本发明专利技术公开了针对细胞骨架蛋白β‑actin的纳米抗体及其决定抗体特异性的互补决定区(CDR)编码序列。所述抗体是含有SEQ ID NO:1所示CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:2所示CDR2氨基酸序列及SEQ ID NO:3所示CDR3氨基酸序列。本发明专利技术涉及的一种针对β‑actin纳米抗体能够良好地特异性结合细胞骨架蛋白β‑actin。
A nano antibody targeting cytoskeleton protein beta -actin and its coding sequence
The present invention discloses a nano-antibody against cytoskeleton protein beta actin and a complementary determinant region (CDR) coding sequence determining the specificity of the antibody. The antibody contains the CDR1 amino acid sequence shown in SEQ ID NO:1, the CDR2 amino acid sequence shown in SEQ ID NO:2 and the CDR3 amino acid sequence shown in SEQ ID NO:3. The invention relates to a nano-antibody against beta actin which can specifically bind to cytoskeleton protein beta actin.
【技术实现步骤摘要】
一种针对细胞骨架蛋白β-actin的纳米抗体及其编码序列
本专利技术涉及生物
，特别涉及针对细胞骨架蛋白β-actin纳米抗体的氨基酸序列、编码纳米抗体的核苷酸序列、能够表达所述纳米抗体的表达载体及宿主细胞。
技术介绍
Actin即“肌动蛋白”，是细胞的一种重要骨架蛋白。同时Actin在细胞分泌、吞噬、移动、胞质流动和胞质分离等过程中起重要作用。Actin在不同物种之间高度保守，以至于很难获得较好的针对actin的抗血清。β-actin是横纹肌肌纤维中的一种主要蛋白质成分，也是肌肉细丝及细胞骨架微丝的主要成分。具有收缩功能，分布广泛。β-actin由375个氨基酸组成，分子量大小为42-43kDa左右。在生物医学研究领域，β-actin的表达量常作为蛋白免疫印迹的内参指数。内参即是内部参照(InternalControl)，对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白。它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。β-actin的蛋白水平通常不会发生改变，因此被广泛用于蛋白免疫印迹时上样量是否一致的参照，也常被用于免疫染色观察细胞的微丝结构。纳米抗体(variabledomainoftheheavychainofHCAbs,VHH)是一种由天然缺失轻链的重链抗体可变区构成的小分子抗体(晶体结构直径2.5纳米，长度4纳米)，其最初是由比利时科学家在骆驼科动物体内发现。纳米抗体因其分子量小，具有亲和力高、稳定性强、组织相容性好及易筛选、易制备等特点，近年来在治疗型药物抗体、临床检测型抗体、科研运用型抗体等方面得到了广泛的研究与发展。纳米抗体的结构主要分为骨架区和互补决定区，前者在同源纳米抗体氨基酸序列中高度保守；主要负责纳米抗体基本结构的完整，后者主要针对不同的抗原出现复杂多样，其是抗原-抗体结合的决定区域。所以成功筛选的纳米抗体在于获得可以介导与抗原特异性结合的互补决定区。纳米抗体中的互补决定区(CDR)根据其在整个抗体中的位置不同，分为三个独立区域，即互补决定区1、互补决定区2和互补决定区3。
技术实现思路
本专利技术的首要目的是提供一种细胞骨架蛋白β-actin的纳米抗体，也可描述为针对细胞骨架蛋白β-actin的纳米抗体。本专利技术的第二个目的是提供一种针对β-actin的纳米抗体的互补决定区的编码序列。本专利技术的第三个目的是提供一种含有β-actin的纳米抗体的互补决定区的编码序列的表达载体。本专利技术的第四个目的是提供一种含有β-actin的纳米抗体的互补决定区的编码序列的表达载体的宿主细胞。为实现本专利技术的目的，提供了如下的技术方案：本专利技术的一种细胞骨架蛋白β-actin的纳米抗体，其特征在于：所述纳米抗体的互补决定区1、互补决定区2和互补决定区2分别含有SEQIDNO:1、SEQIDNO:2及SEQIDNO:3所示的氨基酸序列。本专利技术的一种细胞骨架蛋白的β-actin的纳米抗体的互补决定区1-3的编码序列：其互补决定区1-3的核苷酸序列，分别含有SEQIDNO:4、SEQIDNO:5及SEQIDNO:6所示的序列。本专利技术的一种含有细胞骨架蛋白的β-actin的纳米抗体的互补决定区1-3的编码序列(DNA序列)的表达载体，所述编码序列：其互补决定区1-3的核苷酸序列，分别含有SEQIDNO:4、SEQIDNO:5及SEQIDNO:6所示的序列。本专利技术的一种含有细胞骨架蛋白的β-actin的纳米抗体的互补决定区1-3的编码序列(DNA序列)的表达载体的宿主细胞，所述编码序列：其互补决定区1-3的核苷酸序列，分别含有SEQIDNO:4、SEQIDNO:5及SEQIDNO:6所示的序列，所述的宿主细胞为大肠杆菌。在具体实施方案中，本专利技术的一种针对细胞骨架蛋白β-actin的纳米抗体，所述抗体在其互补决定区1、互补决定区2及互补决定区3分别含有SEQIDNO:1、SEQIDNO:2及SEQIDNO:3所示的氨基酸序列。在具体实施方案中，本专利技术的一种能够编码所述针对细胞骨架蛋白β-actin的纳米抗体CDR1-3区域的核苷酸序列，所述CDR1-3的核苷酸序列是为含有SEQIDNO:4、SEQIDNO:5及SEQIDNO:6所示的序列。在具体实施方案中，本专利技术的一种表达载体，它所含细胞骨架蛋白β-actin纳米抗体CDR1-3区域的编码序列分别为SEQIDNO:4、SEQIDNO:5及SEQIDNO:6所示的核苷酸序列。本专利技术的一种大肠杆菌宿主细胞，它含有上述本专利技术的表达载体。本专利技术的针对细胞骨架蛋白β-actin的纳米抗体互补决定区能够致使所构成的纳米抗体与β-actin发生良好的特异性结合。附图说明：图1表达载体pET28a-β-actin-FLAG构建流程图。图2含有空载体pET28a或重组质粒pET28a-β-actin-FLAG的表达菌株诱导表达蛋白后，先用结合FLAG标签蛋白磁珠纯化，再经FLAG多肽洗脱，最后用SDS-PAGE蛋白电泳分析。图3为纳米抗体表达载体pET28a-NB001-His和pET28a-NBcontrol-His构建流程图。图4为含有空载体pET28a及构建的pET28a-NB001-His和pET28a-NBcontrol-His重组质粒的表达菌株表达蛋白后，经His标签蛋白纯化磁珠纯化，SDS-PAGE蛋白电泳分析后的结果。图5为免疫共沉淀法分析纳米抗体NB001-His、NBcontrol-His与β-actin结合能力的结果。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的阐述。所举实例只用于解释和理解本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。实施例1羧基端带有FLAG标签的β-actin重组蛋白的制备过程：(1)根据β-actin在NCBI中的编码基因序列(NCBIReferenceSequence：NM_001101.4)，及FLAG标签序列(美国Sigma公司)，人工合成5’端和3’端分别带有Nco1和HindⅢ酶切位点的表达β-actin-FLAG重组蛋白的基因(苏州金唯智生物科技有限公司)，DNA序列如SEQIDNO:9所示，编码的氨基酸序列如SEQIDNO:10所示。(2)利用Nco1和HindⅢ双酶(购买于英国NewEnglandBiolabs)切获得酶切后的β-actin-FLAGDNA片段和pET28aDNA片段，将β-actin-FLAGDNA片段用T4连接酶(购买于英国NewEnglandBiolabs)连接至pET28a表达载体，经过基因序列测定，最终获得正确的pET28a-β-actin-FLAG表达载体。(见图1)(3)将表达载体pET28a-β-actin-FLAG和对照表达载体pET28a分别转入基因工程菌BL21(中国天根公司)，获得表达β-actin-FLAG重组蛋白的工程菌和对照菌，并分别接种至100mlLB培养基中，37℃，250转/分钟摇晃培养至培养液OD600值为0.6，加入IPTG(工作浓度为1mM)，然后在18℃，200转/分钟摇晃培养12h。培养结束后，收集细菌，按照FLAG标签蛋白纯化磁珠(美国Sigma公司)使用说明书，裂解细菌并纯化β-actin-FLAG。(4)将结合β本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种细胞骨架蛋白β‑actin的纳米抗体，其特征在于：所述纳米抗体的互补决定区1、互补决定区2和互补决定区2分别含有SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2及SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。
【技术特征摘要】
1.一种细胞骨架蛋白β-actin的纳米抗体，其特征在于：所述纳米抗体的互补决定区1、互补决定区2和互补决定区2分别含有SEQIDNO:1、SEQIDNO:2及SEQIDNO:3所示的氨基酸序列。2.一种权利要求1的β-actin的纳米抗体的互补决定区1-3的编...
【专利技术属性】
技术研发人员：张臣良，唐子执，曾鸣，王小军，姜长安，
申请(专利权)人：成都百奥克林生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51
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