用于构建测序文库的接头核酸分子制造技术

本发明专利技术提出了一种用于构建测序文库的接头核酸分子。该核酸分子包括第一核酸链，所述第一核酸链包含PCR反应断点，所述PCR反应断点包括选自下列的至少之一：(1)核酸消化酶特异性识别位点；以及(2)DNA聚合酶不识别位点。本申请所述的接头核酸分子可以应用于低起始量样品的建库，适应更宽的mRNA含量的变化。利用本申请所述的接头核酸分子进行构建测序文库，能够有效清除测序文库中的接头互连、自连产物，降低接头互连、自连产物在测序数据的比例。

Joint nucleic acid molecules for constructing sequencing Libraries

The invention provides a joint nucleic acid molecule for constructing a sequencing library. The nucleic acid molecule comprises a first nucleic acid chain comprising a PCR reaction breakpoint selected from at least one of the following: (1) a nucleic acid digestive enzyme specific recognition site; and (2) a DNA polymerase nonrecognition site. The adaptor nucleic acid molecule described in the present application can be applied to the construction of a library of samples with low initial amount to adapt to a wider variation of mRNA content. Sequencing libraries are constructed by using the junction nucleic acid molecules described in this application, which can effectively eliminate the junction interconnection and self-connecting products in the sequence library, and reduce the proportion of the junction interconnection and self-connecting products in the sequence data.

【技术实现步骤摘要】
用于构建测序文库的接头核酸分子
本专利技术涉及生物测序领域，具体地，本专利技术涉及用于构建测序文库的接头核酸分子，更具体地，本专利技术涉及构建测序文库的接头核酸分子、构建测序文库的方法、测序文库、核酸样本测序方法、构建测序文库的设备以及用于对核酸样本进行测序的系统。
技术介绍
Illumina公司的TruseqRNAlibrarykit做RNA测序具有很好灵敏度，能适应很多物种的RNA建库，但是由于不同物种、生理、发育、组织、分化等条件下，其总RNA的mRNA含量会不一样，实践中当遇到某些样品的mRNA含量很低时，此kit的建库产物就会出现一些奇怪的产物。现阶段的RNA检测技术又难以特异性地对mRNA含量进行定量，特别是对于总RNA量本来就很少的样品来说，还面临检测灵敏度不够的问题。因此，如何提高建库产物的质量以及如何提高测序的灵敏度是科学工作者拭待解决的关键问题。
技术实现思路
本申请是基于专利技术人对以下问题和事实的发现而提出的。为调查尖峰形成原因，专利技术人在实验中模拟不同的mRNA含量，分别用200ng、20ng的UHRR(RNA标准品)起始mRNA量进行建库。专利技术人发现，2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于构建测序文库的接头核酸分子，其特征在于，包括：第一核酸链，所述第一核酸链包含PCR反应断点，所述PCR反应断点包括选自下列的至少之一：(1)核酸消化酶特异性识别位点；以及(2)DNA聚合酶不识别位点。

【技术特征摘要】
1.一种用于构建测序文库的接头核酸分子，其特征在于，包括：第一核酸链，所述第一核酸链包含PCR反应断点，所述PCR反应断点包括选自下列的至少之一：(1)核酸消化酶特异性识别位点；以及(2)DNA聚合酶不识别位点。2.根据权利要求1所述的核酸分子，其特征在于，所述的核酸消化酶包括选自下列的至少之一：UNG酶以及USER，优选地，所述核酸消化酶为USER酶。3.根据权利要求1所述的核酸分子，其特征在于，所述的核酸消化酶特异性识别位点位于PCR引物互补区域毗邻的第一核酸链的3’区域。4.根据权利要求1所述的核酸分子，其特征在于，所述的DNA聚合酶不识别位点位于PCR引物互补区域或者PCR引物互补区域毗邻的第一核酸链的3’区域。5.根据权利要求1所述的核酸分子，其特征在于，DNA聚合酶为PfuDNA聚合酶或deepventDNA聚合酶，所述的DNA聚合酶不识别位点包括选自下列的至少之一：至少一个U碱基，至少一个I碱基，以及至少一个甲基化修饰碱基。6.根据权利要求1所述的核酸分子，其特征在于，进一步包含：第二核酸链，所述第一核酸链与所述第二核酸链的至少一部分形成双链区，并且所述双链区的一端构成所述接头核酸分子的连接反应末端；所述的第二核酸链进一步包含PCR反应断点，第二核酸链包含的PCR反应断点包括选自下列的至少之一：(1)核酸消化酶特异性识别位点；以及(2)DNA聚合酶不识别位点。7.根据权利要求6所述的核酸分子，其特征在于，所述第二核酸链包含的PCR反应断点为核酸消化酶特异性识别位点，核酸消化酶包括选自下列的至少之一：UNG酶以及USER，优选地，所述核酸消化酶为USER酶；优选的，所述第二核酸链包含的PCR反应断点位于所述第二核酸链的5’端。8.根据权利要求6所述的核酸分子，其特征在于，所述PCR反应断点为UU；优先地，所述第一核酸链具有SEQIDNO：1所示的核苷酸序列；所述第二核酸链具有SEQIDNO：2所示的核苷酸序列。9.一种构建测序文库的方法，其特征在于，包括：将待测序的DNA片段与接头连接，以便获得连接产物，所述接头为权利要求1～8中任一项所述的核酸分子；以及对所述连接产物进行扩增处理，以便获得扩增产物，其中，所述扩增处理中，基于所述PCR反应断点，去除接头自连或互连产物。10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述PCR反应断点包括核酸消化酶特异性识别位点，所述扩增处理进一步包括：(1)利用所述核酸消化酶对所述连接产物进行消化处理，以便获得消化产物；(2)从所述消化产物中去除长度不大于预定阈值的核酸片段；以及(3)利用DNA聚合酶对经过步骤(2)处理的所述消化产物进行PCR扩增反应，以便获得所述扩增产物，任选地，所述核酸消化酶为USER酶和/或UNG，任选地，所述从所述消化产物中去除长度不大于预定阈值的核酸片段是利用XP磁珠纯化实现的。11.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述PCR反应断点包括DNA聚合酶不识别位点，所述PCR反应进一步包括：(a)利用DNA聚合酶对所述连接产物进行PCR扩增反应，以便获得PCR扩增粗产物；(b)从所述PCR扩增粗产物中去除长度不大于预定阈值的片段，以便获得所述扩增产物，任选地，所述从所述PCR扩增粗产物中去除长度不大于预定阈值的片段是利用XP磁珠纯化实现的。12.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述待测序的DNA片段是通过如下方式获得的：1)将待测样品的RNA进行分离、纯化和打断处理；2)对经过步骤1)处理的RNA进行反转录，以便获得cDNA，所述cDNA为所述待测序的DNA片段，任选地，所述反转录是通过如下方式进行的：(A)以经过步骤1)处理的RNA为模板，反转录合成DNA一链，以便获得RNA/DNA杂交链；(B)利用RNaseH对RNA/DNA杂交链中的RNA链进行消化处理；(C)以步骤(B)消化处理后的残余RNA链...

【专利技术属性】
技术研发人员：张东，
申请(专利权)人：深圳华大基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44