The invention discloses an immunochromatographic method for detecting Escherichia coli O157:H7 (E.coli O157:H7) using colored silica nanospheres as markers. The colored silica nanospheres were prepared with reactive dyes as dyes.
【技术实现步骤摘要】
一种彩色二氧化硅纳米微球作为标记物的大肠埃希氏菌O157:H7的免疫层析检测方法
本专利技术涉及免疫层析检测技术，尤其涉及一种彩色二氧化硅纳米微球作为标记物的大肠埃希氏菌O157:H7的免疫层析检测方法。
技术介绍
大肠埃希氏菌O157H7(E.coliO157:H7)是肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagicescherichiacoli,EHEC)的主要血清型，能够导致腹泻、出血性结肠炎、溶血性尿毒综合症和血栓形成的血小板减少性紫癜等病。该菌的流行暴发大多与食用被该菌污染的食物有关，其他污染途径还有饮用水和空气。从1982年发现E.coliO157:H7后，在世界各地陆续有中毒事件发生，对人类的健康造成威胁。因此，建立快速、简单、特异性强的检测方法对于E.coliO157:H7的防控具有重要意义。根据GB/T4789.36-2016，对E.coliO157:H7的检验方法主要有两种。国标法具有准确的检测结果，但其中的常规培养法和免疫磁珠捕获法其步骤都包括增菌、分离和检验，过程繁琐，耗时长。近年来，多种快速检测技术均有研究报道，如PCR技术、基因芯片...
【技术保护点】
1.一种彩色二氧化硅纳米微球作为标记物的大肠埃希氏菌O157:H7的免疫层析检测方法，其特征在于，该方法包括：(1)制备彩色二氧化硅纳米微球：在水溶液中加入二氧化硅纳米微球、有机染料和硅烷偶联剂，通过硅烷偶联剂将有机染料一步反应连接到二氧化硅纳米微球上，制得彩色二氧化硅纳米微球colored SiNPs；(2)在
【技术特征摘要】
1.一种彩色二氧化硅纳米微球作为标记物的大肠埃希氏菌O157:H7的免疫层析检测方法，其特征在于，该方法包括：(1)制备彩色二氧化硅纳米微球：在水溶液中加入二氧化硅纳米微球、有机染料和硅烷偶联剂，通过硅烷偶联剂将有机染料一步反应连接到二氧化硅纳米微球上，制得彩色二氧化硅纳米微球coloredSiNPs；(2)在体系中通过羧基乙基硅烷三醇钠盐将羧基修饰到彩色二氧化硅纳米微球coloredSiNPs的表面，得到羧基改性的彩色二氧化硅纳米微球carboxyl-modifiedcoloredSiNPs；(3)在羧基改性的彩色二氧化硅纳米微球carboxyl-modifiedcoloredSiNP表面进行抗体偶联：通过碳二亚胺化学法在羧基改性的彩色二氧化硅纳米微球carboxyl-modifiedcoloredSiNP表面固定鼠抗E.coliO157:H7单克隆标记抗体mAb1，制备免疫核壳型二氧化硅纳米颗粒coloredSiNPs-mAb1；(4)免疫层析试纸条的组装：试纸条由样品垫、释放垫、NC膜、吸水纸组成，将鼠抗E.coliO157:H7单克隆捕获抗体mAb2喷涂于NC膜的检测线，将羊抗鼠IgG喷涂于质控线，将喷好的NC膜贴于PVC底板，依次将吸水纸、释放垫和样品垫组装至PVC底板，完成试纸条的组装；(5)将待测样品和步骤(3)制备的免疫核壳型二氧化硅纳米颗粒coloredSiNPs-mAb1混合后滴至试纸条的加样孔，在检测线与mAb2形成三明治夹心结构，实现对大肠埃希氏菌O157:H7的快速检测。2.根据权利要求1所述的一种彩色二氧化硅纳米微球作为标记物的大肠埃希氏菌O157:H7的免疫层析检测方法，其特征在于，所述步骤(2)具体为：取25mL烧杯，分别取10mL乙醇、815μL纯水、100μL氨水、200μLTEOS，形成体系于磁力搅拌状态下预水解30min；取2.5mL浓度为1mg/mL的彩色二氧化硅纳米微球，倒入预水解好的体系中；反应12h后，直接在上述体系中加入25μL羧基乙基硅烷三醇钠盐25wt.％的水溶液(Carboxyethylsilanetriolsodiumsalt25wt％inwater，CES)，继续反应24h；反应结束后，通过离心、乙醇和水洗涤数次，得到羧基改性的彩色二氧化硅纳米微球ca...
【专利技术属性】
技术研发人员：窦文超，赵广英，祝春节，吴遵义，
申请(专利权)人：浙江工商大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33
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