一种E-选择素肽配体修饰的靶向热敏脂质体的制备和应用制造技术

本发明专利技术涉及一种E‑选择素多肽配体修饰的肿瘤靶向脂质体制备方法及应用，所述的靶向脂质体由磷脂酰乙醇胺‑聚乙二醇‑马来酰亚胺‑E选择素肽配体偶联物、二棕榈酰磷脂酰胆碱、培化磷脂酰乙醇胺、肉豆蔻酰溶血卵磷脂制备得到。其中涉及的偶联物DSPE‑PEG‑Mal‑8CR由E‑选择素肽配体8‑CR与磷脂酰乙醇胺‑聚乙二醇‑马来酰亚胺进行化学偶联合成，本发明专利技术制备的肿瘤靶向长循环热敏脂质体，包载不同的抗肿瘤药物后可以主动靶向于肿瘤新生血管并能够抑制肿瘤细胞的迁移，对应对肿瘤的转移和复发有着重要意义。

Preparation and application of a targeted thermosensitive liposome modified by E- selectin peptide ligand

The present invention relates to a preparation method and application of tumor-targeting liposomes modified by E-selectin polypeptide ligands. The targeting liposomes are prepared from phosphatidylethanolamine, polyethylene glycol, maleimide, E-selectin ligand coupling compound, palmitoyl phosphatidylcholine, cultured phosphatidylethanolamine, myristoin hemolytic lecithin. It is prepared. The coupling substance DSPE PEG Mal 8CR is synthesized by chemical coupling of E selectin peptide ligand 8 CR with phosphatidylethanolamine polyethylene glycol maleimide. The tumor-targeting long-circulating thermosensitive liposomes prepared by the present invention can actively target tumor neovascularization and be inhibited after loading different antitumor drugs. The migration of tumor cells is of great importance to the metastasis and recurrence of tumors.

【技术实现步骤摘要】
一种E-选择素肽配体修饰的靶向热敏脂质体的制备和应用
本专利技术属于生物医药制剂
，涉及E选择素配体可与肿瘤细胞竞争结合E选择素从而阻断或抑制肿瘤细胞的迁移，特别涉及一种E-选择素肽类配体修饰的靶向热敏脂质体的制备和在抗肿瘤方面的应用。技术背景E-选择素可特异性识别肿瘤细胞表面的某些糖蛋白和糖脂分子的末端结构域，通过这种识别作用介导的E-选择素与肿瘤细胞间的作用，可使肿瘤细胞在内皮细胞黏附，继而随血流发生迁移，导致肿瘤细胞的扩散迁移。E-选择素天然配体的结构特征仍未被完全阐明，有研究认为其特异性识别的天然配体可能包含糖类、肽类等多种结构类型，目前被广泛接受的E-选择素的主要天然配体结构为路易斯酸化的四聚糖结构sLex，理论上E-选择素的特异性配体可以作为靶向分子将其它抗肿瘤药物带到肿瘤部位，同时还可以发挥该配体对肿瘤细胞迁移的抑制作用，因此设计和合成与E-选择素结合的化合物可以起到肿瘤靶向和抑制肿瘤转移的双重作用。纳米技术与生物技术的融合，使纳米生物技术在近几年获得了重要的进展。脂质体作为一种较成熟的纳米药物载体，具备一些独特的作用特点，脂质体是一种靶向药物载体，它可以通过纳米粒子的EPR效应被动靶向于肿瘤部位，减少药物在正常组织的分布，从而提高药物治疗效果，降低药物毒性作用。目前各种不同方式修饰改良的脂质体不断被报道，例如制备热敏感的脂质体，聚乙二醇(PEG)修饰的脂质体等，这些脂质体通常具有较少的副作用，PEG化后还可显著延长血液循环时间和增加肿瘤组织的药物积聚。同时在脂质体表面还可以进行多种修饰，例如连接不同种类的靶向分子，进一步增加药物对肿瘤部位的靶向作用。但目前尚没有可以在上述基础上能同时解决肿瘤细胞转移问题的靶向脂质体，而肿瘤的转移又恰恰是目前肿瘤致死的最重要原因，本专利技术所设计制备的靶向脂质体不但可将药物靶向至肿瘤部位，还可以抑制由E-选择素所介导的肿瘤转移，因此具有明显的创新性和创造性。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供用于治疗肿瘤及肿瘤转移的功能性脂质体的制备方法，本专利技术将E-选择素的肽配体修饰至DSPE-PEG-Mal表面，然后用于制备一种靶向脂质体，可以用作药物载体包载各种不同的药物，如以紫杉醇为药物模型，将热敏脂质体与主动靶向技术相结合，提高热敏脂质体的靶向性，降低药物的毒副作用，从而达到增强热敏脂质体的抗肿瘤效果的目的，同时抑制肿瘤的转移。本专利技术是通过以下技术方案实现的：一种E-选择素的肽配体修饰的靶向脂质体载药系统，含有磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺-E-选择素肽配体偶联物、二棕榈酰磷脂酰胆碱、培化磷脂酰乙醇胺、肉豆蔻酰溶血卵磷脂。而且，所述E-选择素肽配体在肽配体基础上在其氨基端或羧基端分别添加半胱氨酸作为连接桥。而且，所述E-选择素肽配体包括额瓶体的各种反序形式和D型氨基酸序列形式，CIELLQAR,IELLQARC,CRAQLLEI,RAQLLEIC,(D)-CIELLQAR,(D)-IELLQARC,(D)-CRAQLLEI,(D)-RAQLLEIC。而且，其中所述抗肿瘤药物为紫杉醇、阿霉素、多西紫杉醇、多柔比星或奥沙利铂。而且，所述二棕榈酰磷脂酰胆碱、培化磷脂酰乙醇胺、肉豆蔻酰溶血卵磷脂、磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺-E-选择素肽配体偶联物质量比为80～85：5～10：1～5：5～10。而且，药物与磷脂的质量比为1：25～30。而且，所述磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺-E-选择素肽配体偶联物的合成方法如下：①按照传统固相合成技术合成E-选择素肽配体；②多肽与DSPE-PEG-Mal偶联，方法如下：而且，步骤如下：①将二棕榈酰磷脂酰胆碱、培化磷脂酰乙醇胺、肉豆蔻酰溶血卵磷脂、紫杉醇、DSPE-PEG-Mal-8CR按处方量溶解于氯仿中形成溶液，充分溶解后于旋转蒸发仪上50～55℃条件下去除有机溶剂；②将上述样品放于真空干燥箱真空干燥2～4小时；③加入pH＝7.2的柠檬酸/柠檬酸钠缓冲溶液，于55～60℃条件下水化溶解30min；④用细胞破碎仪超声破碎6～10min，滤膜过滤，得到E-选择素配体肽修饰的靶向脂质体。E-选择素的肽配体修饰的靶向脂质体载药系统在制备抗肿瘤及抗肿瘤转移药物中的应用。与现有技术相比,本专利技术的有益效果：1、本专利技术所涉及的脂质体载药系统制备简单、方便，适用于多种抗肿瘤药物。2、热敏脂质体在局部加热条件下可定点大量释放所载药物，同时E-选择素配体CIELLQAR又可主动靶向肿瘤血管，起到协同肿瘤靶向治疗，最重要的是E-选择素肽配体CIELLQAR还可以抑制肿瘤细胞与血管内皮细胞之间的黏附作用，进而能够抑制肿瘤的转移。3、本专利技术通过处方工艺条件的优化，制备得到E-选择素肽配体修饰的靶向脂质体具有包封率高、粒径分布均匀，制剂可稳定贮存等优点。附图说明图1为本专利技术实施例制备的包载紫杉醇的E-选择素肽配体修饰的靶向脂质体制剂(脂质体F)的成品图。图2为原料DSPE-PEG-Mal(左侧峰)和产物DSPE-PEG-Mal-8CR(右侧峰)的MALDI-TOF对比图谱。图3为本专利技术实施例包载紫杉醇的E-选择素肽配体修饰的靶向脂质体(脂质体F)用动态光散射(DLS)测得的粒径分布图。图4为本专利技术实施例包载紫杉醇的E-选择素肽配体修饰的靶向脂质体(脂质体F)用动态光散射(DLS)测得的电势图。图5为各种脂质体的体外抗粘附实验结果。具体的实施方式为了理解本专利技术，下面结合实施例对本专利技术作进一步说明：下述实施例是说明性的，不是限定性的，不能以下述实施例来限定本专利技术的保护范围。本专利技术提供的E-选择素肽配体修饰的靶向脂质体载药系统，其组成包含:磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺-E-选择素肽配体偶联物、二棕榈酰磷脂酰胆碱、培化磷脂酰乙醇胺、肉豆蔻酰溶血卵磷脂、有机溶剂和蒸馏水。所述的E-选择素肽配体，在IELLQAR这一文献已报道的肽配体基础上在其氨基端或羧基端分别添加半胱氨酸作为连接桥，以及该肽的各种反序形式和D型氨基酸序列形式。如:CIELLQAR,IELLQARC,CRAQLLEI,RAQLLEIC,(D)-CIELLQAR,(D)-IELLQARC,(D)-CRAQLLEI,(D)-RAQLLEIC等。该类肽配体能够特异性地与血管内皮细胞上的E-选择素受体结合，并阻断E-选择素介导的肿瘤细胞的转移。(参考文件APeptideMimicofE-SelectinLigandInhibitsSialylLewisX-dependentLungColonizationofTumorCells，CancerResearch，2000，60(2)，450-456.第二篇：SialylLewisX-dependentlungcolonizationofB16melanomacellsthroughaselectin-likeendothelialreceptordistinctfromE-orP-selectin，CancerResearch，2002，62(62)，4194-4198.)其中，磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺-E-选择素肽配体偶联物的合成方法如下：①按照传统固相合成技术合成E-选择素肽配体，例如CIELLQAR。②多肽与DSPE-P本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种E‑选择素的肽配体修饰的靶向脂质体载药系统，其特征在于：含有磷脂酰乙醇胺‑聚乙二醇‑马来酰亚胺‑E‑选择素肽配体偶联物、二棕榈酰磷脂酰胆碱、培化磷脂酰乙醇胺、肉豆蔻酰溶血卵磷脂。

【技术特征摘要】
1.一种E-选择素的肽配体修饰的靶向脂质体载药系统，其特征在于：含有磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺-E-选择素肽配体偶联物、二棕榈酰磷脂酰胆碱、培化磷脂酰乙醇胺、肉豆蔻酰溶血卵磷脂。2.根据权利1所述的E-选择素的肽配体修饰的靶向脂质体载药系统，其特征在于：所述E-选择素肽配体在肽配体基础上在其氨基端或羧基端分别添加半胱氨酸作为连接桥。3.根据权利1或2所述的E-选择素的肽配体修饰的靶向脂质体载药系统，其特征在于：所述E-选择素肽配体包括额瓶体的各种反序形式和D型氨基酸序列形式，CIELLQAR,IELLQARC,CRAQLLEI,RAQLLEIC,(D)-CIELLQAR,(D)-IELLQARC,(D)-CRAQLLEI,(D)-RAQLLEIC。4.根据权利1所述的E-选择素的肽配体修饰的靶向脂质体载药系统，其特征在于：其中所述抗肿瘤药物为紫杉醇、阿霉素、多西紫杉醇、多柔比星或奥沙利铂。5.根据权利1所述的E-选择素的肽配体修饰的靶向脂质体载药系统，其特征在于：所述二棕榈酰磷脂酰胆碱、培化磷脂酰乙醇胺、肉豆蔻酰溶血卵磷脂、磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺-E-选择素肽配体偶联物...

【专利技术属性】
技术研发人员：郁彭，郭娜，赵龙，李凤燕，付颖，郝甜甜，杜春阳，王浩猛，李明媛，滕玉鸥，王栋，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：天津,12