一种青天葵球茎组织培养快速繁殖方法技术

本发明专利技术公开了一种青天葵球茎组织培养快速繁殖方法，其特征在于包括以下步骤：(1)外植体的取材与消毒；(2)无菌根状茎的获取；(3)根状茎繁殖及球茎诱导一体化培养；(4)球茎炼苗移栽。与现有技术相比，本发明专利技术技术方案的有益效果是：本发明专利技术通过生物技术对青天葵球茎进行组织培养快速繁殖，在短时间内培育出大量可供大田栽培的青天葵种苗，显著提高了青天葵种苗的繁殖系数和种苗质量，实现规模化生产，满足生产上的需要。

A rapid propagation method for tissue culture of Bulbus cordata

The invention discloses a fast propagation method for corm tissue culture of celestial anemone, which is characterized by the following steps: (1) sampling and disinfection of explants; (2) acquisition of aseptic rhizomes; (3) integrated cultivation of rhizome propagation and corm induction; (4) transplantation of corm refining seedlings. Compared with the prior art, the beneficial effect of the technical scheme of the invention is that the biological technique is used to carry out tissue culture and rapid propagation of the corm of the celestial anemone, and a large number of celestial anemone seedlings can be cultivated for field cultivation in a short time, thereby significantly improving the propagation coefficient and seedling quality of the celestial anemone seedlings and realizing large-scale production. To meet the needs of production.

【技术实现步骤摘要】
一种青天葵球茎组织培养快速繁殖方法
本专利技术涉及一种青天葵球茎组织培养快速繁殖方法。
技术介绍
青天葵为兰科植物毛唇芋兰Nerviliafordii(Hance)Schitr的叶或带球茎的叶，又名独叶莲、独脚莲、珍珠叶、坠千斤、铁帽子、山米子、青莲。性平，味苦，甘、凉。青天葵是我国珍稀濒危植物，有清肺止咳，健脾消积，清热解毒，消结散疬等功效，主治肺痨咯血，肺热咳嗽，小儿肺炎，急性喉炎，口腔炎，咽喉肿痛，瘰疬，疮疡肿毒，跌打损伤等。青天葵主要以球茎进行繁殖，但繁殖系数极低，加之多年来人们灭绝式的挖掘，导致野生青天葵资源日益枯竭。然而，国内外市场的需求量却逐年加大，青天葵已远远满足不了市场的需求。通过栽培试验比较，发现青天葵组培球茎不仅能正常生长，而且在相同条件下栽培组培球茎优于野生球茎。因此，如何利用现代生物技术通过优化青天葵组织培养条件，为青天葵组织培养规模化生产育苗提供技术支撑，从而更好的开发和利用青天葵药用植物资源。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种青天葵球茎组织培养快速繁殖方法。本专利技术为实现上述目的，采取以下技术方案予以实现：一种青天葵球茎组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：(1)外植体的取材与消毒：青天葵球茎作为外植体进行消毒，首先将3-5滴洗洁精滴入装有50ml自来水的烧杯中，把外植体放入烧杯轻轻搅拌5min，再用棉花清洗外植体表面污垢，自来水轻微流水冲洗20-30min；移置超净工作台，用75v/v％乙醇浸泡30s，无菌水冲洗一遍，然后再用添加了1-2滴吐温-20的50ml浓度为0.1v/v％升汞消毒1-2min、无菌水冲洗3-5次，获得无菌外植体，其中无菌水为经高高温压灭菌的蒸馏水；(2)无菌根状茎的获取：将消毒好的外植体置于诱导培养基中进行不定芽诱导，发芽得到无菌根状茎，所述诱导培养基是以1/2MS为基本培养基，添加5g·L-1琼脂，20g·L-1蔗糖，1.5mg·L-1的6-苄基腺嘌呤，0.3mg·L-1的萘乙酸，培养基pH值为6.8，培养条件为：温度为25-27℃，光照强度1500-2000lux，光照时间为10-12h/d，培养时间为15-20d；(3)根状茎繁殖及球茎诱导一体化培养：切取2-3cm的无菌根状茎置于添加5g·L-1琼脂，25g·L-1蔗糖，1.0-2.0mg·L-1的6-苄基腺嘌呤、0.1-0.5mg·L-1的激动素(KT)、0.1-0.5mg·L-1的萘乙酸、苹果汁100-200g·L-1的1/2MS培养基中培养获得球茎，培养基pH值为6.8，培养条件为：温度为25-27℃，光照强度1500-2000lux，光照时间为10-12h/d，培养时间为20d；(4)球茎炼苗移栽：球茎进行炼苗后移植于基质中培养，再移栽至大田。优选的，步骤(4)中的炼苗移栽按以下操作进行：经过步骤(3)获得球茎，在室温为20℃的室内进行炼苗，并在瓶中加水淹没培养基，炼苗5-7d，取出球茎，洗净培养基，再放入ABT生根粉配成100mg/·L-1的溶液中浸泡30min,浸泡后移栽到基质中生长30-40d，再移栽至大田。优选的，所述基质为按优质塘泥：黄沙＝2：1的比例混合。与现有技术相比，本专利技术技术方案的有益效果是：(1)本专利技术通过生物技术对青天葵球茎进行组织培养快速繁殖，在短时间内培育出大量可供大田栽培的青天葵种苗，显著提高了青天葵种苗的繁殖系数和种苗质量，实现规模化生产，满足生产上的需要。(2)通过根状茎繁殖及球茎诱导一体化培养进行青天葵球茎的繁殖，缩短了培养时间，减少培养步骤，降低了培养成本，提高了青天葵种苗的生产效率。(3)根状茎繁殖及球茎诱导一体化培养20天后，球茎诱导系数达到20.2～25.3，移栽基质后成活率在90～95％，有效解决了青天葵的规模化育苗问题。具体实施方式以下结合具体实施例来对本专利技术作进一步的说明。实施例1本专利技术所述的青天葵球茎组织培养快速繁殖方法的一个实例，包括如下步骤：(1)外植体的取材与消毒：青天葵球茎作为外植体进行消毒，首先将3-5滴洗洁精滴入装有50ml自来水的烧杯中，把外植体放入烧杯轻轻搅拌5min，再用棉花清洗外植体表面污垢，自来水轻微流水冲洗20-30min；移置超净工作台，用75v/v％乙醇浸泡30s，无菌水冲洗一遍，然后再用添加了1-2滴吐温-20的50ml浓度为0.1v/v％升汞消毒1-2min、无菌水冲洗3-5次，获得无菌外植体，其中无菌水为经高高温压灭菌的蒸馏水；(2)无菌根状茎的获取：将消毒好的外植体置于诱导培养基中进行不定芽诱导，在温度为25-27℃，光照强度1500-2000lux，光照时间为10-12h/d的条件下培养15-20d，得到无菌根状茎。(3)根状茎繁殖及球茎诱导一体化培养：切取2-3cm的无菌根状茎置于根状茎繁殖及球茎诱导一体化培养基中，在温度为25-27℃，光照强度1500-2000lux，光照时间为10-12h/d的条件下培养时间为20d，球茎诱导系数为23.2。(4)球茎炼苗移栽：经过步骤(3)获得球茎，在室温为20℃的室内进行炼苗，并在瓶中加水淹没培养基，炼苗5-7d，取出球茎，洗净培养基，再放入ABT生根粉配成100mg/·L-1的溶液中浸泡30min,浸泡后移栽到基质中生长30-40d，再移栽至大田。成活率为91.3％所述基质为按优质塘泥：黄沙＝2：1的比例混合。其中，各阶段使用的培养基配方如下：所述诱导培养基是以1/2MS为基本培养基，添加5g·L-1琼脂，20g·L-1蔗糖，1.5mg·L-1的6-苄基腺嘌呤，0.3mg·L-1的萘乙酸，培养基pH值为6.8。所述根状茎繁殖及球茎诱导一体化培养基是以1/2MS为基本培养基，添加5g·L-1琼脂，25g·L-1蔗糖，1.0mg·L-1的6-苄基腺嘌呤、0.1mg·L-1的激动素(KT)、0.1mg·L-1的萘乙酸、苹果汁100g·L-1，培养基pH值为6.8。实施例2本专利技术所述的青天葵球茎组织培养快速繁殖方法的另一个实例，包括如下步骤：其他条件同实施例1，仅以下内容不同：步骤(3)中，根状茎繁殖及球茎诱导一体化培养基是以1/2MS为基本培养基，添加5g·L-1琼脂、25g·L-1蔗糖、1.5mg·L-1的6-苄基腺嘌呤、0.3mg·L-1的激动素(KT)、0.3mg·L-1的萘乙酸、苹果汁100g·L-1，培养基pH值为6.8；球茎诱导系数为22。步骤(4)中，移栽成活率率为94％。实施例3本专利技术所述的青天葵球茎组织培养快速繁殖方法的再一个实例，包括如下步骤：其他条件同实施例1，仅以下内容不同：步骤(3)中，根状茎繁殖及球茎诱导一体化培养基是以1/2MS为基本培养基，添加5g·L-1琼脂、25g·L-1蔗糖、1.5mg·L-1的6-苄基腺嘌呤、0.5mg·L-1的激动素(KT)、0.5mg·L-1的萘乙酸、苹果汁150g·L-1，培养基pH值为6.8；球茎诱导系数为24.4。步骤(4)中，移栽成活率率为91.5％。实施例4本专利技术所述的青天葵球茎组织培养快速繁殖方法的又一个实例，包括如下步骤：其他条件同实施例1，仅以下内容不同：步骤(3)中，根状茎繁殖及球茎诱导一体化培养基是以1/2MS为基本培养基，添加5g·L-1琼脂、25g·L-1蔗糖、2.0mg本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种青天葵球茎组织培养快速繁殖方法，其特征在于包括以下步骤：(1)外植体的取材与消毒：青天葵球茎作为外植体进行消毒，首先将3‑5滴洗洁精滴入装有50ml自来水的烧杯中，把外植体放入烧杯轻轻搅拌5min，再用棉花清洗外植体表面污垢，自来水轻微流水冲洗20‑30min；移置超净工作台，用75v/v％乙醇浸泡30s，无菌水冲洗一遍，然后再用添加了1‑2滴吐温‑20的50ml浓度为0.1v/v％升汞消毒1‑2min、无菌水冲洗3‑5次，获得无菌外植体，其中无菌水为经高高温压灭菌的蒸馏水；(2)无菌根状茎的获取：将消毒好的外植体置于诱导培养基中进行不定芽诱导，发芽得到无菌根状茎，所述诱导培养基是以1/2MS为基本培养基，添加5g·L‑1琼脂，20g·L‑1蔗糖，1.5mg·L‑1的6‑苄基腺嘌呤，0.3mg·L‑1的萘乙酸，培养基pH值为6.8，培养条件为：温度为25‑27℃，光照强度1500‑2000lux，光照时间为10‑12h/d，培养时间为15‑20d；(3)根状茎繁殖及球茎诱导一体化培养：切取2‑3cm的无菌根状茎置于添加5g·L‑1琼脂，25g·L‑1蔗糖，1.0‑2.0mg·L‑1的6‑苄基腺嘌呤、0.1‑0.5mg·L‑1的激动素(KT)、0.1‑0.5mg·L‑1的萘乙酸、苹果汁100‑200g·L‑1的1/2MS培养基中培养获得球茎，培养基pH值为6.8，培养条件为：温度为25‑27℃，光照强度1500‑2000lux，光照时间为10‑12h/d，培养时间为20d；(4)球茎炼苗移栽：球茎进行炼苗后移植于基质中培养，再移栽至大田。...

【技术特征摘要】
1.一种青天葵球茎组织培养快速繁殖方法，其特征在于包括以下步骤：(1)外植体的取材与消毒：青天葵球茎作为外植体进行消毒，首先将3-5滴洗洁精滴入装有50ml自来水的烧杯中，把外植体放入烧杯轻轻搅拌5min，再用棉花清洗外植体表面污垢，自来水轻微流水冲洗20-30min；移置超净工作台，用75v/v％乙醇浸泡30s，无菌水冲洗一遍，然后再用添加了1-2滴吐温-20的50ml浓度为0.1v/v％升汞消毒1-2min、无菌水冲洗3-5次，获得无菌外植体，其中无菌水为经高高温压灭菌的蒸馏水；(2)无菌根状茎的获取：将消毒好的外植体置于诱导培养基中进行不定芽诱导，发芽得到无菌根状茎，所述诱导培养基是以1/2MS为基本培养基，添加5g·L-1琼脂，20g·L-1蔗糖，1.5mg·L-1的6-苄基腺嘌呤，0.3mg·L-1的萘乙酸，培养基pH值...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁萍，
申请(专利权)人：佛山市元诺科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44