药指导及治疗评价等功能；即通过医治前后试验结果比较和前后两次内参结果比较，推断治疗效果、药物疗效等。其中，更优选地，所述内参引物对包括SEQIDNO.10所示的正向内参引物和SEQIDNO.11所示的反向内参引物；所述内参探针如SEQIDNO.12所示且标记有第四荧光基团；所述第一荧光基团、所述第一荧光基团和所述第三荧光基团中的任意一者与所述第四荧光基团均不同；特别优选地，所述第四荧光基团为CY5荧光基团。其中，进一步优选地，该引物探针组由所述CT引物对、所述CT探针、所述MG引物对、所述MG探针、所述NG引物对、所述NG探针、所述内参引物对和所述内参探针组成；再进一步优选地，该引物探针组由等量混合的所述CT引物对、所述CT探针、所述MG引物对、所述MG探针、所述NG引物对、所述NG探针、所述内参引物对和所述内参探针组成。在该优选情况下，该引物探针组中的所述CT引物对、所述CT探针、所述MG引物对、所述MG探针、所述NG引物对、所述NG探针、所述内参引物对和所述内参探针之间互相干扰极小且能够取得更灵敏可信的检测结果。详细地，本申请中SEQIDNO.1-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种引物探针组，该引物探针组用于荧光定量PCR联合检测沙眼衣原体和淋球菌以及生殖道支原体，其特征在于，该引物探针组包括：CT引物对、CT探针、MG引物对、MG探针、NG引物对和NG探针；其中，所述CT引物对包括SEQ ID NO.1所示的正向CT引物和SEQ ID NO.2所示的反向CT引物；所述CT探针如SEQ ID NO.3所示且标记有第一荧光基团；所述MG引物对包括SEQ ID NO.4所示的正向MG引物和SEQ ID NO.5所示的反向MG引物；所述MG探针如SEQ ID NO.6所示且标记有第二荧光基团；所述NG引物对包括SEQ ID NO.7所示的正向MG引物和SEQ ID NO.8所示的反向MG引物；所述MG探针如SEQ ID NO.9所示且标记有第三荧光基团；所述第一荧光基团、所述第二荧光基团和所述第三荧光基团彼此相同或不同。

【技术特征摘要】
1.一种引物探针组，该引物探针组用于荧光定量PCR联合检测沙眼衣原体和淋球菌以及生殖道支原体，其特征在于，该引物探针组包括：CT引物对、CT探针、MG引物对、MG探针、NG引物对和NG探针；其中，所述CT引物对包括SEQIDNO.1所示的正向CT引物和SEQIDNO.2所示的反向CT引物；所述CT探针如SEQIDNO.3所示且标记有第一荧光基团；所述MG引物对包括SEQIDNO.4所示的正向MG引物和SEQIDNO.5所示的反向MG引物；所述MG探针如SEQIDNO.6所示且标记有第二荧光基团；所述NG引物对包括SEQIDNO.7所示的正向MG引物和SEQIDNO.8所示的反向MG引物；所述MG探针如SEQIDNO.9所示且标记有第三荧光基团；所述第一荧光基团、所述第二荧光基团和所述第三荧光基团彼此相同或不同。2.根据权利要求1所述的引物探针组，其中，所述第一荧光基团、所述第二荧光基团和所述第三荧光基团彼此不同；优选地，所述第一荧光基团、所述第二荧光基团和所述第三荧光基团依次为FAM荧光基团、ROX荧光基团和HEX荧光基团。3.根据权利要求1或2所述的引物探针组，其中，该引物探针组还包括内参引物对和内参探针；所述内参引物对包括SEQIDNO.10所示的正向内参引物和SEQIDNO.11所示的反向内参引物；所述内参探针如SEQIDNO.12所示且标记有第四荧光基团；所述第一荧光基团、所述第二荧光基团和所述第三荧光基团中的任意一者与所述第四荧光基团均不同；优选地，所述第四荧光基团为CY5荧光基团。4.根据权利要求3所述的引物探针组，其中，该引物探针组由所述CT引物对、所述CT探针、所述M...

【专利技术属性】
技术研发人员：冀俊峰，
申请(专利权)人：上海孚清生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31