一种用于协同检测设备的硫氧还蛋白还原酶活性检测方法技术

本发明专利技术公开了一种用于协同检测设备的硫氧还蛋白还原酶活性检测方法，属于酶活性检测领域。包括：配液，配置工作液、抑制剂溶液和混合试剂；加样本，将50uL‑70uL的工作液加入对照组反应杯；将50uL‑70uL抑制剂溶液加入实验组反应杯；向对照组反应杯和实验组反应杯分别加入10uL‑30uL的样本；温育，将对照组反应杯和实验组反应杯放置在预定温度的避光环境下孵育第一预定时间；其中，预定温度为30℃‑40℃；测定，分别向对照组反应杯和实验组反应杯加入100uL‑150uL的混合试剂后，在预定波长时测定吸光度值第二预定时间。本发明专利技术的检测方法能够适用于硫氧还蛋白还原酶活性的自动化检测。

【技术实现步骤摘要】
一种用于协同检测设备的硫氧还蛋白还原酶活性检测方法
本专利技术属于酶活性检测领域，具体涉及一种用于协同检测设备的硫氧还蛋白还原酶活性检测方法。
技术介绍
硫氧还蛋白还原酶(TR)测定项目为国内外首创的临床肿瘤检测项目。该项目可以填补异常增生类疾病诊断缺乏临床检验方法的空白。TR检测设备能够应用于体检人群的肿瘤早期筛查，住院人群的肿瘤疗效监测，复发预警及健康管理等，具有极大的市场需求和发展潜力。现有技术《专利ZL201080049877.X：用于测定样品中硫氧还蛋白还原酶活性的方法和试剂盒及应用》是基于人工分步逐步操作实现，如：手工操作酶标仪、手工加样、手工操作避光、手工放置摇床实现摇匀，手工加样等；其用样本的各种条件也是针对手工操作过程和用量设计。由于人工手工操作包括了人工加样误差大；各种操作非连贯，容易产生中间误差；操作时间长不利于大规模临床检测应用等多种需要改善的问题，有必要研制一种用于自动生化仪的人血硫氧还蛋白还原酶活性检测方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种能够节省检测时间和检测步骤的一种用于协同检测设备的硫氧还蛋白还原酶活性检测方法。根据本专利技术实施例的一个方面，提供了一种用于协同检测设备的硫氧还蛋白还原酶活性检测方法，包括：配液，配置工作液、抑制剂溶液和混合试剂；加样本，将50uL-70uL的工作液加入对照组反应杯；将50uL-70uL抑制剂溶液加入实验组反应杯；向对照组反应杯和实验组反应杯分别加入10uL-30uL的样本；本加样量是根据自动化的协同检测设备最佳工作所需要体积量设计。样本温育，在避光环境下，将对照组反应杯和实验组反应杯放置在30℃-40℃温度下孵育第一预定时间；测定，分别向对照组反应杯和实验组反应杯加入100uL-150uL的混合试剂；在预定波长下，测定第二预定时间段内的吸光度值。进一步，配置工作液的步骤包括：按照1:1:2:4的比例取三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、吗啉基丙磺酸、磷酸氢二钠柠檬酸缓冲体系和磷酸氢二钠磷酸二氢钾缓冲溶液；将自动化的协同检测设备三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、吗啉基丙磺酸、磷酸氢二钠柠檬酸缓冲体系和磷酸氢二钠磷酸二氢钾缓冲溶液混合均匀。进一步，自动化的协同检测设备三羟甲基氨基甲烷盐酸盐的PH为5.5-7.2，浓度为0.025-0.125mol/L；自动化的协同检测设备吗啉基丙磺酸的浓度为0.25mol/L；自动化的协同检测设备磷酸氢二钠柠檬酸缓冲体系的PH为2.2-8.0，浓度为0.2mol/L；自动化的协同检测设备磷酸氢二钠磷酸二氢钾缓冲溶液的PH为4.9-8.2，浓度为1-15mol/L。进一步，自动化的协同检测设备配置抑制剂溶液的步骤包括：以1:1-1:5的比例混合自动化的协同检测设备工作液和抑制剂，形成自动化的协同检测设备抑制剂溶液；将自动化的协同检测设备抑制剂溶液混合均匀，自动化的协同检测设备抑制剂为硫氧还蛋白还原酶抑制剂化合物。进一步，自动化的协同检测设备配置混合试剂的步骤包括：以1:4-1:8的比例混合自动化的协同检测设备试剂A和自动化的协同检测设备试剂B，形成自动化的协同检测设备混合试剂；将自动化的协同检测设备混合试剂混合均匀；自动化的协同检测设备A试剂为5,5-二硫代双(2-硝基苯甲酸)或取代6,6'-二硝基-3,3'-二硫代苯甲酸；自动化的协同检测设备B试剂为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸。进一步，自动化的协同检测设备预定温度为30-40℃。进一步，自动化的协同检测设备第一预定时间为8-20分钟。进一步，自动化的协同检测设备第一预定时间为10分钟。进一步，自动化的协同检测设备预定波长为405nm-450nm。进一步，自动化的协同检测设备第二预定时间为20-30个周期。本专利技术提供的一种人外周血硫氧还蛋白还原酶活性的检测方法，通过将试剂A和试剂B在自动化的协同检测设备上自动取样混合成混合试剂，经协同检测设备自动加入样本中进行混合、搅拌的操作，替代了分别添加试剂A和试剂B做手工重复混合、搅拌的工作，提高了工作效率。该检测方法通过对适用于上述介绍的一种硫氧还蛋白还原酶活性的协同检测设备的样本/试剂体积的设定，能够符合运行的工作液体选择的方法要求，本专利技术的方法在上述介绍的一种硫氧还蛋白还原酶活性的协同检测设备上使用时，包括加样操作方法、避光操作要求方法、试剂混合的操作要求方法等针对驱动系统的智能指令方法规定。其中的智能指令如协同检测设备运行中每一周期组中周期数以及每一周期时间的规定，针对运行过程要求等都是和实现人外周血TR功能检测方法衔接的检测方法学。本专利技术的方法是适用于上述介绍的一种硫氧还蛋白还原酶活性的协同检测设备实现TR酶学检测功能要求的方法，用于上述介绍的一种硫氧还蛋白还原酶活性的协同检测设备的硫氧还蛋白还原酶活性检测方法。附图说明图1是本专利技术的一种用于协同检测设备的硫氧还蛋白还原酶活性检测方法的流程示意图；图2是本专利技术的一种用于协同检测设备的硫氧还蛋白还原酶活性检测方法的结构示意图；图3是本专利技术的本专利技术实施例的一种用于协同检测设备的硫氧还蛋白还原酶活性检测方法的流程示意图。图4是本专利技术的本专利技术实施例的一种用于协同检测设备的硫氧还蛋白还原酶活性检测方法的又一种流程示意图1。图5是本专利技术一种用于协同检测设备的硫氧还蛋白还原酶活性检测方法步骤S1的流程图。图6是本专利技术一种用于协同检测设备的硫氧还蛋白还原酶活性检测方法步骤S2的流程图。图7是本专利技术一种用于协同检测设备的硫氧还蛋白还原酶活性检测方法步骤S3的流程图。具体实施方式为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚明了，下面结合具体实施方式，对本专利技术进一步详细说明。应该理解，这些描述只是示例性的，而并非要限制本专利技术的范围。此外，在以下说明中，省略了对公知结构和技术的描述，以避免不必要地混淆本专利技术的概念。现有技术中“TR活性检测试剂盒”所采用的检测方法(以下简称初代检测方法)有三个的技术局限，因而无法适用于自动化的协同检测设备：(1)耗时较长，检测效率较低。初代的检测方法允许同时完成8-12个样本的检测，完成时间约为1.5-2个小时。而硫氧还蛋白酶活性的协同检测设备要求每40-50个样本的检测要在1.5个小时内完成，否则临床样本会因为在仪器中放置时间过长而失效；因此初代检测方法在面对大规模，高通量的TR临床自动化检测中无法适用；(2)检测步骤繁多。初代检测方法包括7个步骤和动作，这对于检测人员的人工检测并不困难，但对于自动化的协同检测设备来说过于繁琐，因此会显著增加设备的动作时间，降低检测效率；(3)初代检测方法在操作过程中需要两名检测人员相互配合操作，而自动化的协同检测设备的设计目的是希望单一检测人员即可完整操作仪器，因此两者的需求也并不相符。在详述本专利技术实施方案前，需说明的是，本专利技术中的试剂A为用于检测硫氧还蛋白还原酶活性的试剂，试剂B为用于检测硫氧还蛋白还原酶活性的试剂，工作液通常为缓冲液，主要用于检测硫氧还蛋白还原酶活性的缓冲液。本专利技术中的试剂A、试剂B均为已经通过了国家食品药品监督管理局的专家认证和审核获得了医疗器械注册证(证号为鄂食药监械(准)字2013第2401815号及国食药监械(准)字2014第3400264)的《硫氧还蛋白还原酶(TR)活性检测试剂盒》中的试剂A和试剂B，本本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于协同检测设备的硫氧还蛋白还原酶活性检测方法，其特征在于，包括：配液，配置工作液、抑制剂溶液和混合试剂；加样本，将50uL‑70uL的所述工作液加入对照组反应杯；将50uL‑70uL的所述抑制剂溶液加入实验组反应杯；向对照组反应杯和实验组反应杯分别加入10uL‑30uL的样本；温育，在避光环境下，将所述对照组反应杯和所述实验组反应杯放置在30℃‑40℃温度下孵育第一预定时间；测定，分别向所述对照组反应杯和所述实验组反应杯加入100uL‑150uL的混合试剂；在预定波长下，测定第二预定时间段内的吸光度值。

【技术特征摘要】
1.一种用于协同检测设备的硫氧还蛋白还原酶活性检测方法，其特征在于，包括：配液，配置工作液、抑制剂溶液和混合试剂；加样本，将50uL-70uL的所述工作液加入对照组反应杯；将50uL-70uL的所述抑制剂溶液加入实验组反应杯；向对照组反应杯和实验组反应杯分别加入10uL-30uL的样本；温育，在避光环境下，将所述对照组反应杯和所述实验组反应杯放置在30℃-40℃温度下孵育第一预定时间；测定，分别向所述对照组反应杯和所述实验组反应杯加入100uL-150uL的混合试剂；在预定波长下，测定第二预定时间段内的吸光度值。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述配置工作液的步骤包括：按照1:1:2:4的比例取三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、吗啉基丙磺酸、磷酸氢二钠柠檬酸缓冲体系和磷酸氢二钠磷酸二氢钾缓冲溶液；将所述三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、吗啉基丙磺酸、磷酸氢二钠柠檬酸缓冲体系和磷酸氢二钠磷酸二氢钾缓冲溶液混合均匀。3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述三羟甲基氨基甲烷盐酸盐的PH为5.5-7.2，浓度为0.025-0.125mol/L；所述吗啉基丙磺酸的浓度为0.25mol/L；所述磷酸氢二钠柠檬酸缓冲体系的PH为2.2...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹汉维，
申请(专利权)人：凯熙医药武汉股份有限公司，武汉尚宜康健科技有限公司，南京凯熙医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42