一种假交替单胞菌快速PCR检测方法技术
A rapid PCR detection method for Pseudomonas alternata
The invention provides a rapid PCR detection method for Pseudoalternating bacteria, taking the Pseudoalternating bacteria gene as the detection target gene. The detection steps include primer synthesis, DNA extraction, PCR reaction, electrophoresis detection and result determination. This method is the first public detection method of Porphyra green spot pathogen in China. The detection accuracy is high. Pseudoalternating bacteria were used to infect Porphyra yezoensis artificially and three pairs of specific primers were used to detect the infection of Porphyra yezoensis. The positive detection rate was 100%. The three pairs of primers of the present invention can specifically detect Pseudoalternating bacteria. The detection sensitivity of the three primers are 37 CFU, 3.7 CFU, 37 CFU bacteria and 2.37 pg, 23.7 FG and 2.37 PG DNA, respectively.
【技术实现步骤摘要】
一种假交替单胞菌快速PCR检测方法
本专利技术涉及水产养殖动物的微生物学及病害学领域，具体涉及一种引起条斑紫菜绿斑病的假交替单胞菌快速PCR检测方法。
技术介绍
紫菜是世界上重要的经济藻类，全世界大约有134种。其味道鲜美，含有丰富的维生素、矿物质和抗氧化成分，同时它又是低能量的食物，富含膳食纤维。能够改善盲肠环境并且提高有益微生物区系、降压降血脂、抗肿瘤活性[7]、提高巨噬细胞活性，具有潜在的制药、药用和研究价值。因此紫菜又有“营养宝库”的美称，深受城乡人民喜爱。随着条斑紫菜栽培业的发展，其病害问题愈发突出，成为制约产业发展的一大障碍。大量研究表明，微生物是引起紫菜病烂的重要因素。1968年绿斑病在日本首次报道，随后日本学者Yoshifusa等从患病紫菜中分离出微球菌(Micrococcissp.)、假单胞菌(Pseudomonassp.)以及弧菌属(Vibrio)的细菌。闫咏等通过实验分离、鉴定确认一株柠檬假交替单胞菌(Pseudoalteromonascitrea)是条斑紫菜绿斑病的病原。随后有多名学者对绿斑病的病程及病原进行了研究。假交替单胞菌属(Pseu...
【技术保护点】
1.一种假交替单胞菌快速PCR检测方法，其特征在于：以假交替单胞菌基因为检测靶向基因。
【技术特征摘要】
1.一种假交替单胞菌快速PCR检测方法，其特征在于：以假交替单胞菌基因为检测靶向基因。2.如权利要求1所述的一种假交替单胞菌快速PCR检测方法，其特征在于：所述假交替单胞菌为引起条斑紫菜绿斑病的病原菌。3.如权利要求1所述的一种假交替单胞菌快速PCR检测方法，其特征在于：步骤如下：(1)引物合成：合成特异性引物pws-dnaN13或pws-dnaA2或pcs-dnaN2；(2)提取患病条斑紫菜的DNA：取紫菜在无菌海水中荡洗三次以上，吸干表面水分后，分别称取100mg置于灭菌研钵中，液氮研磨后提取和纯化紫菜基因组，测定DNA浓度后，置于-20℃备用；(3)将步骤(2)提取的DNA与对照DNA以步骤(1)中三对特异性引物中的一对进行PCR反应；(4)PCR产物进行1.5％琼脂糖凝胶电泳检测，在紫外成像仪下观察拍照；(5)结果判定：采用pws-dnaN13...
【专利技术属性】
技术研发人员：李杰，莫照兰，阎永伟，李贵阳，杨慧超，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院黄海水产研究所，
类型：发明
国别省市：山东,37
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