一种雷替曲塞pH敏感脂质体及制备方法技术

本发明专利技术公开了一种雷替曲塞pH敏感脂质体及制备方法。本发明专利技术所制备的雷替曲塞pH敏感脂质体初次所得包封率在45.75％～49.95％之间，最终所得包封率可达89.45％～95.23％；质地为白色泛蓝色乳光的混悬液体，且粒径均一分散性良好；Zeta电位在‑46.6mv～‑42.5mv之间，稳定性优异；粒径在217nm～278nm，适合用作给药的载体；在体外释放实验中，所得脂质体在肿瘤组织的酸性环境(pH5.0～6.5)释放快速，在正常组织液环境(pH7.4)中释放缓慢，pH敏感作用明显；细胞毒性实验表明，所得脂质体抗结肠癌细胞效果优异，能够有效地靶向到肿瘤组织；并且保证空白脂质体无毒性，毒副作用少。

A sensitive liposome of pH and preparation method

The invention discloses a pH sensitive liposome and its preparation method. The pH-sensitive liposomes prepared by the invention have the entrapment efficiency between 45.75% and 49.95% for the first time, and the final entrapment efficiency can reach 89.45%-95.23%; the suspension liquid with white pan-blue emulsion texture and good particle size uniformity and dispersion; the Zeta potential is between 46.6 MV and 42.5 mv, and the stability is excellent; and the particle size is excellent. In vitro, the liposomes were released rapidly in acidic environment (pH 5.0-6.5), slowly in normal tissue fluid environment (pH 7.4), and showed obvious pH sensitivity. Cytotoxicity test showed that the liposomes had excellent antitumor effect on colon cancer cells. It is effective in targeting tumor tissues, and ensures that the blank liposomes are nontoxic and less toxic and side effects.

【技术实现步骤摘要】
一种雷替曲塞pH敏感脂质体及制备方法
本专利技术涉及脂质体领域和肿瘤组织内pH响应的被动靶向领域，具体涉及一种雷替曲塞pH敏感脂质体及制备方法。
技术介绍
雷替曲塞是一种喹唑啉叶酸盐类似物，通过抑制胸腺嘧啶合成酶(TS)而发挥抗肿瘤作用，其抗肿瘤作用不仅来源于药物本身，药物进入机体后，48h内只有40％～50％以原型药物被排泄，一部分药物通过还原型叶酸甲氨蝶呤细胞膜载体被细胞主动摄取，被叶酸聚谷氨酸合成酶代谢成一系列多聚谷氨酸类化合物，此类化合物对胸苷酸合酶有着更强的抑制作用，且能长时间滞留在细胞内，发挥长期毒性。与5-FU相比，雷替曲塞具有更强的抗人结肠癌肿瘤细胞的活性，现今已有16个国家将其作为结直肠癌一线用药。雷替曲塞的半衰期长达198h，因此在使用过程中有较长的化疗间歇期，每3周用药1次，目前国内外的上市制剂为静脉注射用冻干粉针。虽然其静脉注射用冻干粉针的临床应用越来越广泛，但也具有明显局限性。由于不能有效地区分正常细胞和快速增殖的肿瘤细胞，使其到达肿瘤组织的药量较少、不良反应较大，从雷替曲塞治疗晚期结直肠癌的临床试验中可以发现，单药雷替曲塞一线或二线治疗的主要不良反应为白细胞减少、中性粒细胞减少、恶心、呕吐、乏力、厌食以及谷丙转氨酶升高，发生率分别为9％～13.8％、23％、20％、6.9％～9％、14％和7％。因此，寻找降低毒副作用提高疗效的方法成为了亟待解决的问题。由于较高的代谢速率，肿瘤微环境和炎症组织的pH值为5.0～6.5，细胞内不同细胞器的pH值亦不同，如核内体(Endosome)的pH值为5.5、溶酶体(Lysosome)的pH值为5.0，这些不同pH值的微环境为pH响应高分子纳米粒子的设计提供了思路。pH敏感型脂质体是能够有效的在特定时间和特定部位释放所包封药物的一种新型药物载体，因其具有良好的生物相容性、靶向性、缓释性、降低药物的毒性和提高药物的稳定性等作用而被广泛关注。虽然pH敏感脂质体已有一定报道，但目前本领域并没有将雷替曲塞制备为pH敏感脂质体的研究，采用雷替曲塞制备pH敏感脂质体时，为了保证其能够有效地靶向到肿瘤组织、降低药物的毒副反应，更好地发挥其抗肿瘤作用，必须要保证雷替曲塞脂质体具有良好的包封率、pH敏感性及稳定性，但满足这三者是极其困难的。中国专利CN2011102286230公布了一种<抗肿瘤pH敏感脂质体、其冻干粉针制剂及它们的制备方法>，虽然其制备出的脂质体最终所得包封率在60％～90％之间，但其包封率变化幅度大，稳定性差，导致其难以工业化生产使用。因此如何提供一种包封率高、敏感性强、稳定性好、品质优异的雷替曲塞脂质体是本领域亟待解决的问题。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术提供了一种包封率高、敏感性强、稳定性好的雷替曲塞脂质体。本专利技术公开了一种雷替曲塞pH敏感脂质体，所述雷替曲塞pH敏感脂质体，按重量份数计，包括以下组分：雷替曲塞5～15份、磷脂酰乙醇胺35～105份、胆固醇琥珀酸酯15～45份。为了提供一种包封率高、敏感性强、稳定性好的雷替曲塞pH敏感脂质体，专利技术人尝试了多种膜材进行制备，根据曾慧琳,王姗姗,符旭东.pH敏感脂质体在药物传递系统中的应用[J].医药导报,2014,33(03):348-351.等的研究可知，磷脂类、油酸、胆固醇等均可以运用于脂质体的研究中，然而，并不是所有的膜材都能取得优异的效果，在专利技术人的多次研究中发现，制备雷替曲塞的膜材中，只有以磷脂酰乙醇胺与胆固醇琥珀酸酯作为制备材料才能保证脂质体初次所得包封率在45.75％～49.95％之间，最终所得包封率可达89.45％～95.23％的效果，根据对比例1可知，若将膜材替换为大豆磷脂、胆固醇，制备出的脂质体包封率初次所得仅为21.52％，分离后的脂质率也仅为77.78％，并且后期测验所得Zeta电位低，稳定性差。作为优选的实施方式，所述雷替曲塞pH敏感脂质体，按重量份数计，包括以下组分：雷替曲塞5份、磷脂酰乙醇胺15份、胆固醇琥珀酸酯35或40份，在此组分下，本专利技术制得的脂质体在包封率、稳定性、粒径上均具有更为优异的效果。本专利技术还公开了一种制备雷替曲塞pH敏感脂质体的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：1)按比例称取磷脂酰乙醇胺及胆固醇琥珀酸酯，溶于有机溶剂，混合均匀；2)将步骤1)所得混合液置于旋转蒸发仪，在40℃～55℃下减压旋蒸去除有机溶剂，使其在瓶壁上形成一层均匀的脂质薄膜，然后加入pH为8～9的雷替曲塞的磷酸二氢钠缓冲液，在一定温度下水化一定时间，过滤、冻融3次即制得雷替曲塞pH敏感脂质体混悬液；3)将步骤2)所得的混悬液加入透析袋中，于一定pH的磷酸二氢钠缓冲液透析中过夜，即制得雷替曲塞pH敏感脂质体。制备方法的选择对脂质体品质也起着决定性的影响，在卢杉杉.多西他赛pH敏感脂质体的研究[D].山东大学,2014.研究中发现，采用薄膜水化法制得的多西他赛pH敏感脂质体包封率最高，比冻融法制得包封率高出30％；由于雷替曲塞也是一种抗癌药，所以专利技术人在最初制备雷替曲塞pH敏感脂质体的过程中，一直尝试利用薄膜水化法进行制备，然而所得的技术效果如对比例3所示，其包封率难以达到专利技术人的预期，专利技术人又尝试了逆向蒸发法进行制备，如对比例2所示，其初次测得的包封率仅达11.81％，最终令专利技术人没有想到的是，只有通过本专利技术所提供的冻融法所得的雷替曲塞pH敏感脂质体的包封率才能保持初次所得包封率在45.75％～49.95％之间，最终所得包封率可达89.45％～95.23％的效果，但根据对比例4与对比例5可知，如果对本专利技术所提供的冻融法的pH条件及减压旋蒸温度进行改变也难以取得本专利技术所取得的包封率，甚至当pH为7.5时会出现无法制备出脂质体的情况。作为优选的实施方式，所述步骤1)中有机溶剂为氯仿。作为优选的实施方式，所述步骤2)中水化温度为40℃，水化时间为1小时。作为优选的实施方式，所述步骤2)中过滤方法为采用0.22μm微孔过滤。作为优选的实施方式，所述步骤3)中透析袋的截留分子量为1000Da。作为优选的实施方式，所述步骤3)中磷酸二氢钠缓冲液的pH为7.4～9.0。有益效果1.本专利技术所制备的雷替曲塞pH敏感脂质体具有优异的包封率，在本专利技术提供的材料与比例下所制得的脂质体初次所得包封率在45.75％～49.95％之间，最终所得包封率可达89.45％～95.23％。2.本专利技术所制备的雷替曲塞pH敏感脂质体具有优异的质地，为白色泛蓝色乳光的混悬液体，且粒径均一分散性良好；电势在-46.6mv～-42.5mv之间，稳定性优异；粒径在217nm～278nm，粒径较小且分布集中，适合用作给药的载体。3.本专利技术制得的雷替曲塞pH敏感脂质体具有优异的敏感性，在体外释放实验中，本专利技术制得的pH敏感脂质体在肿瘤组织的酸性环境即pH5.0～6.5的释放介质中，释放较快，在正常组织液环境即pH7.4的释放介质中，释放缓慢，pH敏感作用明显。4.本专利技术制得的雷替曲塞pH敏感脂质体具有优异的抗癌性，抗结肠癌细胞效果明显，能够有效地靶向到肿瘤组织；并且空白脂质体无毒性，减少了其副作用。附图说明图1实施例2制备的雷替曲塞pH敏感脂质体的粒径分布图；图2实施例2制备的雷替本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种雷替曲塞pH敏感脂质体，其特征在于，所述雷替曲塞pH敏感脂质体，按重量份数计，包括以下组分：雷替曲塞5～15份、磷脂酰乙醇胺35～105份、胆固醇琥珀酸酯15～45份。

【技术特征摘要】
1.一种雷替曲塞pH敏感脂质体，其特征在于，所述雷替曲塞pH敏感脂质体，按重量份数计，包括以下组分：雷替曲塞5～15份、磷脂酰乙醇胺35～105份、胆固醇琥珀酸酯15～45份。2.根据权利要求1所述的一种雷替曲塞pH敏感脂质体，其特征在于，所述雷替曲塞pH敏感脂质体，按重量份数计，包括以下组分：雷替曲塞5份、磷脂酰乙醇胺15份、胆固醇琥珀酸酯35或40份。3.一种制备如权利要求1-2任一项所述的雷替曲塞pH敏感脂质体的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1)按比例称取磷脂酰乙醇胺及胆固醇琥珀酸酯，溶于有机溶剂，混合均匀；2)将步骤1)所得混合液置于旋转蒸发仪，在40℃～55℃下减压旋蒸去除有机溶剂，使其在瓶壁上形成一层均匀的脂质薄膜，然后加入pH为8～9的雷替...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓盛齐，张彩丽，张亦斌，尹罡，陶静，
申请(专利权)人：中国医药集团总公司四川抗菌素工业研究所，
类型：发明
国别省市：四川,51