一种三角梅脱毒组织培养方法技术

本发明专利技术公开了一种三角梅脱毒组织培养方法，包括如下步骤：（1）选材：整枝选取1~2年生芽饱满、无腐无病害、健壮三角梅枝条；（2）催芽：将选取好的三角梅枝条进行催芽；（3）表面处理；（4）消毒；（5）切割；（6）初代培养；（7）增殖继代：将无菌苗将其接种到相应培养基上进行增殖继代培养；（8）生根培养；（9）驯化炼苗。本发明专利技术的有益效果是：三角梅通过组织培养，大幅度提高了三角梅质量和品质，并最大限度的降低成本，提高繁殖系数，为三角梅试管苗工厂化生产提供技术依据具有重大的意义；攻克了三角梅组织培养过程中的技术壁垒，达到很好的培养效果。

A method for tissue culture of trigonvirus

The invention discloses a virus-free tissue culture method of Trigonella pratensis, which comprises the following steps: (1) selecting materials: pruning and selecting branches of Trigonella pratensis with full buds, no rot, no disease, and strong body; (2) accelerating buds: accelerating buds of selected branches; (3) surface treatment; (4) disinfection; (5) cutting; (6) initial stage Subculture; (7) Proliferation and subculture: the aseptic seedlings will be inoculated to the corresponding medium for proliferation and subculture; (8) rooting culture; (9) domestication and seedling. The beneficial effect of the invention is that the quality and quality of Triangle Plum are greatly improved by tissue culture, and the cost is lowered to the greatest extent, and the reproduction coefficient is raised, which provides the technical basis for the industrialized production of Triangle Plum in vitro seedlings. To a very good training effect.

【技术实现步骤摘要】
一种三角梅脱毒组织培养方法
本专利技术属于植物组织培养
，具体的说涉及一种三角梅脱毒组织培养方法。
技术介绍
三角梅为紫茉莉科叶子花属常绿木质大藤木植物,属观花树木中的观花灌木类,是重要的观赏花卉和优良的园林绿化植物。其身段优美,枝叶嫩绿柔芙，从初秋至翌年春末,开花时间达半年之久，作为一种新颖奇特、栽培管理粗放的花卉,深受人们的喜爱。三角梅作为花卉栽培时,常修整成灌木、小乔木状或多层宝塔状,故在日本叫“九重葛”；又因其花的苞片叶状,椭圆形或椭圆状披针形,有红、白、橙黄、紫、复色等多种颜色,万紫千红似杜鹃,故在广州称之为“勒杜鹃”；又由于它的新枝顶端通常是三朵簇生在三片苞片之中,花朵外围的苞片丽紫妖红,形似三角形,故在福建又名“三角梅”或“三角花”。植物学上叫“宝巾花”则来自它的拉丁学名的音译。香港叫“凑红”则可能由于其在春节前后开花而得名。三角梅属植物不仅作为花卉备受关注，近年来有关三角梅其它应用价值的研究使人们对其有了新的认识。从三角梅叶片中分离得到具有类胰岛素功能的松醇对替代胰岛素治疗糖尿病以及减轻胰岛素疗法带来的副作用具有重要意义。研究还表明，三角梅叶片和根中至少含有2种抗病毒蛋白—BAPI和Bouganin,它们对于多种植物病毒具有不同程度的抑制作用。这些研究结果对于开发低毒高效的生物农药具有十分积极的意义。三角梅还是研究甜菜色素代谢的重要模式植物之一，其甜菜色素的种类和含量之丰富为开发安全的天然食用色素开辟了广阔的前景。这些相关研究展示了三角梅作为资源植物的多元价值，为进一步开发三角梅的观赏、医药、生物农药价值和作为天然食用色素以及发挥环境修复作用提供了充分的科学依据。近年来,国内对于三角梅的研究主要集中在生物学特性、栽培管理、育种、扦插繁殖、绿化应用等方面。随着人们对三角梅研究的不断深入和园林绿化建设事业的快速发展，三角梅传统的繁殖方式越来越不能满足市场的需求，因为传统的繁殖方式存在繁殖速度慢，增殖系数小，生根时间长、繁殖时间受限制等弊端；而且随着三角梅育种研究工作的进展，人们培育出了许多观赏价值更高的新品种，有些新品种用传统的繁殖方法繁殖比较困难，难以在短时间内提供大量优良品种或株系的苗木，从而影响了三角梅的扩大繁殖和市场占有份额。
技术实现思路
本专利技术的目的是为克服上述三角梅组织培养的缺陷，对三角梅的脱毒组织培养方法进行系统的研究，经过大量实验，得到一种操作简便、提高三角梅产量与品质的培养方法。为实现上述目的，本专利技术采用下述技术方案：一种三角梅脱毒组织培养方法，包括：(1)选材：整枝选取1~2年生无腐无病害、健壮三角梅枝条；(2)催芽：将选取好的三角梅枝条插在带水的瓶中，置于光照室内，维持温度25~30℃，光照强度3000~5000Lux，光照时间24h，照射5~10d，选取3~7cm三角梅芽体小段；(3)表面处理：将收集好的三角梅芽体小段采用流水冲洗干净，用2%吐温-80清洗10~15min，采用流水冲洗干净；(4)消毒：采用75%酒精浸泡、0.1%HgCl溶液消毒5~10min，无菌水冲洗干净；(5)切割：将消毒好的三角梅芽体小段切口进行更新处理，保留2~3cm；(6)初代培养：将处理好的三角梅小段接种至培养基Ⅰ上，放置于温度25~28℃、每天光照18~22h、光照强度为1000~3000Lux、培养40~50d；(7)增殖继代：选取步骤（6）中得到的无菌苗将其接种到培养基Ⅱ上进行增殖培养，培养条件为：温度25~28℃、每天光照10~14h、光照强度为5000~7000Lux、培养25~35d；重复上述增殖过程；(8)生根：选取长势健壮的三角梅苗，将其接种至培养基Ⅲ中，放置于温度25~28℃、每天光照12~16h、光照强度为5000~7000Lux的环境中，培养20~30d；(9)驯化炼苗：将步骤(8)得到的根系发达的三角梅苗转移到小温棚中进行驯化，遮荫，保持小温棚中温度为15~30℃，湿度控制在85~95%，7d后湿度递减至80%，此后逐步递减，15d后将三角梅苗从组织培养基中去除，将根部的培养基清洗干净，种植到基质土中；其中：培养基Ⅰ为MS改良培养基中添加0.5~1.5mg/LIBA、1.0~3.0mg/LZT、25~35g/L蔗糖和2~5g/L琼脂；培养基Ⅱ为MS改良培养基中添加4~5mg/LZT、0.01~0.5mg/LIAA、0.1~1mg/LNAA、25~35g/L蔗糖和2~5g/L琼脂；培养基Ⅲ为MS改良培养基中添加0.1~1mg/LNAA、0.1~0.5mg/LIBA、15~25g/L蔗糖和2~5g/L琼脂。作为优化的，一种三角梅脱毒组织培养方法，包括：(1)选材：整枝选取1~2年生无腐无病害、健壮三角梅枝条；(2)催芽：将选取好的三角梅枝条插在带水的瓶中，置于光照室内，维持温度25~30℃，光照强度4000~5000Lux，光照时间24h，照射7d，选取4~6cm三角梅芽体小段；(3)表面处理：将收集好的三角梅芽体小段采用流水冲洗干净，用2%吐温-80清洗10~15min，采用流水冲洗干净；(4)消毒：采用75%酒精浸泡、0.1%HgCl溶液消毒5~10min，无菌水冲洗干净；(5)切割：将消毒好的三角梅芽体小段切口进行更新处理，保留2~3cm；(6)初代培养：将处理好的三角梅小段接种至培养基Ⅰ上，放置于温度25~26℃、每天光照20h、光照强度为2000Lux、培养45~50d；(7)增殖继代：选取步骤（6）中得到的无菌苗将其接种到培养基Ⅱ上进行增殖培养，培养条件为：温度25~26℃、每天光照12h、光照强度为5000~7000Lux、培养25~30d；重复上述增殖过程；(8)生根：选取长势健壮三角梅无菌苗，将其接种至培养基Ⅲ中，放置于温度25~26℃、每天光照14h、光照强度为5000~7000Lux的环境中，培养25~30d；(9)驯化炼苗：将步骤(8)得到的根系发达的三角梅苗转移到小温棚中进行驯化，遮荫，保持小温棚中温度为20~30℃，湿度控制在85~95%，7d后湿度递减至80%，此后逐步递减，15d后将三角梅苗从组织培养基中去除，将根部的培养基清洗干净，种植到基质土中；作为优化的，培养基Ⅰ为MS改良培养基中添加0.5~1.5mg/LIBA、1.0~3.0mg/LZT、25~35g/L蔗糖和2~5g/L琼脂。作为优化的，培养基Ⅱ为MS改良培养基中添加4~5mg/LZT、0.01~0.5mg/LIAA、0.1~1mg/LNAA、25~35g/L蔗糖和2~5g/L琼脂。作为优化的，培养基Ⅲ为MS改良培养基中添加0.1~1mg/LNAA、0.1~0.5mg/LIBA、15~25g/L蔗糖和2~5g/L琼脂。作为优化的，所述培养基Ⅰ、培养基Ⅱ和培养基Ⅱ的pH均被调节至5.8。作为优化的，所述步骤(4)中酒精消毒时间不超过1min。作为优化的，所述步骤（9）中驯化炼苗环节阴天条件下进行人工补光，补光强度为3000~5000Lux。作为优化的，所述步骤（9）中驯化炼苗步骤，转移至小温棚10~15天后每天傍晚或清晨通风半小时。MS培养基是Murashige和Skoog于1962年为烟草细胞培养设计的，其特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，它本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种三角梅脱毒组织培养方法，其特征在于：包括：(1)选材：整枝选取1~2年生无腐无病害、健壮三角梅枝条；(2)催芽：将选取好的三角梅枝条插在带水的瓶中，置于光照室内，维持温度25~30℃，光照强度3000~5000Lux，光照时间24h，照射5~10d，选取3~7cm三角梅芽体小段；(3)表面处理：将收集好的三角梅芽体小段采用流水冲洗干净，用2%吐温‑80清洗10~15min，采用流水冲洗干净；(4)消毒：采用75%酒精浸泡、0.1%HgCl溶液消毒5~10min，无菌水冲洗干净；(5)切割：将消毒好的三角梅芽体小段切口进行更新处理，保留2~3cm；(6)初代培养：将处理好的三角梅小段接种至培养基Ⅰ上，放置于温度25~28℃、每天光照18~22h、光照强度为1000~3000Lux、培养40~50d；(7)增殖继代：选取步骤（6）中得到的无菌苗将其接种到培养基Ⅱ上进行增殖培养，培养条件为：温度25~28℃、每天光照10~14h、光照强度为5000~7000Lux、培养25~35d；重复上述增殖过程；(8)生根：选取长势健壮的三角梅苗，将其接种至培养基Ⅲ中，放置于温度25~28℃、每天光照12~16h、光照强度为5000~7000Lux的环境中，培养20~30d；(9)驯化炼苗：将步骤(8)得到的根系发达的三角梅苗转移到小温棚中进行驯化，遮荫，保持小温棚中温度为15~30℃，湿度控制在85~95%，7d后湿度递减至80%，此后逐步递减，15d后将三角梅苗从组织培养基中去除，将根部的培养基清洗干净，种植到基质土中；其中：培养基Ⅰ为MS改良培养基中添加0.5~1.5mg/LIBA、1.0~3.0mg/LZT、25~35g/L蔗糖和2~5g/L琼脂；培养基Ⅱ为MS改良培养基中添加4~5mg/LZT、0.01~0.5mg/LIAA、0.1~1mg/LNAA、25~35g/L蔗糖和2~5g/L琼脂；培养基Ⅲ为MS改良培养基中添加0.1~1mg/LNAA、0.1~0.5mg/LIBA、15~25g/L蔗糖和2~5g/L琼脂。...

【技术特征摘要】
1.一种三角梅脱毒组织培养方法，其特征在于：包括：(1)选材：整枝选取1~2年生无腐无病害、健壮三角梅枝条；(2)催芽：将选取好的三角梅枝条插在带水的瓶中，置于光照室内，维持温度25~30℃，光照强度3000~5000Lux，光照时间24h，照射5~10d，选取3~7cm三角梅芽体小段；(3)表面处理：将收集好的三角梅芽体小段采用流水冲洗干净，用2%吐温-80清洗10~15min，采用流水冲洗干净；(4)消毒：采用75%酒精浸泡、0.1%HgCl溶液消毒5~10min，无菌水冲洗干净；(5)切割：将消毒好的三角梅芽体小段切口进行更新处理，保留2~3cm；(6)初代培养：将处理好的三角梅小段接种至培养基Ⅰ上，放置于温度25~28℃、每天光照18~22h、光照强度为1000~3000Lux、培养40~50d；(7)增殖继代：选取步骤（6）中得到的无菌苗将其接种到培养基Ⅱ上进行增殖培养，培养条件为：温度25~28℃、每天光照10~14h、光照强度为5000~7000Lux、培养25~35d；重复上述增殖过程；(8)生根：选取长势健壮的三角梅苗，将其接种至培养基Ⅲ中，放置于温度25~28℃、每天光照12~16h、光照强度为5000~7000Lux的环境中，培养20~30d；(9)驯化炼苗：将步骤(8)得到的根系发达的三角梅苗转移到小温棚中进行驯化，遮荫，保持小温棚中温度为15~30℃，湿度控制在85~95%，7d后湿度递减至80%，此后逐步递减，15d后将三角梅苗从组织培养基中去除，将根部的培养基清洗干净，种植到基质土中；其中：培养基Ⅰ为MS改良培养基中添加0.5~1.5mg/LIBA、1.0~3.0mg/LZT、25~35g/L蔗糖和2~5g/L琼脂；培养基Ⅱ为MS改良培养基中添加4~5mg/LZT、0.01~0.5mg/LIAA、0.1~1mg/LNAA、25~35g/L蔗糖和2~5g/L琼脂；培养基Ⅲ为MS改良培养基中添加0.1~1mg/LNAA、0.1~0.5mg/LIBA、15~25g/L蔗糖和2~5g/L琼脂。2.根据权利要求1所述的一种三角梅脱毒组织培养方法，其特征在于：包括：(1)选材：整枝选取1~2年生无腐无病害、健壮三角梅枝条；(2)催芽：将选取好的三角梅枝条插在带水的瓶中，置于光照室内，维持温度25~30℃，光照强度4000~5000Lux，光照时间24h，照射7d，选取4~6cm三角梅芽体小段；(3)表面处理：...

【专利技术属性】
技术研发人员：金红梅，李亚，
申请(专利权)人：济南亚龙生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37