The invention relates to a cell stationary solution for flow detection and its application method. The purpose of the present invention is to solve the problems of short storage time and many cell fragments after existing cells are fixed. The cell stationary solution of the present invention is composed of polyformaldehyde, glutaraldehyde and phosphorus. The invention is composed of a salt buffer and a deionized water, and the cells are stained first, and then fixed solution is added after the staining, and the method of storing the cells at 4 C is put to avoid light. Compared with the traditional fixing solution, the fixing effect of the invention is better, the time for the cells to be placed after fixing is longer, after 30 days of storage, the cell morphology changes less, the clustering is more obvious, the fluorescence intensity has no obvious change, the cell breaks less, the toxicity is lower, and the harm to human body is smaller. Compared with the traditional fixation method, the invention has greater advantages, and the cell expression rate fixed by the method is more accurate. The invention applies the field of flow detection.
【技术实现步骤摘要】
一种用于流式检测的细胞固定液及其使用方法
本专利技术涉及一种用于流式检测的细胞固定液及其使用方法。
技术介绍
实验室在做细胞流式检测时,细胞染色后通常直接上机检测,避免长时间放置。自然放置时间过长会导致细胞破碎以及抗体荧光促灭,致使细胞碎片增多,数据不准确,荧光强度下降等。但实验室样本量过多或无流式细胞仪,需要送检至第三方实验室的情况下,则不可避免的需对样本进行长时间放置。样本量过少时,频繁开机关机也会造成仪器试剂的浪费,一般会选择将样本集中起来统一检测,这时也需对样本进行一段时间放置。传统方法采用固定法,向流式管中添加含有4%多聚甲醛的溶液对样本进行固定,但固定后放置时间较短,固定后细胞碎片较多,且多聚甲醛浓度较大,对人体毒性较高。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决现有细胞固定后存放时间短且细胞碎片多的问题,提供了一种用于流式检测的细胞固定液及其使用方法。本专利技术一种用于流式检测的细胞固定液由多聚甲醛、戊二醛、磷酸盐缓冲液和去离子水混合而成;其中固定液中多聚甲醛的质量浓度为0.3-0.5%,戊二醛的质量浓度为0.3-0.5%,磷酸盐缓冲液的终浓度为0.01-0.03M。本专利技术一种用于流式检测的细胞固定液的使用方法为:一、按照流式染色方法对细胞进行染色,避光孵育后对细胞进行离心,去掉上清,加入PBS重悬,再离心,去掉上清,得到染色后细胞;二、取10-107个染色后细胞加入固定液500μL,混匀后放置在4℃冰箱内,避光保存。本专利技术戊二醛通过交联作用固定蛋白质的过程会伴随氢离子的释放,使样品pH值降低。为了维持pH值稳定在最佳水平,在戊二醛的固定 ...
【技术保护点】
1.一种用于流式检测的细胞固定液,其特征在于细胞固定液由多聚甲醛、戊二醛、磷酸盐缓冲液和去离子水混合而成;其中固定液中多聚甲醛的质量浓度为0.3‑0.5%,戊二醛的质量浓度为0.3‑0.5%,磷酸盐缓冲液的终浓度为0.01‑0.03M。
【技术特征摘要】
1.一种用于流式检测的细胞固定液,其特征在于细胞固定液由多聚甲醛、戊二醛、磷酸盐缓冲液和去离子水混合而成;其中固定液中多聚甲醛的质量浓度为0.3-0.5%,戊二醛的质量浓度为0.3-0.5%,磷酸盐缓冲液的终浓度为0.01-0.03M。2.根据权利要求1所述的一种用于流式检测的细胞固定液,其特征在于固定液中多聚甲醛的质量浓度为0.4%。3.根据权利要求1所述的一种用于流式检测的细胞固定液,其特征在于固定液中戊二醛的质量浓度为0.4%。4.根据权利要求1所述的一种用...
【专利技术属性】
技术研发人员:赵新新,张怡,郭晶,刘艳青,王琳娜,
申请(专利权)人:天晴干细胞股份有限公司,
类型:发明
国别省市:黑龙江,23
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