硫氧还蛋白还原酶重组蛋白及其编码基因制造技术

本发明专利技术涉及一种硫氧还蛋白还原酶重组蛋白，是通过密码子优化的方式得到硫氧还蛋白还原酶编码基因，如SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.4所示，并将其在大肠杆菌和哺乳细胞中进行表达，得到重组蛋白。本发明专利技术的硫氧还蛋白还原酶重组蛋白序列完整，经验证其可与现有的TrxR1抗体特异性结合，方法简单，应用广泛。

【技术实现步骤摘要】
硫氧还蛋白还原酶重组蛋白及其编码基因
本专利技术属于基因工程领域，具体涉及一种硫氧还蛋白还原酶重组蛋白及其编码基因。
技术介绍
硫氧还蛋白系统包括硫氧还蛋白还原酶(Thioredoxinreductase，TrxR)、硫氧还蛋白(thioredoxin，Trx)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamideadeninedinucleotidephosphate，NADPH)，是一个广泛分布的NADPH依赖性二硫化物还原酶系统。硫氧还蛋白还原酶是一种NADPH依赖的包含FAD结构域的二聚体硒酶，属于吡啶核苷酸-二硫化物氧化还原酶家族成员，包含保守的CysValAsnValGlyCys氧化还原位点，催化依赖硫氧还蛋白NADPH还原反应。硫氧还蛋白还原酶活性检测可评价人体异常增生活性水平，硫氧还蛋白还原酶可实时检测人体内的异常增生活跃程度，由于不可逆恶性增生是肿瘤的重要特征，在癌症的早期阶段该值就会明显升高，因此硫氧还蛋白还原酶是一种特异性、敏感性、广谱性都较高的肿瘤标志物。因此，体外制备硫氧还蛋白还原酶对于相关疾病的诊断和治疗研本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种硫氧还蛋白还原酶重组蛋白，其特征在于，所述硫氧还蛋白还原酶重组蛋白在氨基酸序列C端添加6个His(HHHHHH)片段。/n

【技术特征摘要】
1.一种硫氧还蛋白还原酶重组蛋白，其特征在于，所述硫氧还蛋白还原酶重组蛋白在氨基酸序列C端添加6个His(HHHHHH)片段。


2.根据权利要求1所述的硫氧还蛋白还原酶重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.1或SEQIDNO.3所示。


3.一种硫氧还蛋白还原酶重组蛋白的编码基因，其核苷酸序列如SEQIDNO:2或SEQIDNO.4所示。


4.根据权利要求3所述的硫氧还蛋白还原酶重组蛋白的编码基因，是对硫氧还蛋白还原酶的氨基酸序列密码子优化后，通过基因合成的方式得到编码基因。


5.重组载体，含有权利要求3或4所述硫氧还蛋白还原酶重组蛋白的编码基因；
优选地，是将所述编码基因亚克隆到载体得到；
优选地，所述载体选自表达载体或者克隆载体；例如，所述表达载体为pET28b；例如，所述克隆载体为pUC19。


6.一种硫氧还蛋白还原酶重组蛋白编码基因的表达方法，包括如下步骤：
(1)将硫氧还蛋白还原酶氨基酸序列密码子优化得到编码基因，利用基因合成的方式得到编码基因的DNA片段；
(2)构建重组载体；
PCR扩增步骤(1)得到的DNA片段，和载体用限制性内切酶进行双酶切，用DNA连接酶连接纯化的酶切产物，得到重组载体；优选地，所述载体选自克隆载体或表达载体；
(3)将重组载体转化到感受态细胞，培养筛选，测序验证；
(4)...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹汉维，
申请(专利权)人：凯熙医药武汉股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42