一种具有肝肿瘤靶向作用的索拉菲尼纳米制剂制造技术

本发明专利技术公开一种具有肝肿瘤靶向作用的索拉菲尼纳米制剂，该制剂包括叶酸、索拉菲尼、白蛋白。其制备方法步骤：制备索拉菲尼白蛋白纳米粒、将叶酸活化制备叶酸活性酯；将纯化后的叶酸修饰负载索拉菲尼白蛋白纳米粒混悬液加入冻干保护剂冷冻干燥得叶酸修饰负载索拉菲尼白蛋白纳米粒冻干粉。本发明专利技术的优点在于：大大提高了索拉菲尼的生物利用度。具有明显的主动肝肿瘤靶向性，能将药物递送至靶部位从而降低药物的毒副作用，提高药物疗效。制备工艺非常简单，无特殊的仪器要求，药物负载量高。将叶酸修饰负载索拉菲尼白蛋白纳米粒冻干后稳定性好，更利于保存，便于工业化生产。

A sorafenib nanoparticle for targeting liver cancer

The invention discloses a sorafenib nano-preparation with liver tumor targeting effect, which comprises folic acid, sorafenib and albumin. The preparation method comprises preparation of sorafenib albumin nanoparticles, preparation of folic acid active esters by activation of folic acid, and freeze-drying of sorafenib albumin nanoparticles suspension modified with purified folic acid by adding freeze-drying protectant. The invention has the advantages of greatly improving the bioavailability of Sola Feeney. It has obvious active liver tumor targeting and can deliver drugs to the target site to reduce the toxicity and side effects of drugs and improve the efficacy of drugs. The preparation process is very simple, with no special instrument requirements and high drug loading. Folic acid modified sorafenib albumin nanoparticles have good stability after lyophilization, which is more conducive to preservation and industrial production.

【技术实现步骤摘要】
一种具有肝肿瘤靶向作用的索拉菲尼纳米制剂
本专利技术涉及药物制剂
，具体来说，涉及一种叶酸修饰负载索拉菲尼白蛋白纳米制剂及其制备方法。
技术介绍
索拉菲尼(sorafenib,SRF)是一种多靶点多激酶抑制剂，是临床上治疗晚期肝癌的一线药物，具有明显的抗肿瘤活性。其作用机制是一方面通过抑制受体酪氨酸激酶KIT和FLT-3以及Raf/MEK/ERK途径中丝氨酸/苏氨酸激酶，抑制肿瘤细胞的增殖；另一方面通过抑制上游酪氨酸激酶VEGFR和PDGFR和下游Raf/MEK/ERK途径中丝氨酸/苏氨酸激酶，明显抑制肿瘤血管生成；从而达到双重抗肿瘤作用。但其低口服生物利用度和不良反应大大限制了它的临床应用。因此，急需开发一种新型有效的靶向给药系统，增加肝肿瘤部位的药物浓度，降低药物对正常组织细胞的作用，从而提高药物的抗肿瘤疗效。纳米粒是现代药剂学研究的热点，药物被分散、包封、吸附于聚合物粒子上，通过囊壁沥滤、渗透和扩散释放出来，也可通过基质本身的溶蚀释药。具有靶向性、缓释性、改变药物的给药途径、增加药物的吸收和生物利用度、增加难溶性药物的溶解度、提高药物稳定性以及降低不良反应等优点。为了提高SRF的口服生物利用度并减少副作用，目前国内外已有研究人员对索拉菲尼纳米粒进行过研究。Wangetal.利用二氧化硅350及PH敏感的丙烯酸树脂s100制得负载SRF的纳米微粒，并比较了用二氧化硅350制备的纳米粒、用丙烯酸树脂s100制备的纳米粒以及混悬剂的口服生物利用度。结果表明与混悬剂相比，用二氧化硅350制备的纳米粒和用丙烯酸树脂s100制备的纳米粒生物利用度分别提高了50倍和13-33倍。Zhangetal.利用脂质包被的纳米钻系统递送SRF,结果表明与混悬剂相比生物利用度提高了7.64倍。据Guoetal.报道，与混悬剂相比，通过脂质和聚合物包被的纳米基质系统递送SRF，其口服生物利用度提高了7.7倍。自2005年美国FDA批准白蛋白结合紫杉醇纳米粒注射混悬液上市以后，白蛋白纳米粒作为靶向药物载体引起了临床关注。白蛋白是一个很有吸引力的大分子载体，因其属于内源性物质，具有可生物降解、无毒、体内降解产物无害、无免疫原性、易于纯化且易溶于水可制成注射剂等优点，已被公认为是一种制备纳米粒的理想载体材料。药物可以通过物理吸附或通过化学共价结合到白蛋白纳米粒表面。此外，白蛋白纳米粒表面的活性基团是进行化学修饰的有效连接部位，各种靶向配体可以与之进行偶联从而使纳米粒多功能化。叶酸(FA)可由受体介导的内吞途径进入细胞。现己证实在生理状态下,叶酸受体在肺、腺、肾、脉络丛、胎盘中呈低水平表达，而在肿瘤组织中高度表达,其表达水平常是正常组织的100～300倍。由于通过叶酸受体(FR)介导的内吞作用,能有效的将结合FR的叶酸、叶酸偶联物和叶酸拮抗剂摄入细胞，因此叶酸受体成了针对许多实体肿瘤的靶向给药系统的良好靶标。在先前的报道中，虽然有一些关于如何提高SRF口服生物利用度的方法，但由于所选载体都是外源性物质，生物相容性依然有所欠缺，难以应用于临床；此外，作为治疗肝部位肿瘤的药物，目前关于SRF主动靶向制剂的研究非常少，大多数研究都属于SRF被动靶向制剂研究范畴。尽管Lietal.和Zhangetal.等人开发出了两种能提高SRF的体外抗肿瘤活性的主动靶向制剂，但都是仅仅在细胞水平进行了验证，其体内效果如何并没有进一步研究。鉴于此，利用简单可行的方法制备叶酸修饰负载索拉菲尼白蛋白纳米粒具有重大的潜在市场价值，而且对于索拉菲尼的临床应用来说意义巨大。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种叶酸修饰负载索拉菲尼白蛋白纳米制剂，使其在治疗肝癌时具有良好的主动靶向性，降低毒副作用。本专利技术的技术方案为：一种具有肝肿瘤靶向作用的索拉菲尼纳米制剂，该制剂重量组份：叶酸1～10、索拉菲尼1～10、白蛋白50～200。一种具有肝肿瘤靶向作用的索拉菲尼纳米制剂，其制备方法步骤：(1)制备索拉菲尼白蛋白纳米粒(参考我们先前的研究：一种高口服生物利用度的索拉菲尼白蛋白纳米制剂及其制备方法、专利号：2017108789870)，包括如下质量百分数的组分：索拉菲尼0.03～0.07％，载体材料0.5～2％，有机溶剂0.025～0.05％，交联剂0.005～0.02％，余量为生理盐水；用0.2mol·L-1NaOH调节索拉菲尼白蛋白纳米粒pH至8～12；(2)利用N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDC)做催化剂将叶酸(FA)活化制备叶酸活性酯,三者质量比为FA:NHS:EDC＝10:5～10:5～10；(3)精密称取适量叶酸活性酯溶于1mL碳酸钠/碳酸氢钠缓冲溶液，缓慢滴加至索拉菲尼白蛋白纳米粒中，常温避光搅拌反应一段时间后，即得叶酸修饰负载索拉菲尼白蛋白纳米粒混悬液，将所得叶酸修饰负载索拉菲尼白蛋白纳米粒混悬液置于处理好的分子截留量为3500Da的透析袋中，以磷酸盐缓冲液(PBS,pH＝7.4)为透析液透析60小时，每三小时更换一次透析液，以除去未偶联的过量叶酸活性酯。将纯化后的叶酸修饰负载索拉菲尼白蛋白纳米粒混悬液加入冻干保护剂冷冻干燥得叶酸修饰负载索拉菲尼白蛋白纳米粒冻干粉。步骤(1)中索拉菲尼白蛋白纳米粒用0.2mol·L-1NaOH调节其pH＝10。步骤(2)中所述叶酸活性酯的制备是将叶酸溶于二甲亚砜(DMSO)中，加入N-羟基琥珀酰亚胺和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐做催化剂(质量比为叶酸:N-羟基琥珀酰亚胺:1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐＝10:9:5)，常温下避光搅拌反应一段时间后,过0.45μm有机滤膜除去不溶性杂质，滤液加入两倍体积的丙酮乙醚混合物(V:V＝30:70)充分搅拌以沉淀FA-NHS，过滤，得黄色沉淀物，沉淀用无水乙醚洗涤三次，真空干燥得浅黄色叶酸活性酯。步骤(3)中所述叶酸活性酯的质量为1-10mg。步骤(3)中所述避光搅拌反应时间为2～24h。步骤(3)中所制备的叶酸修饰负载索拉菲尼白蛋白纳米粒平均粒径为158.00nm、包封率为77.25％、载药量为7.72％。步骤(3)中所制备的叶酸修饰负载索拉菲尼白蛋白纳米粒的叶酸偶联量为62.46±1.98μg叶酸/mg牛血清白蛋白。本专利技术的优点在于：本专利技术所制备的叶酸修饰负载索拉菲尼白蛋白纳米粒大大提高了索拉菲尼的生物利用度。本专利技术所制备的叶酸修饰负载索拉菲尼白蛋白纳米粒具有明显的主动肝肿瘤靶向性，能将药物递送至靶部位从而降低药物的毒副作用，提高药物疗效。制备工艺非常简单，无特殊的仪器要求，药物负载量高。将叶酸修饰负载索拉菲尼白蛋白纳米粒冻干后稳定性好，更利于保存，便于工业化生产。附图说明附图用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本专利技术的实施例一起用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的限制。在附图中：图1是叶酸修饰负载索拉菲尼白蛋白纳米粒的粒径分布图；图2是叶酸修饰负载索拉菲尼白蛋白纳米粒的透射电镜图；图3是叶酸修饰负载索拉菲尼白蛋白纳米粒(FA-SRF-BSANPs)及同浓度索拉菲尼混悬剂(Suspensions)在大鼠体内的药时曲线；图4是腹腔给予索拉菲尼溶液剂(SRFsolu本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种具有肝肿瘤靶向作用的索拉菲尼纳米制剂，其特征在于：该制剂重量组份：叶酸1～10、索拉菲尼1～10、白蛋白50～200。

【技术特征摘要】
1.一种具有肝肿瘤靶向作用的索拉菲尼纳米制剂，其特征在于：该制剂重量组份：叶酸1～10、索拉菲尼1～10、白蛋白50～200。2.根据权利要求1所述具有肝肿瘤靶向作用的索拉菲尼纳米制剂，其制备方法的步骤：（1）制备索拉菲尼白蛋白纳米粒，包括如下质量百分数的组分：索拉菲尼0.03～0.07％，载体材料0.5～2％，有机溶剂0.025～0.05％，交联剂0.005～0.02％，余量为生理盐水；用0.2mol.L-1NaOH调节索拉菲尼白蛋白纳米粒pH至8～12；（2）利用N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDC)做催化剂将叶酸(FA)活化制备叶酸活性酯,三者质量比为FA:NHS:EDC=10:5～10:5～10；（3）精密称取适量叶酸活性酯溶于1mL碳酸钠/碳酸氢钠缓冲溶液，缓慢滴加至索拉菲尼白蛋白纳米粒中，常温避光搅拌反应一段时间后，即得叶酸修饰负载索拉菲尼白蛋白纳米粒混悬液，将所得叶酸修饰负载索拉菲尼白蛋白纳米粒混悬液置于处理好的分子截留量为3500Da的透析袋中，以pH7.4的磷酸盐缓冲液为透析液透析60小时，每三小时更换一次透析液，以除去未偶联的过量叶酸活性酯。将纯化后的叶酸修饰负载索拉菲尼白蛋白纳米粒混悬液加入冻干保护剂冷冻干燥得叶酸修饰负载索拉菲尼白蛋白纳米粒冻干粉。3.根据权利要求2所述具有肝肿瘤靶向作用的索拉菲尼纳米制剂，其特征在于：步骤（1）中索...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢宝刚，孙水林，王海鹏，张守华，杨文龙，袁荣发，
申请(专利权)人：南昌大学第二附属医院，
类型：发明
国别省市：江西,36