一种突变的Nramp1基因及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种Nramp1突变蛋白及其用途。具体地，本发明专利技术所述突变蛋白第132位氨基酸由异亮氨酸(I)突变为苏氨酸(T)。本发明专利技术突变蛋白特异性表达于巨噬细胞中，具有更强的抗胞内菌活性，尤其适用于预防和治疗胞内菌引起的感染。

A mutated Nramp1 gene and its application

The invention provides a Nramp1 mutant protein and its uses. Specifically, the 132nd amino acid of the mutant protein is mutated from isoleucine (I) to threonine (T). The mutant protein of the invention is specifically expressed in macrophages and has stronger ANTI-INTRACELLULAR bacterial activity, and is especially suitable for preventing and treating infection caused by intracellular bacteria.

【技术实现步骤摘要】
一种突变的Nramp1基因及其应用
本专利技术涉及基因工程领域。具体地，本专利技术涉及一种新的Narmp1突变基因及其在胞内菌感染中的应用。
技术介绍
NRAMP1(又名SLC11A1)位于晚期溶酶体/内涵体膜上，是一种pH依赖型二价阳离子转运蛋白，分子量约90-110kDa。其含有十二个跨膜区，1-8跨膜区具有高度的同源性，在跨膜区5与6之间外膜侧，有2个N型糖基化位点，在跨膜区6与7之间内膜侧有一个进化上高度保守的转运功能域。目前研究认为NRAMP1蛋白有协助巨噬细胞抵抗细菌感染的功能，其机制在于：巨噬细胞将病菌吞入吞噬体内后，可通过产生活性氧和/或氮的中间体杀伤病菌。有些细菌(例如结核菌)能够通过自身所产生的大量酶类(比如超氧化物歧化酶SOD)抵抗巨噬细胞杀伤作用。而这些酶的活性中心大多有金属离子的参与。Nramp1的功能是将金属离子从吞噬体内腔转运到细胞质内。由此，吞噬体内金属离子的损耗成了细胞内病原菌合成各类金属酶的限速步骤，从而限制了病菌生产活性酶的能力，阻止了寄生菌的增殖。相反地，一个有缺陷的Nramp1转运蛋白可引起吞噬体中金属离子的富集，致使生物体对病原体的敏感性增大。尽管物种之间的Nramp1基因具有一定同源性，但一级序列仍存在较大差异，这些差异主要集中在位于吞噬体内的N末端和C末端，这些差异使各物种在抵抗细菌感染方面的能力存在差异。因此，本领域迫切需要开发一种能够提高NRAMP1抗菌能力的蛋白，用于加强人畜对细菌、尤其是胞内菌的抵抗能力。
技术实现思路
本专利技术提供了一种新的羊Nramp1突变蛋白及其编码核酸，以及其在抵抗胞内菌中的应用。本专利技术第一方面，提供了一种羊天然抗性相关巨噬蛋白1(naturalresistance-associatedmacrophageprotein1，Nramp1)的突变蛋白，其特征在于，所述突变蛋白第132位氨基酸由异亮氨酸(I)突变为苏氨酸(T)。在另一优选例中，所述突变蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.:1(MSGDTGTPNQGGTRYGSISSPPSPGPQQAPPGGTYLSEKIPIPDTESGAFSLRKLWAFTGPGFLMSIAFLDPGNIESDLQAGAVAGFKLLWVLLWATVLGLLCQRLAARLGVVTGKDLGEVCHLYYPKVPRTLLWLTIELAIVGSDMQEVIGTAIAFSLLSAGRIPLWGGVLITIVDTFFFLFLDNYGLRKLEAFFGFLITIMALTFGYEYVVARPAQGALLQGLFLPSCPGCGQPELLQAVGIVGAIIMPHNIYLHSSLVKSREVDRSRRADIREANMYFLIEATIALSVSFFINLFVMAVFGQAFYKQTNQAAFNICANSSLHDYATIFPRDNLTVAVDIYQGGVILGCLFGPAALYIWAVGLLAAGQSSTMTGTYAGQFVMEGFLKLRWSRFARVLLTRSCAILPTVLLAVFRDLQDLSGLNDLLNVLQSLLLPFAVLPILTFTSMPALMQEFANGLVSKIITSSIMVLVCAVNLYFVISYVPSLPHPAYFSLVALLAAAYLGLTTYLVWTCLITQGATHLAHSSHQRFLYGLPGEDQEEGRTSG)所示。在另一优选例中，所述突变蛋白除第132位之外，其它部分与野生型Nramp1蛋白相同，其中所述野生型Nramp1蛋白如SEQIDNO.:3(MSGDTGTPNQGGTRYGSISSPPSPGPQQAPPGGTYLSEKIPIPDTESGAFSLRKLWAFTGPGFLMSIAFLDPGNIESDLQAGAVAGFKLLWVLLWATVLGLLCQRLAARLGVVTGKDLGEVCHLYYPKVPRILLWLTIELAIVGSDMQEVIGTAIAFSLLSAGRIPLWGGVLITIVDTFFFLFLDNYGLRKLEAFFGFLITIMALTFGYEYVVARPAQGALLQGLFLPSCPGCGQPELLQAVGIVGAIIMPHNIYLHSSLVKSREVDRSRRADIREANMYFLIEATIALSVSFFINLFVMAVFGQAFYKQTNQAAFNICANSSLHDYATIFPRDNLTVAVDIYQGGVILGCLFGPAALYIWAVGLLAAGQSSTMTGTYAGQFVMEGFLKLRWSRFARVLLTRSCAILPTVLLAVFRDLQDLSGLNDLLNVLQSLLLPFAVLPILTFTSMPALMQEFANGLVSKIITSSIMVLVCAVNLYFVISYVPSLPHPAYFSLVALLAAAYLGLTTYLVWTCLITQGATHLAHSSHQRFLYGLPGEDQEEGRTSG)所示。本专利技术第二方面，提供了一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码本专利技术第一方面所述的突变蛋白。在另一优选例中，所述的多核苷酸与SEQIDNO.:4(ATGTCTGGTGACACGGGTACCCCAAACCAGGGAGGGACCAGATATGGCTCCATCTCCAGCCCACCCAGTCCAGGGCCACAGCAAGCACCTCCCGGAGGGACCTACCTAAGTGAGAAGATCCCCATTCCGGATACAGAATCGGGTGCATTCAGCCTGCGGAAGCTGTGGGCCTTCACAGGGCCTGGATTCCTCATGAGCATAGCATTCCTGGACCCAGGAAACATCGAGTCGGATCTTCAGGCTGGGGCTGTGGCTGGATTCAAACTGCTCTGGGTGCTGCTGTGGGCCACAGTGTTGGGCTTGCTCTGCCAGCGACTGGCTGCCCGGCTGGGCGTGGTGACAGGCAAGGACTTGGGAGAGGTCTGCCATCTCTACTACCCTAAGGTGCCCCGCATTCTCCTCTGGCTGACCATCGAGCTAGCCATCGTGGGCTCGGACATGCAGGAAGTCATTGGCACAGCTATTGCATTCAGTCTGCTCTCAGCCGGACGAATCCCACTCTGGGGTGGTGTCCTCATCACCATCGTGGACACTTTCTTCTTCCTCTTCCTCGATAACTACGGGTTGCGGAAGCTGGAAGCCTTTTTTGGATTTCTTATTACCATAATGGCCTTGACCTTCGGCTATGAGTACGTGGTGGCTCGGCCTGCTCAGGGAGCACTGCTTCAGGGCCTGTTCCTGCCCTCGTGCCCAGGCTGTGGCCAGCCCGAGCTGCTGCAGGCCGTGGGCATCGTTGGCGCCATCATCATGCCCCACAACATCTACCTGCATTCCTCCCTAGTCAAGTCTCGAGAGGTAGACCGGTCCCGGCGGGCGGACATCCGAGAAGCCAACATGTACTTCCTGATTGAAGCCACCATCGCCCTGTCTGTCTCCTTCTTCATCAACCTCTTTGTCATGGCTGTCTTTGGGC本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种羊天然抗性相关巨噬蛋白1(natural resistance‑associated macrophage protein 1，Nramp1)的突变蛋白，其特征在于，所述突变蛋白第132位氨基酸由异亮氨酸(I)突变为苏氨酸(T)。

【技术特征摘要】
1.一种羊天然抗性相关巨噬蛋白1(naturalresistance-associatedmacrophageprotein1，Nramp1)的突变蛋白，其特征在于，所述突变蛋白第132位氨基酸由异亮氨酸(I)突变为苏氨酸(T)。2.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码权利要求1所述的突变蛋白。3.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有权利要求2所述的多核苷酸。4.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有权利要求3所述的表达载体或所述宿主细胞整合有权利要求2所述的多核苷酸。5.如权利要求4所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞为巨噬细胞。6.权利要求1所述突变蛋白、权利要求2所述多核苷酸、权利要求3所述表达载体或权利要求4所述宿主细胞的用途，其特征在于，用于制备抗胞内菌和/或治疗胞内菌感染的药物组合物。7.如权利要求6所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱佳琪，刘思国，孙林，陈建泉，成国祥，
申请(专利权)人：上海杰隆生物工程股份有限公司，上海转基因研究中心，
类型：发明
国别省市：上海,31