一种转基因定位整合的方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种转基因定位整合的方法及其应用。具体地，本发明专利技术提供了一种变异的loxP元件。将野生型的loxp位点中反向重复序列的“ATAAC”序列突变为“CACCT”，即为变异的loxP元件。所述变异的loxP元件能够极大提高cre-loxp系统的整合特异性和整合效率。据此可以实现高效率的基因定点整合。

【技术实现步骤摘要】
一种转基因定位整合的方法及其应用
本专利技术属于生物
，具体地，本专利技术涉及一种转基因定位整合的方法及其应用。
技术介绍
制备转基因动物的方法在基础研究和应用研究中有着非常重要的作用。目前科学家们已经开展了多种转基因技术，以提高转基因动物的靶向性和的整合效率。但目前在大动物中，转基因的整合效率和表达率均不甚理想。当前国际通用的转基因方法是显微注射法，该法成本较高，成功率很低，就转基因动物—乳腺生物反应器而言，其成功率仅3％左右。显微注射导致外源基因在染色体上随机整合，且转基因的表达极大地受周围宿主基因组的影响。外源基因的随机整合可能导致下述问题：1.转基因整合入非活跃染色体序列中的机率较活跃染色体区域高，受整合位点影响，大多数转基因的表达低下或不表达；2.转基因整合入高频重组位点时，会发生遗传不稳定；3.随机外源基因整合常引起内源基因突变或表达改变，影响转基因动物的正常发育和健康；4.多位点整合的转基因动物，在后代中因整合位点分离导致转基因表达性状改变和育种困难；5.整合拷贝数过高或过低易导致转基因表达低下或不表达。以上问题是研究基因功能、创建动物疾病模型、开发有商业价值模型本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种变异的loxP元件，其特征在于，所述变异的loxP元件具有SEQ?ID?NO.：30所示的序列。

【技术特征摘要】
1.一种变异的loxP元件，其特征在于，所述变异的loxP元件的序列如下所示：ataacttcgtataatgtatgctatacgaaaggtg。2.一种构建物，其特征在于，所述的构建物从5’到3’依次含有以下三个元件：(a)权利要求1所述的变异的loxP元件；(b)外源基因表达盒和/或筛选标记表达盒；(c)如SEQIDNO.:28所示序列的野生型loxP元件；或(c)如SEQIDNO.:28所示序列的野生型loxP元件；(b)外源基因表达盒和/或筛选标记表达盒；(a)权利要求1所述的变异的loxP元件。3.如权利要求2所述的构建物，其特征在于，所述的筛选标记为新霉素基因、或嘌呤霉素抗性基因。4.如权利要求2所述的构建物，其特征在于，所述的外源基因选自下组：溶菌酶基因、鲑鱼降钙素基因、或血清白蛋白基因。5.如权利要求2所述的构建物，其特征在于，元件(a)和元件(c)为同向排列。6.如权利要求2所述的构建物，其特征在于，所述的元件(a)和元件(c)为异向排列。7.一种载体，其特征在于，所述载体含有权利要求2所述的构建物。8.一种宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞含有权利要求2所述的构建物，或其染色体整合有一个或多个权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：成国祥，刘思国，陈建泉，徐旭俊，刘国辉，
申请(专利权)人：上海杰隆生物工程股份有限公司，上海转基因研究中心，
类型：发明
国别省市：